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猪瘟病毒E2基因的研究进展及其应用

随着分子生物学和免疫学技术的发展,人们对猪瘟的病毒蛋白、核酸结构及基因重组疫苗等方面进行了探索,尤其对E2基因的结构、功能及应用进行了深入的研究。$$1.猪瘟病毒分子结构的研究目前国内外已测出了12株具有代表性的猪瘟病毒基因组全序列,明确了猪瘟病毒大部分基因片段的分子结构与功能,其中5’结构蛋白编码区的基因定位已比较清楚,并对大部分结构与蛋白基因进行了克隆及表达,尤其对E2蛋白基因的研究和应用已十分广泛。$$2.猪瘟病毒E2基因结构与功能的研究 猪瘟病毒的囊膜糖蛋白E2,即gp55蛋白是研究得较为清楚的一种结构蛋白。在猪瘟病毒编码的蛋白中,E2蛋白由370个氨基酸残基组成,在感染细胞中,其分子量为51KD~58kD,主要是以同源二聚体形式存在于感染细胞或病毒粒子的表面,这主要是因为E2蛋白的羧基端有一段由约40个疏水性氨基酸残基构成的跨膜区。利用针对E2蛋白的各种单抗,已鉴定出猪瘟病毒E2具有4个主要抗原结构域,分别为A、B、C...  (本文共1页) 阅读全文>>

福建农林大学
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猪睾丸细胞多次传代的CSFV E2基因遗传变异及E2蛋白在细胞中表达的研究

猪瘟病毒(CSFV)E2基因是目前研制猪瘟基因工程疫苗的首选基因,其所编码的gp55蛋白是CSFV的主要保护性抗原。采用猪睾丸细胞(ST)做为受体细胞,结合使用哺乳动物细胞表达载体来表达E2基因,首先可充分利用受体细胞遗传密码子的嗜好性提高重组蛋白的表达量,另外因ST来源于猪,其后加工与其他表达宿主相比具有优越性,其疫苗的免疫保护力和免疫原性有望得到进一步提高,为CSFV基因工程苗推广应用奠定基础。本研究包括三个试验内容,首先对CSFV福建地方流行株FJ1和FJ2株的E2基因进行了克隆与测序,分析与猪瘟(CSF)疫苗C株的同源性,初步了解福建地方分离株的变异情况。其次利用反转录PCR(RT-PCR)和套式PCR(nPCR)方法,对多次ST传代的和多次动物传代的CSF石门强毒株(Shimen株)E2基因的序列分别进行了测定,并与标准Shimen株E2基因的核苷酸和氨基酸序列的同源性进行比较,旨在探讨CSFV在ST中多次传代后的遗传...  (本文共57页) 本文目录 | 阅读全文>>

西北农林科技大学
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猪瘟病毒E0-E2基因重组鸡痘病毒遗传稳定性和免疫剂量研究

猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的猪和野猪的一种高度致死性、接触性传染病,是严重威胁全球养猪业的疫病之一。猪瘟疫苗的免疫接种是预防猪瘟的一种有效手段。本文对猪瘟候选疫苗CSFV E0-E2基因重组鸡痘病毒活载体疫苗的毒种遗传稳定性和疫苗免疫剂量进行了研究,获得了以下结果。1.将重组鸡痘病毒rFPV-E0-E2在鸡胚成纤维细胞上连续传了20代,取第5、10、15和20代重组病毒,分别用蓝斑试验、PCR扩增和基因序列分析以及间接免疫荧光试验研究了重组病毒的遗传稳定性。结果各代次的重组病毒产生的蚀斑均为蓝色,从各代重组病毒DNA中均扩增出了E0和E2基因,基因序列分析发现仅第20代重组病毒插入基因发生2个点突变,即E0基因139A→G,E2基因413A→G。间接免疫荧光也能够检测到目的蛋白的表达。结果表明重组鸡痘病毒rFPV-E0-E2在鸡胚成纤维细胞上传20代以内具有良好的遗传稳...  (本文共71页) 本文目录 | 阅读全文>>

