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人血管内皮生长因子及其受体Flt-1功能域在巴氏毕赤酵母中的表达和生物学活性的研究

血管内皮生长因子(vascular endothelium growth factor,VEGF)是血管内皮细胞的特异丝裂原,具有促进血管内皮细胞增殖,加速新血管形成的作用。VEGF是通过与血管内皮细胞表面的特异性受体结合而发挥其生物学效应的,在胚胎发育和心血管、肿瘤等疾病的发病和防治中具有重要作用。本文着重从以下三个方面对VEGF及其受体Flt-1进行了研究。一、人血管内皮生长因子VEGF_(165)在Pichia.pastoris中的表达、纯化及其生物学活性检测利用PCR技术,从phVEGF_(165)·SR真核表达质粒扩增出hVEGF_(165) cDNA,构建酵母分泌型表达质粒pPIC9K/hVEGF_(165),分别用单交换和双交换的方法将目的基因整合到两种宿主菌GS115和KM71的染色体上。鉴定转化子表型(His~+Mut~s和His~+Mut~+),G418加压筛选多拷贝整合菌株,经甲醇诱导在Pichia.pas  (本文共103页) 本文目录 | 阅读全文>>

重庆医科大学
重庆医科大学

人可溶性gp190 cDNA克隆、酵母表达系统的构建与生物学活性研究

白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor, LIF)是一种多功能的细胞因子,在不同的细胞和组织中具有多种生物学活性,近年来发现它在生殖中发挥着重要的作用。LIF启动靶细胞发挥其生物学功能是通过其受体系统实现的。LIF首先与膜受体gp190连接, 而后再同gp130(IL-6信号转导子)连接构成异源性二聚体,启动下游信号传导发挥其生物学效应。1998年发现人体液中存在LIF可溶性受体, soluble gp190(sgp190),但目前对sgp190具体的生物活性的研究尚未见报道。由于LIF在诸多生命活动中的重要作用,研究sgp190的生物活性具有非常重要的意义。本研究对sgp190在酵母Pichia pastoris中实现了重组sgp190分泌表达。利用基因重组技术,将编码人可溶性gp190(LIF受体α亚基gp190胞外区)cDNA克隆到毕赤酵母Pichia pastoris分泌表达载体pPIC9K...  (本文共109页) 本文目录 | 阅读全文>>

武汉大学
武汉大学

几种阳离子卟啉的生物学活性研究

卟啉不仅以其独特的生物活性存在于自然界,而且因其结构具有奇异的性能与癌细胞有特殊的亲合力,在医学研究中可作为检测癌症的光敏剂和抗癌药物。其中阳离子卟啉由于具有核酸的结合和切割特性,吸引了人们极大的兴趣。本文从合成和应用研究中经常使用的阳离子卟啉出发,包括5,10,15,20—四(1—甲基—4—吡啶基)卟啉甲苯磺酰盐(TMPyP)和5,10,15,20—四(1—乙氧羰基甲基—4—吡啶基)卟啉四氯盐(H_2TEOCMPyP)及其金属配合物,研究了亲水性阳离子卟啉与蛋白质和核酸的相互作用,探讨了它们在转运、肿瘤选择性及DNA损伤方面的相关特性。在此基础上,为提高其性能,改变了1—2个侧链基团,合成了3种新型阳离子卟啉化合物,进一步研究了它们的抗微生物和抗肿瘤活性。测试了几种新型卟啉对DNA的结合和损伤作用,并对比了它们与临床常用的癌症化疗药物阿霉素(ADM)对脂质体的过氧化损伤作用,从分子水平对卟啉的抗微生物和抗肿瘤机制进行了初步探讨...  (本文共126页) 本文目录 | 阅读全文>>

吉林大学
吉林大学

Flt3配体基因的克隆、表达及生物学活性鉴定

早期造血生长因子FL是酪氨酸激酶Ⅲ受体(Flt3)的配体,与受体结合后能够调节最原始的造血干/祖细胞的增殖和分化,动员和刺激髓系及淋巴祖细胞、DCs和NK细胞增殖和分化,是树突状细胞(DC)最为重要的生长因子;可与多种细胞因子协同,提高造血功能,与IL-2、IL-4、IL-12、IFN-γ等抗肿瘤因子有协同效应,从而在机体抵抗肿瘤的免疫过程中起重要作用。本文从K562细胞中分离出人FL的胞外段基因(hsFL),与pcDNA3表达载体相连,构建了pcDNA3/hsFL真核表达质粒,脂质体转染Hela细胞后进行RT-PCR、Western blot、ELISA及一系列生物学活性鉴定的检测;同时还将hsFL与原核表达载体pQE30相连构建了原核表达质粒,并进行了表达和纯化。结果表明:本实验获得的hsFL cDNA序列与Genbank的登录结果一致,有两处点突变,但所表达的氨基酸未变;发现了两种hsFL的剪变体,对这两种剪变体的研究目前...  (本文共105页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国协和医科大学
中国协和医科大学

痘苗病毒编码的细胞因子类似物-VGF基因的克隆、表达及生物学活性研究

痘苗病毒编码的生长因子(VGF)是EGF超家族的新成员,与EGF受体结合并刺激其自身磷酸化的能力强于EGF。开发重组VGF产品既可作为多肽类药物用于创伤的临床治疗,又可作为诊断试剂用于EGF受体的临床检测。糖基化的VGF前体分子由病毒的一个早期基因(称为19K)编码(140个氨基酸),可在2个位点被切开,释放19个氨基酸的疏水信号肽(1-19位氨基酸),77个氨基酸的成熟VGF分子(20-96位氨基酸),剩下的为跨膜区和膜内区。本课题合成3个引物:3′端引物V3(含EcoRI位点),5′端引物V5m和V5n(含BglⅡ位点)。以V3和V5m为引物从痘苗病毒天坛株中扩增出编码VGF第20位-第96位氨基酸的DNA片段,用于原核表达(本实验中命名为VGFm)。以V3和V5n为引物扩增编码第1位-第96位氨基酸的DNA片段,用于真核表达(命名为VGFn)。PCR产物以EcoRⅠ和BglⅡ酶切位点克隆到pSP72质粒中,分别构建成pSP...  (本文共91页) 本文目录 | 阅读全文>>

山东农业大学
山东农业大学

重组鸡白细胞介素18生物学活性检测及其对鸡免疫影响的研究

白细胞介素18(IL-18)具有广泛的生物学活性,能够促进γ-干扰素(IFN-γ)的产生,刺激淋巴细胞转化,增强NK细胞的杀伤活性,在介导细胞免疫、抵抗微生物感染方面具有重要的作用。对人和哺乳动物IL-18的研究已有许多报道。本研究室在2001年开展鸡白细胞介素18(ChIL-18)的研究,先后构建ChIL-18的重组质粒和原核表达系统、真核质粒及其表达系统,在此基础上,对纯化后的原核表达的重组鸡白细胞介素18产物进行生物学活性检测,对其在生产中的应用做了初步研究,同时对影响ChIL-18原核表达产物生物学活性的因素也进行了探讨。实验一MTT法检测鸡脾和外周血NK细胞杀伤活性方法的建立选取不同日龄的SPF鸡和肉鸡,通过贴壁法从血液和脾脏分离出NK细胞作为效应细胞,选择MDCC-MSB1和MDCC-MSBCU147分别作为靶细胞,二者按比例混合,孵育,利用MTT法检测靶细胞的活力反映效应细胞对靶细胞的杀伤活性,并对效靶比、作用时间...  (本文共113页) 本文目录 | 阅读全文>>