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新城疫病毒F48E8株融合蛋白基因和表达该基因的重组鸡痘病毒

新城疫(ND)是对养禽业危害最大的病毒性传染病之一,而新城疫病毒(NDV)F_(48)E_8株则是中国的标准嗜内脏速发型强毒。为了明确NDV F_(48)E_8株的致病机理,同时也为了研制免疫保护率高、保护期长的ND基因工程疫苗,本研究对与F_(48)E_8株致病性和免疫原性密切相关的融合蛋白(F)基因进行了克隆、序列分析,构建了表达该基因的重组鸡瘟病毒(rFPV),并测定了rFPV的免疫效力。现从四个方面概述如下:一、以酚-SDS法提纯的NDV F_(48)E_8株基因组RNA为模板,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR),分别扩增到长为926bP的糖蛋白基因片段和长为1710bP的F基因。以Digoxigenin标记的糖蛋白基因核酸探针能特异性地检测NDV基因组RNA,而与其它病毒RNA不发生反应。F基因RT-PCR产物则被插入到质粒载体的多克隆位点,经酶切分析和Southern分子杂交筛选到阳性重组质粒克隆pF37。二、对  (本文共98页) 本文目录 | 阅读全文>>

《生物工程学报》2000年05期
生物工程学报

表达新城疫病毒F48E8株融合蛋白基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力

新城疫 (NewcastleDisease ,ND)是鸡的一种烈性、病毒性传染病 ,被国际兽疫局列为对动物危害最大的A类传染病之一 ,每年给国家造成上百亿元的经济损失。本病病原为新城疫病毒 (NDV) ,分类上归于副粘病毒科、腮腺炎病毒属 ,是一种有囊膜的单链、不分节段、负极性RNA病毒。位于NDV囊膜上的两种糖蛋白为融合蛋白 (F)和血凝素 -神经氨酸酶 (HN) ,与病毒的致病性和免疫原性密切相关。其中F负责病毒穿入细胞 ,产生细胞融合和溶血作用 ;HN负责病毒吸附到细胞受体和破坏细胞受体。F常以Fo前体的形式被合成 ,Fo经宿主细胞酶切割成具有生物活性的F1和F2多肽 ,F1多肽起融合作用。Fo酶切部位的氨基酸序列决定其能否被宿主细胞酶识别 ,因而决定了病毒的毒力[1] 。由于NDV强毒在我国流行非常普遍 ,而常规疫苗的短期免疫保护率虽高 ,免疫期却不长 ,致使鸡的整个饲养期内需要多次使用疫苗。在存在各种免疫抑制因素的情况...  (本文共4页) 阅读全文>>

《微生物学报》1998年05期
微生物学报

表达新城疫病毒F48E8株血凝素-神经氨酸酶的重组鸡痘病毒的构建和鉴定

新城疫(Newcasdedisease,ND)是鸡的一种高度接触性、烈性传染病。其病原新城疫病毒(Newcashediseasevirus,NDV)是副粘病毒科副粘病毒属的代表种,为一种单股负链RNA病毒。构成病毒囊膜表面突起的两种结构糖蛋白一血凝素一神经氨酸酶(HN蛋白)和融合(F)蛋白在ND发病过程中起着重要作用。HN糖蛋白具有血凝素和神经氨酸酶两种活性,在NDV侵染过程中起着识别细胞受体的作用;F糖蛋白则参与病毒的穿透、融合和溶血等作用。两者均是NDV的保护性抗原,具有良好的免疫原性,因此HN基因和F基因常被用作研制ND基因工程疫苗f‘,‘]的目的基因。ND是危害我国养禽业的主要禽病之一。尽管我国目前已普遍开展以疫苗预防为主的综合性防制措施,但由于NDV强毒污染等原因常引起免疫失败,使ND仍时有发生。因此研制比ND常规疫苗免疫保护率更高、免疫保护期更长的新一代基因工程疫苗势在必行,而始于80年代后期现已发展相当成熟的重组禽...  (本文共6页) 阅读全文>>

