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新城疫病毒F48E8株融合蛋白基因和表达该基因的重组鸡痘病毒

新城疫(ND)是对养禽业危害最大的病毒性传染病之一,而新城疫病毒(NDV)F_(48)E_8株则是中国的标准嗜内脏速发型强毒。为了明确NDV F_(48)E_8株的致病机理,同时也为了研制免疫保护率高、保护期长的ND基因工程疫苗,本研究对与F_(48)E_8株致病性和免疫原性密切相关的融合蛋白(F)基因进行了克隆、序列分析,构建了表达该基因的重组鸡瘟病毒(rFPV),并测定了rFPV的免疫效力。现从四个方面概述如下:一、以酚-SDS法提纯的NDV F_(48)E_8株基因组RNA为模板,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR),分别扩增到长为926bP的糖蛋白基因片段和长为1710bP的F基因。以Digoxigenin标记的糖蛋白基因核酸探针能特异性地检测NDV基因组RNA,而与其它病毒RNA不发生反应。F基因RT-PCR产物则被插入到质粒载体的多克隆位点,经酶切分析和Southern分子杂交筛选到阳性重组质粒克隆pF37。二、对  (本文共98页) 本文目录 | 阅读全文>>

扬州大学
扬州大学

新城疫病毒F_(48)E_8株融合蛋白基因和表达该基因的重组鸡痘病毒

新城疫(ND)是对养禽业危害最大的病毒性传染病之一,而新城疫病毒(NDV)F_(48)E_8株则是中国的标准嗜内脏速发型强毒。为了明确NDV F_(48)E_8株的致病机理,同时也为了研制免疫保护率高、保护期长的ND基因工程疫苗,本研究对与F_(48)E_8株致病性和免疫原性密切相关的融合蛋白(F)基因进行了克隆、序列分析,构建了表达该基因的重组鸡痘病毒(rFPV),并测定了rFPV的免疫效力。现从四个方面概述如下:一、以酚—SDS法提纯的NDV F_(48)E_8株基因组RNA为模板,采用反转录聚合酶链反应(RT—PCR),分别扩增到长为926bp的糖蛋白基因片段和长为1710bp的F基因。以Digoxigenin标记的糖蛋白基因核酸探针能特异性地检测NDV基因组RNA,而与其它病毒RNA不发生反应。F基因RT—PCR产物则被插入到质粒载体的多克隆位点,经酶切分析和Southern分子杂交筛选到阳性重组质粒克隆pF37。二、对...  (本文共99页) 本文目录 | 阅读全文>>

《生物工程学报》2000年05期
生物工程学报

表达新城疫病毒F48E8株融合蛋白基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力

新城疫 (NewcastleDisease ,ND)是鸡的一种烈性、病毒性传染病 ,被国际兽疫局列为对动物危害最大的A类传染病之一 ,每年给国家造成上百亿元的经济损失。本病病原为新城疫病毒 (NDV) ,分类上归于副粘病毒科、腮腺炎病毒属 ,是一种有囊膜的单链、不分节段、负极性RNA病毒。位于NDV囊膜上的两种糖蛋白为融合蛋白 (F)和血凝素 -神经氨酸酶 (HN) ,与病毒的致病性和免疫原性密切相关。其中F负责病毒穿入细胞 ,产生细胞融合和溶血作用 ;HN负责病毒吸附到细胞受体和破坏细胞受体。F常以Fo前体的形式被合成 ,Fo经宿主细胞酶切割成具有生物活性的F1和F2多肽 ,F1多肽起融合作用。Fo酶切部位的氨基酸序列决定其能否被宿主细胞酶识别 ,因而决定了病毒的毒力[1] 。由于NDV强毒在我国流行非常普遍 ,而常规疫苗的短期免疫保护率虽高 ,免疫期却不长 ,致使鸡的整个饲养期内需要多次使用疫苗。在存在各种免疫抑制因素的情况...  (本文共4页) 阅读全文>>

