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新城疫病毒F基因与鸡IL-2重组DNA疫苗的研究

本文在成功构建鸡新城疫F基因疫苗,并观察了免疫SPF雏鸡后诱导的免疫应答及免疫保护作用基础上,首次系统研究了鸡IL-2在鸡新城疫F基因疫苗免疫中的作用,证实了国内首次克隆成功的鸡IL-2基因的免疫增强作用,及作为免疫佐剂应用于禽类基因免疫的可行性;在此基础上,为进一步提高F基因疫苗免疫效率,又成功地构建了鸡新城疫病毒F基因与鸡IL-2重组DNA疫苗,研究了其接种SPF雏鸡后免疫鸡只T、B淋巴细胞增殖反应和抗体变化规律,以及强毒攻击后的免疫保护作用。研究结果如下:1.新城疫病毒F基因疫苗研究用新城疫病毒D26株F基因的cDNA与含人巨细胞病毒CMV启动子的真核表达载体pcDNA3重组,构建了新城疫F基因疫苗(pcDNA-F)。直接免疫接种SPF鸡后免疫鸡产生了针对新城疫病毒的抗体,免疫接种后前2周,免疫鸡的抗体产生并不明显,第3周后出现稍为明显的抗体反应。攻毒后,免疫鸡的抗体回忆反应十分迅速和强烈,出现一个较陡而又较高的峰值。而非  (本文共95页) 本文目录 | 阅读全文>>

《病毒学报》2008年01期
病毒学报

稳定携带新城疫病毒DNA疫苗减毒沙门氏菌的构建及其免疫原性

新城疫(Newcastle disease,ND)是危害养禽业的主要传染病之一,是国际兽疫局(OIE)确定的法定通报疾病(Listed disease)[1]。目前,在新城疫免疫预防中使用的常规疫苗主要有各种不同毒力的弱毒疫苗和油乳剂灭活疫苗。有些弱毒疫苗保留了部分毒性,对雏鸡仍有一定的致死率[2],而且弱毒苗还能引起鸡呼吸道的温和病变,增强了对其他病原的易感性。灭活疫苗虽然能产生高水平的循环抗体,但是不能有效刺激机体产生细胞免疫和黏膜免疫。因此,寻求一种新型的、更为安全有效的疫苗,对于新城疫的综合防治具有重要的现实意义。研究表明,利用减毒沙门氏菌载体运送DNA疫苗,具有同时激发机体产生细胞免疫、体液免疫和黏膜免疫应答,并可获得对载体菌的免疫等优点,有着良好的应用前景[3-6]。但是,高拷贝外源性真核表达质粒在细菌中的稳定性问题是影响沙门氏菌介导的DNA疫苗免疫效果的关键因素之一[7-9]。为此,本研究在真核表达载体pmcDNA...  (本文共6页) 阅读全文>>

《东北农业大学学报》2007年03期
东北农业大学学报

DNA疫苗免疫机制及预防新城疫病毒的研究进展

上世纪90年代,WO班等11服道裸基因也可以在肌肉细胞中表达蛋白,并刺激机体产生相应免疫应答,这次意外的发现成为基因免疫的开始。基因疫苗作为一种新型疫苗自问世以来,在短短几年间发展非常迅速。1994年5月WHO核酸疫苗会议提议,凡采用DNA质粒载体作为免疫分子的研究,称为DNA为基础的免疫或DNA介导的免疫,简称为DNA免疫冈。DNA免疫作为一种分子疫苗,具有安全、低价、热稳定好的特点。DNA疫苗包含保护性免疫原,因此选择适当载体可一次口服完成,是继前活载体疫苗和亚单位疫苗后的第三代疫苗。1 ONA疫苗免疫机制Ll免疫途径传统疫苗中,强毒灭活苗经非口服途径进入机体,如皮下、皮内或肌肉接种;弱毒活疫苗则可经滴鼻、点眼、口服等途径进人机体。而DNA疫苗的接种途径根据启动子的来源有所不同,用动物病毒和哺乳动物启动子构建的DNA疫苗,一般选择肌肉、皮下、腹腔内、静脉内接种;而用乳腺WAP启动子构建的疫苗,在乳腺和皮下脂肪接种效果更为理想...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国动物传染病学报》2009年02期
中国动物传染病学报

