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新城疫病毒F48E8株融合蛋白基因和表达该基因的重组鸡痘病毒

新城疫(ND)是对养禽业危害最大的病毒性传染病之一,而新城疫病毒(NDV)F_(48)E_8株则是中国的标准嗜内脏速发型强毒。为了明确NDV F_(48)E_8株的致病机理,同时也为了研制免疫保护率高、保护期长的ND基因工程疫苗,本研究对与F_(48)E_8株致病性和免疫原性密切相关的融合蛋白(F)基因进行了克隆、序列分析,构建了表达该基因的重组鸡瘟病毒(rFPV),并测定了rFPV的免疫效力。现从四个方面概述如下:一、以酚-SDS法提纯的NDV F_(48)E_8株基因组RNA为模板,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR),分别扩增到长为926bP的糖蛋白基因片段和长为1710bP的F基因。以Digoxigenin标记的糖蛋白基因核酸探针能特异性地检测NDV基因组RNA,而与其它病毒RNA不发生反应。F基因RT-PCR产物则被插入到质粒载体的多克隆位点,经酶切分析和Southern分子杂交筛选到阳性重组质粒克隆pF37。二、对  (本文共98页) 本文目录 | 阅读全文>>

扬州大学
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新城疫病毒F_(48)E_8株融合蛋白基因和表达该基因的重组鸡痘病毒

新城疫(ND)是对养禽业危害最大的病毒性传染病之一,而新城疫病毒(NDV)F_(48)E_8株则是中国的标准嗜内脏速发型强毒。为了明确NDV F_(48)E_8株的致病机理,同时也为了研制免疫保护率高、保护期长的ND基因工程疫苗,本研究对与F_(48)E_8株致病性和免疫原性密切相关的融合蛋白(F)基因进行了克隆、序列分析,构建了表达该基因的重组鸡痘病毒(rFPV),并测定了rFPV的免疫效力。现从四个方面概述如下:一、以酚—SDS法提纯的NDV F_(48)E_8株基因组RNA为模板,采用反转录聚合酶链反应(RT—PCR),分别扩增到长为926bp的糖蛋白基因片段和长为1710bp的F基因。以Digoxigenin标记的糖蛋白基因核酸探针能特异性地检测NDV基因组RNA,而与其它病毒RNA不发生反应。F基因RT—PCR产物则被插入到质粒载体的多克隆位点,经酶切分析和Southern分子杂交筛选到阳性重组质粒克隆pF37。二、对...  (本文共99页) 本文目录 | 阅读全文>>

南京农业大学
南京农业大学

表达新城疫病毒F_(48)E_8株融合蛋白基因的重组鸡痘病毒的构建及其免疫效力检测

新城疫(ND)是对养禽业危害最大的病毒性传染病之一,而新城疫病毒(NDV)F_(48)E_8株则是中国的标准强毒。为了研制有效的ND基因工程疫苗,本实验构建了表达NDV F_(48)E_8株融合蛋白(F蛋白)基因的重组鸡痘病毒(rFPV),并测定了rFPV的免疫效力,为NDV基因工程苗今后的开发提供了试验基础。现将本实验所做的工作从两个方面概述如下:1.从含有NDV F_(48)E_8 F基因的质粒PE1/E2-3,运用PCR法扩增的F基因,并将基因定向克隆到转移载体pEFgpt12S的Ecogpt基因下游,构建成转移载体pEF-2。以磷酸钙转染的方法转染含有F基因的重组鸡痘病毒rFPVNDF感染的鸡胚成纤维细胞,经有限稀释法挑取病毒蚀斑,;利用MXHAT培养基而进行负性筛选,得到了稳定生长新的重组鸡痘病毒rFPV-2。该重组毒具有两个F基因。间接免疫荧光试验表明,rFPV-2感染的鸡胚成纤维细胞中表达了NDV的F基因,与rFP...  (本文共54页) 本文目录 | 阅读全文>>

