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新城疫病毒F48E8株融合蛋白基因和表达该基因的重组鸡痘病毒

新城疫(ND)是对养禽业危害最大的病毒性传染病之一,而新城疫病毒(NDV)F_(48)E_8株则是中国的标准嗜内脏速发型强毒。为了明确NDV F_(48)E_8株的致病机理,同时也为了研制免疫保护率高、保护期长的ND基因工程疫苗,本研究对与F_(48)E_8株致病性和免疫原性密切相关的融合蛋白(F)基因进行了克隆、序列分析,构建了表达该基因的重组鸡瘟病毒(rFPV),并测定了rFPV的免疫效力。现从四个方面概述如下:一、以酚-SDS法提纯的NDV F_(48)E_8株基因组RNA为模板,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR),分别扩增到长为926bP的糖蛋白基因片段和长为1710bP的F基因。以Digoxigenin标记的糖蛋白基因核酸探针能特异性地检测NDV基因组RNA,而与其它病毒RNA不发生反应。F基因RT-PCR产物则被插入到质粒载体的多克隆位点,经酶切分析和Southern分子杂交筛选到阳性重组质粒克隆pF37。二、对  (本文共98页) 本文目录 | 阅读全文>>

西北农林科技大学
西北农林科技大学

基因芯片检测新城疫病毒和PCR结合内切酶分析鉴别新城疫强弱毒株的研究

新城疫(New Castle Disease,ND)是新城疫病毒引起的一种急性、高度接触性禽类传染病,被世界动物卫生组织(OIE)定为A类传染病。新城疫病毒(NDV)是副黏病毒科、副黏病毒亚科、腮腺炎病毒属的成员,为有囊膜的负链RNA病毒,可存在于病禽的所有组织器官、体液、分泌物和排泄物中。目前国内对于新城疫的诊断,主要是采用传统的病原分离鉴定及血凝抑制试验(HI)等血清学试验,与西欧、美国和日本等一些国家所采用的分子生物学诊断方法相比,技术上有较大的差距。我国加入WTO后,禽类产品国际贸易进一步增加,但传染病病原检测技术上的差距在禽类产品检验检疫中表现得更为突出,使我国禽类产品贸易在国际竞争中处于劣势。为改变这一不利局面,研究先进的传染病病原检测方法已成为当务之急。OIE推荐的诊断新城疫的方法有病毒分离鉴定,HI,鸡胚平均死亡时间(MDT)、1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)、6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI)等致病指数...  (本文共80页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国科学院研究生院(上海生命科学研究院)
中国科学院研究生院(上海生命科学研究院)

水稻齿叶矮缩病毒的分子生物学研究及新城疫病毒检测新技术

本论文第一部分主要对水稻齿叶矮缩病毒(Rice ragged stunt virus,RRsv)的结构蛋白(Pg)和非结构蛋白(Pns6,Pnslo)的功能进行了研究。水稻齿叶矮缩病毒是分布于东南亚和我国南方地区引发水稻病毒病的一种植物呼肠孤病毒,是植物呼肠孤病毒组第3亚组(稻属病毒)的病毒代表株系。RRSV是由媒介昆虫水稻褐飞虱(Nilaparvata tugens)传播,它既可以在宿主水稻中繁殖,也能在媒介昆虫体内繁殖。病毒结构上具有双层蛋白外壳,表面有刺突蛋白,具有10条dsRNA基因组片段,属于双链RNA病毒。(1)研究发现异源表达39kDa刺突蛋白的转基因水稻表现出很好的抗RRSV感染的特性。而且,喂食该转基因水稻的褐飞虱,也获得了对RRSV的免疫,且免疫力正比于转基因水稻中Pg蛋白的含量。这表明39kDa刺突蛋白干扰了完整病毒颗粒与昆虫细胞受体之间的作用,它决定RRSV媒介昆虫的专一性。与目前通过杀灭媒介昆虫控制病毒...  (本文共94页) 本文目录 | 阅读全文>>

扬州大学
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从cDNA克隆产生感染性ZJI株鹅源新城疫病毒

新城疫(ND)是由副粘病毒科、禽副粘病毒属(Avulavirus)中的新城疫病毒(NDV)引起多种禽类发生感染和高度死亡的一种急性、接触性传染病。强毒感染易感禽常呈败血症经过,传播迅速,常给养禽业造成重大经济损失。在国际动物卫生组织(OIE)的疾病分类中ND属A类病。水禽曾被认为对NDV有较强的抵抗力,感染后一般不会引起发病和死亡,但是,自1997年以来,我国很多地区鹅群中被相继报道感染NDV强毒,造成较为严重的发病和死亡,严重威胁着我国养鹅业及其他禽类养殖的发展,引起了众多业者的密切关注。系统阐明鹅群中NDV的来源、病原特性、遗传演化以及研制有效的新型疫苗来防制该病在鹅群中的继续感染和流行等研究工作迫在眉睫。近年基于病毒基因组cNDA克隆技术基础上发展起来的反向遗传技术己成为分子病毒学研究的一个重要工具。本实验室从发病鹅群中分离到数十株NDV强毒,并对其部分生物学特性进行了鉴定。同时,对其中的ZJI分离株进行了全基因组测序,首...  (本文共131页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国农业科学院
中国农业科学院

新城疫病毒样颗粒的构建及其出芽机制的研究

病毒样颗粒(Virus-like particles,VLP)是指含有某种病毒的一个或多个结构蛋白的空心颗粒,不含有病毒核酸,不能自主复制,其在形态上与真正病毒粒子相同或相似,俗称为伪病毒颗粒或假病毒颗粒。近年来,VLP技术在病毒的形态学研究、病毒的组装和出芽机制的研究以及某些传染病的疫苗开发上应用广泛。例如,在人免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)、人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)、乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)、丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)、戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)和轮状病毒(Rotavirus)等诸多病毒的形态发生学、病毒装配、病毒的出芽机制以及高效疫苗开发等研究上均取得了可喜的进展,VLP技术发挥了越来越重要的作用。新城疫病毒(Newcastle dise...  (本文共116页) 本文目录 | 阅读全文>>

扬州大学
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新城疫病毒F_(48)E_8株融合蛋白基因和表达该基因的重组鸡痘病毒

新城疫(ND)是对养禽业危害最大的病毒性传染病之一,而新城疫病毒(NDV)F_(48)E_8株则是中国的标准嗜内脏速发型强毒。为了明确NDV F_(48)E_8株的致病机理,同时也为了研制免疫保护率高、保护期长的ND基因工程疫苗,本研究对与F_(48)E_8株致病性和免疫原性密切相关的融合蛋白(F)基因进行了克隆、序列分析,构建了表达该基因的重组鸡痘病毒(rFPV),并测定了rFPV的免疫效力。现从四个方面概述如下:一、以酚—SDS法提纯的NDV F_(48)E_8株基因组RNA为模板,采用反转录聚合酶链反应(RT—PCR),分别扩增到长为926bp的糖蛋白基因片段和长为1710bp的F基因。以Digoxigenin标记的糖蛋白基因核酸探针能特异性地检测NDV基因组RNA,而与其它病毒RNA不发生反应。F基因RT—PCR产物则被插入到质粒载体的多克隆位点,经酶切分析和Southern分子杂交筛选到阳性重组质粒克隆pF37。二、对...  (本文共99页) 本文目录 | 阅读全文>>