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抗人乳头瘤病毒16型E6基因核酶对宫颈癌细胞株表型和基因调控的影响

目的 设计和克隆一种能特异性切割人乳头瘤病毒(HPV)16型E6基因mRNA的核酶,研究该核酶对HPV16阳性的宫颈癌细胞株的恶性表型、免疫学特性、凋亡表型和基因调控的影响,以探讨HPV的致癌机制和治疗方法。方法 1、采用计算机软件,针对HPV16E6基因设计锤头状核酶。2、合成核酶的基因,克隆于原核表达质粒中,进行体外切割实验以鉴定核酶的活性。3、将抗HPV16E6核酶装入真核表达质粒,以脂质体法将核酶与空载体质粒分别导入CaSKi细胞,分别命名为CaSKi-R和CaSKi-P细胞。点杂交检测核酶在细胞中的表达,northern杂交检测三种细胞中E6基因的表达。4、测定三种细胞的生长曲线和软琼脂克隆形成率,并以皮下接种法检测细胞在裸鼠体内的成瘤能力。流式细胞仪检测三种细胞中HPV16E6、PCNA、C-erbB-2蛋白的表达。5、流式细胞仪分析三种细胞的DNA和凋亡率,检测凋亡相关蛋白c-myc、bcl-2、p53、Fas等的  (本文共127页) 本文目录 | 阅读全文>>

第一军医大学
第一军医大学

抗人乳头瘤病毒16型E6核酶对宫颈癌细胞株端粒酶活性和放化疗敏感性的影响

背景人乳头瘤病毒(HPVs)是一种小的DNA肿瘤病毒,它可以感染上皮细胞,引起细胞的增生性病变。大量的体内外的流行病学研究显示,某些特异的HPV感染可以导致上皮细胞的恶性变。90%以上的宫颈癌HPV阳性。大多数这些病变是粘膜相关的高危HPV亚型所致。HPV感染是宫颈癌最主要的致病因素,E6是主要的致癌基因之一,高危HPV基因型,如HPV16的E6蛋白表达水平是维持宫颈癌恶性表型的必要条件。近年来,一种被称为核酶的新的遗传学工具被发现。核酶是一种具有催化活性的RNA分子,它不仅具有反义核酸与靶RNA特异性结合的功能,同时具有酶的催化特征,可以特异性地切割靶RNA分子。放射治疗是目前宫颈癌治疗的标准和有效的方法;化疗作为一种辅助治疗手段近年来越来越受到重视。将基因治疗、放疗、化疗相结合为宫颈癌的治疗提供了一个新的研究思路和方法。目的本研究通过脂质体法将抗HPV16E6核酶(ribozyme)转染入宫颈癌CaSKi细胞,研究该核酶对宫...  (本文共121页) 本文目录 | 阅读全文>>

华东理工大学
华东理工大学

18型人乳头瘤病毒E6蛋白突变体的制备及其对肿瘤细胞生长的影响

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一。人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)感染是诱发宫颈癌的根本原因,而90%以上的宫颈癌与高危型HPV(尤其16、18型HPV)感染有关。HPV表达的早期蛋白E5/E6/E7可通过与宿主细胞内PDZ结构域相互作用,营造适合其转化、增殖的体内环境,引起一系列的疾病,甚至诱导肿瘤的发生。近年研究发现HPV16-E6单一氨基酸突变体(F47R)能抑转HPV-16的效应,是一种潜在的新型抗肿瘤药物。高危型HPV18-E6蛋白与HPV16-E6相似,其上类似位点的突变是否也具有相似的抑癌效果呢?本论文就此进行了探索,并获得如下结果:(1)以HeLa细胞基因组为模板,成功扩增了HPV18-E6蛋白的编码基因,构建了其真核表达载体pcDNA3.1-E6与pEGFP-Cl-E6;利用重叠PCR与常规重组相结合法扩增并构建了HPV18-E6单突变体蛋白(F49R与F127R)真核表达载体...  (本文共70页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国医学工程》2004年05期
中国医学工程

