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几丁质酶(Chitinase)基因转化小麦的研究

本研究利用基因枪法、农杆菌法和花粉管通道法,首次将菜豆几丁质酶基因导入春小麦东农7742中,同时对转基因的表达和遗传进行了分析,对转基因植株的抗病性进行了观察。对影响转化的各种因素和转基因小麦研究中存在的问题提出了自己的见解。主要研究结果如下:1.利用PDS1000/He型高压氦气基因枪,以携带菜豆几丁质酶基因的质粒DNA轰击小麦萌动幼胚8139块,在东农7742To代获得经PCR扩增和PCR-Southern杂交证实的转基因小麦植株7株,转基因植株分属4个不同轰击参数的组合,转化率分别为0.56%、0.36%、0.20%和0.35%;利用农杆菌介导法和利用基因枪与农杆菌协同转化法转化东农7742小麦幼胚愈伤,共感染外植体1546块,获得转化愈伤组织的频率分别为0.46%和0.32%,但转化愈伤未能再生植株;利用花粉管通道法将菜豆几丁质酶基因导入小麦东农7742,共操作小花385个,获得2株转化植株,转化率为0.52%;三种转化  (本文共89页) 本文目录 | 阅读全文>>

四川农业大学
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小麦成熟胚受体筛选及基因枪法转几丁质酶基因植株获得和插入位点研究

小麦是世界上最重要的农作物之一,也是我国种植面积最广的主要农作物之一,小麦的稳产高产直接关系着我国的经济发展和国民生活水平的提高。然而由于自然灾害、病虫害等因素的影响,使得小麦的产量大幅度下降。因此,努力提高小麦的产量和质量是现在小麦育种所面临的首要问题。基因工程育种克服了传统的育种方法育种周期长等的弱点,为小麦育种提供了一条更新的途径。通过基因工程育种,将抗虫、抗病、抗逆、增产等基因转入小麦中已经成为小麦育种的主要目的。另外,直接对农艺性状优良的小麦品种进行转基因研究会更快速的得到具有应用价值的小麦新品种。因此,筛选出具有优良组织培养特性的高产小麦品种,对小麦基因工程的发展有着重要的意义。本研究选择7个小麦品种绵阳11、川农20、川农21、川农23、川农24、川农25、川农26为实验材料,剥取小麦成熟胚并将胚根切除后进行组织培养,通过观察其组织培养特性筛选出了绵阳11和川农23这两个具有优良组培特性并且农艺性状较好的小麦基因型...  (本文共61页) 本文目录 | 阅读全文>>

山东农业大学
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几丁质酶和内切葡聚糖酶编码基因的克隆及重组芽孢杆菌的构建

本研究旨在从两株生防菌中分别克隆几丁质酶和内切葡聚糖酶的编码基因,并进行测序。将所获得的基因同穿梭质粒连接,转化野生型植病生防芽孢杆菌菌株,通过平板拮抗实验和盆栽试验检测获得的转化子对病原菌的拮抗作用的大小。本实验室从泰安郊区小麦根际及来自澳大利亚的小麦根际土样中,经分离筛选出两株芽孢杆菌,枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Ap113和巨大芽孢杆菌(B.megaterium)Ap25,两个菌株对小麦纹枯病和全蚀病都有防治效果;利用几丁质培养基和羧甲基纤维素培养基对这两株菌进行酶活性检测,已证实这两株菌分别具有几丁质酶和内切葡聚糖酶活性。几丁质酶基因的克隆:根据GeneBank上已有的枯草芽孢杆菌几丁质酶基因的编码序列,设计一对简并引物,根据引物的Tm值和GC含量选择适宜的PCR条件进行PCR,PCR产物与pMD18-T载体连接,转化E.coliDH5α,蓝白斑筛选得到23株菌株,在几丁质平板上筛选阳性克隆子4株。...  (本文共70页) 本文目录 | 阅读全文>>