《农业生物技术学报》1999年03期
农业生物技术学报

新城疫病毒F48E8株核衣壳蛋白基因在鸡痘病毒中的表达及其部分序列分析

新城疫(NewcastleDisease,ND)是由新城疫病毒(NewcastleDiseaseVirus,NDV)引起的鸡的一种极易传染的毁灭性疾病[1]。该病的病原NDV在分类上归于副粘病毒科副粘病毒亚科中的腮腺炎病毒属的成员,是一种有囊膜的单股负链RNA病毒[2]。核衣壳蛋白(NP)是NDV核衣壳内的主要组成部分。长期以来,国内外学者都集中研究NDV的表面囊膜糖蛋白,确定其在致病机理和免疫机理中起着重要作用,而忽视对NP的研究。NP蛋白与RNA病毒基因组模板活性有着密切的关系,主要负责基因组复制的控制[2,3]。现已证实,小鼠肝炎病毒(MHV)和传染性支气管炎病毒(IBV)的NP可产生对机体的细胞介导免疫[4]。NDV的NP蛋白也可能起着细胞免疫作用,所以对其研究具有重要意义。本实验是在克隆和鉴定中国NDV标准强毒株F48E8株NP基因的基础上[6],用鸡痘病毒表达了该基因并对其进行部分序列分析,为阐明NP基因与致病性的关...  (本文共5页) 阅读全文>>

扬州大学
扬州大学

新城疫病毒融合蛋白单克隆抗体的研制

以国内新城疫病毒(Newcastle disease Virus,NDV)标准强毒株F_(48)E_8接种10日龄SPF鸡胚,收集死亡鸡胚尿囊液经蔗糖密度梯度离心后获得较纯的病毒。以纯化的NDV建立了间接ELISA方法,并用于单抗筛选的第一检测系统。应用蓝斑筛选技术对表达NDV融合蛋白(Fusion Protein,F)的重组鸡痘病毒(Recombinant Fowlpox Virus,rFPV)进行筛选后获得较纯的重组病毒,通过间接免疫荧光(Immunofluorescence,ⅡF)试验证实了NDV F基因在rFPV中的表达。用纯化的rFPV感染96孔细胞培养板上次代鸡胚成纤维细胞(Chicken Embryo Fibroblast,CEF),建立了检测单抗的ⅡF方法,作为单抗筛选的第二检测系统。以纯化的NDV和经SDS-PAGE分离的NDV F蛋白免疫BALB/C小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术,经间接ELISA和ⅡF试验反复...  (本文共32页) 本文目录 | 阅读全文>>

南京农业大学
南京农业大学

表达新城疫病毒F_(48)E_8株融合蛋白基因的重组鸡痘病毒的构建及其免疫效力检测

新城疫(ND)是对养禽业危害最大的病毒性传染病之一,而新城疫病毒(NDV)F_(48)E_8株则是中国的标准强毒。为了研制有效的ND基因工程疫苗,本实验构建了表达NDV F_(48)E_8株融合蛋白(F蛋白)基因的重组鸡痘病毒(rFPV),并测定了rFPV的免疫效力,为NDV基因工程苗今后的开发提供了试验基础。现将本实验所做的工作从两个方面概述如下:1.从含有NDV F_(48)E_8 F基因的质粒PE1/E2-3,运用PCR法扩增的F基因,并将基因定向克隆到转移载体pEFgpt12S的Ecogpt基因下游,构建成转移载体pEF-2。以磷酸钙转染的方法转染含有F基因的重组鸡痘病毒rFPVNDF感染的鸡胚成纤维细胞,经有限稀释法挑取病毒蚀斑,;利用MXHAT培养基而进行负性筛选,得到了稳定生长新的重组鸡痘病毒rFPV-2。该重组毒具有两个F基因。间接免疫荧光试验表明,rFPV-2感染的鸡胚成纤维细胞中表达了NDV的F基因,与rFP...  (本文共54页) 本文目录 | 阅读全文>>