南京农业大学
南京农业大学

表达新城疫病毒F_(48)E_8株融合蛋白基因的重组鸡痘病毒的构建及其免疫效力检测

新城疫(ND)是对养禽业危害最大的病毒性传染病之一,而新城疫病毒(NDV)F_(48)E_8株则是中国的标准强毒。为了研制有效的ND基因工程疫苗,本实验构建了表达NDV F_(48)E_8株融合蛋白(F蛋白)基因的重组鸡痘病毒(rFPV),并测定了rFPV的免疫效力,为NDV基因工程苗今后的开发提供了试验基础。现将本实验所做的工作从两个方面概述如下:1.从含有NDV F_(48)E_8 F基因的质粒PE1/E2-3,运用PCR法扩增的F基因,并将基因定向克隆到转移载体pEFgpt12S的Ecogpt基因下游,构建成转移载体pEF-2。以磷酸钙转染的方法转染含有F基因的重组鸡痘病毒rFPVNDF感染的鸡胚成纤维细胞,经有限稀释法挑取病毒蚀斑,;利用MXHAT培养基而进行负性筛选,得到了稳定生长新的重组鸡痘病毒rFPV-2。该重组毒具有两个F基因。间接免疫荧光试验表明,rFPV-2感染的鸡胚成纤维细胞中表达了NDV的F基因,与rFP...  (本文共54页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国兽医学报》2017年08期
中国兽医学报

新城疫病毒样颗粒对树突状细胞成熟的影响

新城疫病毒样颗粒(Newcastle disease virus-(40000MW)购自美国Sigma公司;流式抗体Anti-like particles,NDV VLPs)是由基质蛋白(M)为病Mouse CD11cFITC、Anti-Mouse MHC-ⅡPE、An-毒骨架,装配血凝素-神经氨酸酶和/或融合蛋白等。ti-Mouse CD40 PE、Anti-Mouse CD80 PE、Anti-2006年,PANTUA等[1]以NDV作为副黏病毒家Mouse CD86PE购自美国eBioscience公司;胎牛血族的模式代表,建立了以禽成纤维细胞系ELL-0为清、RPMI-1640液、双抗购自Thermo公司(Gibco基础的VLP表达系统,发现单独表达M蛋白即可品牌);小鼠淋巴细胞分离液购自深圳达科为公司;促使VLPs的有效形成与释放,只是直径小于真实C57BL/6小鼠购自辽宁长生生物技术有限公司,许的NDV粒子;与M蛋白...  (本文共6页) 阅读全文>>

《中国畜禽种业》2009年11期
中国畜禽种业

新城疫病毒分子生物学研究进展

新城疫是由新城疫病毒(NDV)引起的一种能导致大多数禽类消化道、胃肠道和中枢神经系统损伤为主要特征的、急性高度接触性传染病。1926年该病首次被发现于印度尼西亚的爪哇,1927年Doyle在英国的新城首次分离报道并将其命名为新城疫病毒,引起的疾病称为新城疫。我国于1948年分离到NDV,但据载1935年曾有过“鸡瘟”流行,可能是由NDV引起。近年来,随着分子生物学技术的成熟,根据NDV基因的核苷酸和氨基酸顺序对NDV分离株进行分类逐渐成为NDV分子流行病学研究的热点。Toyoda等首先根据NDV F或HN全基因两种核苷酸序列分别对60年代前流行于世界各地的NDV分离毒株绘制进化树,结果将分离的11个毒株分为A、B、C三组,这说明F和HN基因的变异具有很强的正相关性。Yang等在1997年根据HN基因头部保守区的382nt核苷酸片段对1884~1995年分离于流行台湾的14株NDV分离株进行系统发育进化分析,证明1995年分离株明...  (本文共1页) 阅读全文>>

《中国兽医学报》2008年11期
中国兽医学报

异源新城疫病毒感染对雏鸭组织抗氧化酶活性的影响

目前,已知许多疾病的发生都与机体内的自由基有关。机体在正常情况下体内自由基的产生和清除保持着动态平衡。但在某些情况下,如感染了某些病毒或者是机体的某些功能发生了紊乱,从而打破了这种动态平衡,使自由基的产生远远超出了清除的水平,自由基在体内越积越多,引起了多种细胞成分发生改变,甚至使细胞受到损伤;因而机体表现出病态[1]。机体内自由基的清除主要依靠体内的各种抗氧化酶,例如超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等。这些酶不但协同防止自由基损伤效应而且相互间起着保护作用[2]。另外自由基引发的组织损伤是通过脂质过氧化反应实现的[3]。检测组织及血液中的各类抗氧化酶活性及MDA含量,是研究机体抗氧化损伤的方法之一。进入20世纪80年代,出现了“非典型”新城疫,并且广泛流行,这几年又表现得特别突出,并且能在高免的禽类中发生并且流行。国内外对此病的研究主要在鸡病方面,但近年来,鸭...  (本文共4页) 阅读全文>>