东北林业大学
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二色补血草两个几丁质酶基因克隆及功能研究

几丁质酶是一种能降解几丁质及其衍生物的糖基水解酶,它能催化真菌细胞壁的重要成分—几丁质的水解,从而抑制真菌的生长增殖,提高植物的抗真菌能力。虽然植物中并不存在几丁质物质但几丁质酶却广泛存在于植物中。近年来,随着对其作用机理、生化性质、表达调控的深入研究,用几丁质酶基因转化植株正日益成为植物防御真菌病害的有效途径。本研究克隆了二色补血草两个几丁质酶基因chi31和chi32。cDNA的GenBank接受号分别为DQ431248和DQ431249;DNA的GenBank接受号分别为EU744178和EU744179。通过对病原真菌胁迫后二色补血草chi31和chi32的表达情况的定量研究表明,当用土传病害(尖孢镰刀菌)侵染根部时,在根部chi31大量表达,而chi32表达量很低;而在叶部两基因表达量基本一致。当用从二色补血草中分离出的真菌病原菌侵染二色补血草叶部时,chi32始终是上调表达,而chi31表现出上调下调表达交替出现。两...  (本文共85页) 本文目录 | 阅读全文>>

福建农林大学
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几丁质酶基因和几丁质酶—葡聚糖酶双价基因导入西瓜的研究

西瓜(Citrullus lanatus(Thunb.)Mansfeld(syn.C.vulgaris Schrad))是一种经济价值很高的世界性水果,但其病害种类繁多,尤以枯萎病等真菌性土传病害最为严重,是生产中存在的主要问题。由于西瓜遗传基础狭窄,抗病种质资源缺乏,抗病性遗传规律复杂而导致传统抗病育种进展缓慢。此外,病原微生物多态性强、变异广泛也是一个原因。目前植物抗病基因工程在一些重要物种的改良中取得了一定进展,但该技术在瓜类作物中的应用研究起步较晚,加之瓜类作物尤其是西瓜存在组培再生困难、试管苗移栽成活率低和遗传转化体系较难优化等问题,因而这方面的研究较为落后。本实验对西瓜组织培养体系进行了系统研究,优化了农杆菌介导的西瓜遗传转化体系。构建了含有番茄几丁质酶基因(Chi3)的植物表达载体及同时含有番茄几丁质酶基因(Chi3)和β-1,3-葡聚糖酶基因(Glu-Ac)的双价抗真菌基因植物表达载体,用于转化西瓜,成功的获得了...  (本文共100页) 本文目录 | 阅读全文>>

西北农林科技大学
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中国春小麦几丁质酶基因克隆、染色体定位、原核表达及表达量分析

几丁质酶是一种能够分解几丁质的酶,它几乎分布在整个生物界,从动物、植物到微生物。近年来,人们发现几丁质酶可以通过分解真菌细胞壁中的几丁质来抑制细菌的生长,从而可以帮助人们培育出抗白粉病、条锈病的小麦新品种。然而由于小麦复杂的基因组结构,导致普通小麦关于几丁质酶的研究远远落后于其他植物。为了能够深入的研究小麦几丁质酶的构成,以及不同亚型的几丁质酶在小麦籽粒灌浆期间的表达情况,本实验利用已有的小麦和大麦几丁质酶基因的序列设计一对引物,从普通小麦品种(中国春)中分离出几丁质酶基因,对该基因及其推导的蛋白质序列进行分析,同时利用中国春缺四体材料对分离得到的几丁质酶不同亚基进行染色体定位,同时对定位成功的几丁质酶亚基进行原核表达,最后利用实验室的表达谱数据分析不同亚基的表达情况。结果如下:1.从中国春中分离出了30条完整的ClassⅠ型几丁质酶,与GenBank已有的几丁质酶基因序列具有一定的同源性,确定这些基因是几丁质酶基因,根据序列在...  (本文共47页) 本文目录 | 阅读全文>>