西北农林科技大学
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猪瘟病毒E2基因的表达及其间接ELISA诊断方法的研究

本研究试图从分子生物学角度来揭示目前猪瘟仍频繁发生的原因,为广泛开展CSFV分子流行病学的研究提供基础资料,为CSF的防制提供科学依据和理论支持,为猪瘟诊断提供稳定的标准诊断抗原及诊断方法。本论文由4部分构成:1.应用RT-PCR和nPCR扩增了7株国内近期流行的CSF野毒E2基因,分别克隆于pGEM-T Easy载体,对其进行了核苷酸序列测定及氨基酸序列推导,同时将其与C株,Alfort株,Brescia株进行了同源性比较及遗传进化分析,并构建了CSFV的遗传发生树。结果表明,7株流行野毒与C株,Alfort株,Brescia株核苷酸序列同源性分别为91.6%~94.5%,89.2%~92.7%和85.9%~89.3%,氨基酸同源性分别为91.2%~95.8%,88.9%~92.0%和84.0%~90.1%;而7株野毒之间的差异很小,其核苷酸序列同源性为95.8%~99.7%,氨基酸同源性为96.3%~99.1%。所绘制的遗传...  (本文共78页) 本文目录 | 阅读全文>>

西北农林科技大学
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猪瘟病毒E2基因乳腺特异表达载体的构建与细胞表达的研究

猪瘟是对养猪业危害严重的一种A类传染病,其致病原是猪瘟病毒(CSFV)。E2囊膜糖蛋白是CSFV的主要保护性抗原蛋白,应用真核细胞表达系统表达的E2蛋白免疫动物,对强毒的攻击有较好的保护作用。利用乳腺生物反应器生产有经济价值的生物活性蛋白已成为当前生物领域研究的热点,制备乳腺生物反应器的关键环节是构建高效、特异的表达载体,而β-乳球蛋白(BLG)是反刍动物乳汁中特异的主要乳清蛋白。本研究以牛β-乳球蛋白基因上游调控成分作为启动子,利用本实验室已有的猪瘟病毒E2基因,构建了E2基因的乳腺特异表达载体,并通过电穿孔方法转染体外培养的牛乳腺上皮细胞,以验证表达载体构建的合理性和E2蛋白的表达效率。并借助抗性基因Kana/neo(卡那霉素/新霉素抗性基因)和报告基因EGFP(增强型绿色荧光蛋白报告基因)来筛选、纯化阳性克隆细胞,为利用核移植技术制作转基因动物提供细胞来源,同时也为猪瘟基因工程疫苗的研究提供了一种手段。研究结果如下:利用P...  (本文共62页) 本文目录 | 阅读全文>>

贵州大学
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某猪场爆发猪瘟的诊断及其病毒E2基因表达载体的构建

猪瘟(Classical swine fever,CSF)是猪的一种高度接触性传染病,以发热和出血为主要特征。世界动物卫生织(OIE)将其列为16种A类传染病之一,我国亦将之列为一类动物传染病。目前,CSF主要分布在亚洲、非洲、南美洲和欧洲的40多个国家和地区。调查显示,现阶段CSF仍是对全球养猪业威胁最大的疾病,我国是猪瘟流行较严重的国家,我省各地也时常有猪瘟发生,每年因猪瘟死亡的猪占饲养总数的3%~5%,造成巨大的经济损失,因此对猪瘟的快速诊断和防制仍然具有十分重要的意义。2007年6月贵州铜仁某猪场爆发了疑似猪瘟的疫情,通过流行病学调查、临床症状观察、病理剖检变化、金标卡检测、兔体交互试验及RT-PCR实验诊断后确诊为猪瘟。然后根据GenBank登录的猪瘟病毒shimen, C株的E2基因序列设计一对特异引物,采摘病死猪的血液、扁桃体、淋巴结、脾、肾等组织提取总RNA,并进行RT-PCR扩增,通过电泳检测和测序后获得预期目...  (本文共89页) 本文目录 | 阅读全文>>