《生物工程学报》2000年05期
生物工程学报

表达新城疫病毒F48E8株融合蛋白基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力

新城疫 (NewcastleDisease ,ND)是鸡的一种烈性、病毒性传染病 ,被国际兽疫局列为对动物危害最大的A类传染病之一 ,每年给国家造成上百亿元的经济损失。本病病原为新城疫病毒 (NDV) ,分类上归于副粘病毒科、腮腺炎病毒属 ,是一种有囊膜的单链、不分节段、负极性RNA病毒。位于NDV囊膜上的两种糖蛋白为融合蛋白 (F)和血凝素 -神经氨酸酶 (HN) ,与病毒的致病性和免疫原性密切相关。其中F负责病毒穿入细胞 ,产生细胞融合和溶血作用 ;HN负责病毒吸附到细胞受体和破坏细胞受体。F常以Fo前体的形式被合成 ,Fo经宿主细胞酶切割成具有生物活性的F1和F2多肽 ,F1多肽起融合作用。Fo酶切部位的氨基酸序列决定其能否被宿主细胞酶识别 ,因而决定了病毒的毒力[1] 。由于NDV强毒在我国流行非常普遍 ,而常规疫苗的短期免疫保护率虽高 ,免疫期却不长 ,致使鸡的整个饲养期内需要多次使用疫苗。在存在各种免疫抑制因素的情况...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国家禽》2017年14期
中国家禽

邵武市鸭群新城疫病毒感染现状分析

新城疫是一种禽类的烈性传染病,对家禽危害极大。新城疫病毒原始宿主为鸡,经过世界范围的几次大流行后,其宿主范围明显扩大,现已报道鹅[1]、鸭[2]、企鹅[3]、孔雀[4,5]、鸽[6]、鸵鸟[7]等均能感染发病。近年来新城疫病毒的致病力和宿主范围发生了变化,特别对鹅表现出较强致病性[2],对鸭也开始表现致病性[1],打破了鸭和鹅等水禽只带毒而不发病的论点。吴峻华[8]2006年对福州市的部分鸭场进行新城疫病毒抗体监测发现血清阳性率达28.7%。黄金龙等[9]对福州周边地区鸭场新城疫病毒抗体检测发现,新城疫病毒抗体阳性率高达57.66%,其中马尾、晋安区高达75%以上。表明福建省鸭存在新城疫病毒感染,并且感染率逐年提高,但临床上没有发病,说明鸭群对新城疫病毒存在天然抗性。为了掌握邵武市鸭新城疫病毒感染情况,2016年秋季动物防疫抗体集中监测时,采用新城疫病毒抗原对该市19个乡镇、街道办事处的鸭散养户和部分鸭场共177份血清样品进行了...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国动物检疫》2017年09期
中国动物检疫

我国新出现基因Ⅻ型新城疫病毒的分布及特性

新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)强毒株感染引起的一种急性、高度接触性禽类烈性传染病,其不仅对家禽造成严重损害,还会影响国际贸易。世界动物卫生组织(OIE)将ND列为必须报告的动物疫病。我国将其列为一类动物疫病,并在《国家中长期动物疫病防治规划(2012—2020年)》中列为优先防治和重点防控的动物疫病之一[1]。NDV具有遗传学多样性,可分为Class I和Class II两类,每类又可进一步分为多种基因型或基因亚型。目前Class II至少包括18个基因型[2]。其中,不同基因型病毒具有一定的宿主特异性和地域分布特征[3]。监测表明,基因VI型和VII型是我国目前流行的主要优势基因型,其中基因VI型主要在鸽群中流行,而基因VII型则主要在鸡和水禽中流行。目前在东南亚、中亚等地区流行的NDV与在我国流行的病毒具有一定的差异性。因此,在ND防...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国兽医学报》2017年08期
中国兽医学报

新城疫病毒样颗粒对树突状细胞成熟的影响

新城疫病毒样颗粒(Newcastle disease virus-(40000MW)购自美国Sigma公司;流式抗体Anti-like particles,NDV VLPs)是由基质蛋白(M)为病Mouse CD11cFITC、Anti-Mouse MHC-ⅡPE、An-毒骨架,装配血凝素-神经氨酸酶和/或融合蛋白等。ti-Mouse CD40 PE、Anti-Mouse CD80 PE、Anti-2006年,PANTUA等[1]以NDV作为副黏病毒家Mouse CD86PE购自美国eBioscience公司;胎牛血族的模式代表,建立了以禽成纤维细胞系ELL-0为清、RPMI-1640液、双抗购自Thermo公司(Gibco基础的VLP表达系统,发现单独表达M蛋白即可品牌);小鼠淋巴细胞分离液购自深圳达科为公司;促使VLPs的有效形成与释放,只是直径小于真实C57BL/6小鼠购自辽宁长生生物技术有限公司,许的NDV粒子;与M蛋白...  (本文共6页) 阅读全文>>