密码子优化增强新城疫病毒DNA疫苗的表达水平和免疫效果

新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)属于副黏病毒科腮腺炎病毒属,是一种高致病性病毒,对禽类危害较大,是世界公认的两大重要禽病之一[1]。本病的死亡率极高,强毒力毒株可以引起的感染常达100%,已经遍布世界各地。目前,我国对于新城疫主要采用油佐剂灭活疫苗或弱毒活疫苗等传统疫苗进行免疫预防。其中,灭活疫苗具有保护率高、免疫期长、研制周期短等优点,但其最大不足是疫苗接种后产生的抗体与自然感染鸡难以区分,影响流行病学调查,不利于对新城疫的监控;而且灭活疫苗成本较高、免疫反应强,存在因灭活不全而散毒的危险,常规弱毒活疫苗也存在类似的安全问题[2]。因此,有必要探寻新型ND疫苗以弥补上述不足,而DNA疫苗则为实现这一目标提供了可能[3]。NDV含有一条单股、负链RNA,基因组全长15 186个核苷酸(bp),可编码6种结构蛋白,其中HN和F蛋白是决定毒力、免疫原性的主要因素。其中,F蛋白是NDV的最为关键的蛋...  (本文共9页) 阅读全文>>

哈尔滨师范大学
哈尔滨师范大学

基因Ⅶ型新城疫病毒DNA疫苗的构建及免疫效力研究

新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的侵害禽类的急性、高度接触性传染病。自1926年首次暴发于印度尼西亚的爪哇岛和英国的新城以来,给养禽业带来了极大的危害,被世界动物卫生组织定为法定必报传染病。随着新城疫流行病学的变化,近年来出现了能够引起免疫鸡群发生“非典型性新城疫”及鹅、鸭发病死亡的基因Ⅶ型新城疫病毒。非典型新城疫虽死亡率不高,但会导致家禽类生产性能下降,因而对其的防治尤为重要。目前应用ND疫苗以基因Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型为主,在很大程度上控制了新城疫的流行,但对基因Ⅶ型新城疫病毒保护效果欠佳,因此研制针对基因Ⅶ型NDV的新型疫苗势在必行。DNA疫苗是继传统疫苗及基因工程亚单位疫苗之后的第三代疫苗,能同时激发体液免疫和细胞免疫,免疫持续时间比较长,具有许多其他基因疫苗无可比拟的优点,可以作为有效控制目前新城疫流行的候选疫苗之一。本研究选用分离自黑龙江省拉林地区死亡鹅的NDV Go/CH/HLJ/LL01/08毒株(基因Ⅶ型毒株,...  (本文共59页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国兽医学报》2003年06期
中国兽医学报

减毒沙门氏菌为载体传递DNA疫苗诱导对新城疫病毒的免疫保护

利用侵袭性胞内细菌作为载体传递外源抗原基因疫苗是目前基因免疫研究的热点 ,因为它可将质粒 DNA直接呈递给抗原提呈细胞 ( APC) ,携带质粒 DNA的细菌在 APC细胞内发生溶解或以宿主吞噬小体为桥梁进入胞质 ,并将 DNA释放到细胞核 ,使抗原基因在体内进行表达而诱导相应的细胞免疫和体液免疫反应。沙门氏菌是一种胞内侵袭性细菌 ,通过各种方法减毒的沙门氏菌 ,虽然失去了对动物的致病性 ,但不影响其在体内的繁殖和侵袭能力。国外学者以减毒沙门氏菌为载体在真核细胞中成功地表达了 lac Z基因、绿荧光蛋白( GFP)基因、HIV- gp14 0基因、李斯特菌溶血素基因等 [1~ 4 ] ,结果证实 ,利用减毒沙门氏菌作为载体传递 DNA疫苗具有良好的免疫原性。新城疫病毒 ( Newcastle disease virus,NDV)为有囊膜的负链 RNA病毒 ,F蛋白参与病毒脂蛋白囊膜与宿主细胞膜的融合 ,是决定 NDV毒力的主要...  (本文共4页) 阅读全文>>