抗人乳头瘤病毒16型E6基因核酶对宫颈癌CaSKi细胞生长和端粒酶活性的影响

已证实20余种人乳头瘤病毒(HumanPapillo-mavious,HPV)与人类的宫颈肿瘤相关联,其中,最常见的致癌亚型是HPV16型,而E6、E7基因是致癌基因[1]。端粒酶(telomerase)是一种由RNA和蛋白质组成的核糖核蛋白(ribonucleoprotein,RNP),端粒酶活性(telomeraseactivity,TA)是细胞获得永生化的必要途径,是细胞恶性转化的基础。研究表明,HPV16E6可以调节端粒酶活性,降低端粒酶活性是肿瘤治疗的一个新的治疗靶点。为此,我们将抗HPV16E6核酶(Ribozyme)转染入宫颈癌细胞,阻断癌基因表达,以探讨抗HPV16E6核酶对宫颈癌CaSKi细胞生长和端粒酶活性的影响。1材料与方法1.1材料来源抗HPV16E6核酶由本室设计、克隆并在体外鉴定了其活性。pcDNA3为无目的基因的真核表达质粒,pc16HRz为抗HPV16E6核酶的真核表达质粒,由本室构建保存。将其转...  (本文共4页) 阅读全文>>

《微生物与感染》2006年01期
微生物与感染

人乳头瘤病毒E6蛋白在细胞凋亡中的作用

细胞凋亡是细胞体在内、外特定的生理或病理因素诱导下发生的程序性死亡。目前认为,细胞内的基因直接调控细胞凋亡的发生与发展,细胞外部因素通过信号转导而影响这些基因的表达或其表达产物的活化,间接控制细胞凋亡。病毒也可以通过影响凋亡信号转导通路中相关蛋白的活性及相关基因的表达而干扰正常的细胞周期和细胞凋亡。人乳头瘤病毒(H~Panillolnav而s,H扒z)能感染皮肤和勃膜的基底上皮细胞,可诱发宫颈癌、口腔乳头瘤、食管癌和非黑色素皮肤癌等肿瘤。这是因为HPV在其他致癌因子的协同作用下,可通过抑制细胞凋亡将正常细胞转化成肿瘤细胞川。随着对HPV研究的不断深人,人们发现HPV E6蛋白可影响许多凋亡相关蛋白,抑制HPV感染细胞的凋亡,促进细胞增殖,在HPV致癌机制中起关键作用。因此,HPVE6蛋白在细胞凋亡中的作用已引起国内外学者的广泛关注。本文综述了近年来HPv E6蛋白在细胞凋亡方面的研究进展。胞核,也有分布在细胞质和细胞内的膜结构(...  (本文共4页) 阅读全文>>

《基础医学与临床》2001年01期
基础医学与临床

宫颈脱落细胞标本中人乳头瘤病毒16、18型E6基因的检测

宫颈癌是女性生殖系统常见恶性肿瘤 ,是危害我国妇女健康的主要恶性肿瘤之一。人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus ,HPV)作为宫颈癌的主要致癌因素已得到大多数学者的公认[2 ] 。HPV已鉴定分出有 10 0型 ,其中HPV16和HPV18型是宫颈癌的高危因素 ,二者的早期区基因E6可引起细胞的永生性转化[2 ] 。临床上对有宫颈病变的患者检测HPV16、 18型的感染已成常规。文献[3,4 ] 中多采用DNA杂交法和聚合酶链反应对宫颈组织检测HPV16和HPV18,但杂交法所用探针及PCR所用引物都不尽相同 ,致使HPV16或HPV18的检出率相差较大 ,不利资料的比较。而且临床上组织标本来源困难。本文通过聚合酶链反应 限制性片段长度多态性分析 (PCR RFLP)法对宫颈脱落细胞标本与组织标本中的HPV16、 18型特异E6基因的检测 ,观察宫颈脱落细胞标本可否替代组织标本来检测HPV16和 /或HPV18...  (本文共3页) 阅读全文>>