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禽流感病毒(H5N1)基因(h5n1a)在马铃薯中的转化与表达研究——附:乙肝表面抗原(HBsAg)基因转化的对比研究

本研究首次将禽流感病毒(H_5N_1)基因h5n1a导入马铃薯获得表达,并优化了转化系统,为商品化生产转基因植物疫苗提供科学依据。1、为了优化马铃薯(Solanum tuberosum L.)以块茎为受体的再生系统。着重对诱导分化和结薯培养基作了较系统的筛选。以MS为基本培养基,调整激素配比,得到M1、M2、M3、M4等4种培养基。比较试验结果以M4(MS+2.0mg/L BA+3.0mg/L ZT+0.5mg/LNAA+0.5mg/L GA_3)诱导块茎分化的效果最佳,丛芽分化频率达89.4%,分化时间提早约20天。同时筛选了诱导结薯的较优培养方法,获得使试管薯结薯数增加近1倍的壮苗和诱导结薯培养基组合(壮苗:1/2MS+0.5mg/L BA+0.5mg/L GA_3+3%Suc;诱导结薯:MS+2.0mg/LBA+3.0mg/L ZT+10%Suc),为获得高频转化奠定了基础。2、构建了4个植物表达双元载体。p1301BG含  (本文共97页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中西医结合学报》2010年11期
中西医结合学报

假病毒技术在抗H5N1禽流感病毒中药筛选中的应用及评价

假病毒(pseudotyped virus)是指包膜蛋白不是由其本身携带的基因编码,而是由另一种病毒的基因编码的病毒颗粒。目前构建假病毒的体系主要有两种:一种是基于鼠类白血病病毒(murine leukemiavirus,MuLV)等反转录病毒载体构建的假病毒体系;另一种是以慢病毒如人类免疫缺陷病毒1型(human i mmunodeficiency virus-1,HIV-1)载体为基础发展起来构建的假病毒体系[1]。假病毒的细胞嗜性和感染过程与真病毒相似,并且含有报告基因,在靶细胞内进行单一周期的复制,不能再组装成病毒颗粒,因此在安全性、快速性、敏感性和标准化等方面具有明显的技术优势,目前被广泛应用于烈性传染病毒(如非典型肺炎病毒、埃博拉病毒等)的药物筛选、中和抗体效价测定及疫苗免疫效果评价等领域[2]。本研究借助我们前期工作中所建立的H5N1禽流感假病毒[3],高通量系统评价不同种类的中药复方的体外抗病毒活性,以期获得抗H...  (本文共5页) 阅读全文>>

《厦门大学学报(自然科学版)》2000年05期
厦门大学学报(自然科学版)

马铃薯遗传转化系统的优化及禽流感病毒(H5N1)基因的导入

随着植物生物技术的发展 ,利用转基因植物生产动物蛋白疫苗 ,已成为一个重要的研究和开发领域 .植物反应器与微生物和动物反应器相比 ,最大的优点是可以大规模、廉价、安全地生产动物蛋白疫苗 [1 ,2 ] .特别是用于免疫和治疗性疫苗的生产 ,已随着研究的深入越来越显示出其独特的优势 [3,4] .其中马铃薯这一世界性的粮食和蔬菜作物 ,被众多研究者认为是较理想的植物材料之一[2 ,4] .美国康奈尔大学 Arntzen等 ( 1 998)将一种最易引起腹泻的大肠杆菌 ( Es-cherichiacoli)毒素基因的一段插入到马铃薯基因组 ,用转基因马铃薯块茎粗提物给 1 1人食用 3周后 ,其中 1 0人体内产生了大肠杆菌毒素的抗体 [3] .但目前马铃薯遗传转化系统还不完善 ,特别是用于转基因疫苗的研究和生产 ,普遍存在转化效率偏低、基因型依赖性较大、周期较长等问题 [2~ 7] .我国在马铃薯遗传转化方面的研究起步较晚 ,且多...  (本文共8页) 阅读全文>>

《中国生物制品学杂志》2010年12期
中国生物制品学杂志

精制马抗H5N1禽流感病毒免疫球蛋白疏水层析方法的优化

抗病毒血清制品已被证明是一种安全的免疫制剂[1-2],但在大规模人群接种时,仍有不良反应发生,主要是由血清制品纯度不高引起的。其抗体的Fc片段可引起人的过敏反应。目前,我国人用生物制品中批准的14种马属动物抗血清,均通过酶切消化的方法去除抗体的Fc片段[3],但所使用的盐析纯化方法相对粗糙,质量不易控制,所获得的F(ab′)2抗体很难达到较高纯度,因此,在临床应用上存在潜在的危险。本实验在常规马抗血清精制纯化工艺的基础上,对制备工艺进行了优化,以期制备纯度更高的抗H5N1禽流感病毒免疫球蛋白,为高致病性禽流感的防治提供物质基础。1.材料与方法1.1高免血清及抗原高效价马抗H5N1禽流感病毒血清由军事医学科学院军事兽医研究所制备[4];H5亚型HA抗原购自哈尔滨兽医研究所。1.2主要试剂及仪器硫酸铵(分析纯)购自北京化工厂;低相对分子质量标准蛋白购自天根生化科技公司;胃蛋白酶(1∶3000)购自Promega公司;HiTrap P...  (本文共3页) 阅读全文>>

《天然产物研究与开发》2016年02期
天然产物研究与开发

黄芩苷抑制H5N1禽流感病毒进入的机制研究

流行性感冒病毒(简称流感病毒)是经急性呼吸道传播的流感致病因子,属于RNA病毒的正粘病毒科,分为甲、乙、丙三型。其中甲型流感病毒最为常见,同时造成的危害也最大。1918年流感的爆发是最严重的一次,全世界患者数在5亿以上,死于流感的人数达5000万[1]。2009年新甲型H1N1流感病毒造成了世界范围的流感爆发[2],而自1997年香港首先报道18例人感染高致病性H5N1型禽流感病毒以来,全球H5N1感染病例已达620人,死亡367人,死亡率接近60%,远远高于SARS等突发性传染病,且很多是青壮年人群[3]。2013年3月在我国上海和安徽发现H7N9禽流感病毒,死亡率30%,受到了世界许多国家和世界卫生组织的关注[4]。2014年德国、荷兰和英国相继出现了H5N8禽流感。因此,流感的防治,尤其是药物的防治已是迫在眉睫。目前,现有的治疗药物仅4种,且只作用于M2离子通道和神经氨酸酶两个靶点,远不能满足临床和社会的需求。积极研究防治...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国预防兽医学报》2015年07期
中国预防兽医学报

利用假病毒技术筛选H5N1亚型禽流感病毒中和活性单克隆抗体

*Corresponding authorH5N1亚型高致病性禽流感病毒(Avian influenzavirus,AIV)给养禽业造成了严重的经济损失,同时该病毒可以感染人并且死亡率较高。疫苗接种和抗病毒药物的应用是对抗流感病毒的有效策略,但目前为止,尚没有可应用于人类的H5N1禽流感疫苗。而抗病毒药物的大量应用可能诱导耐药性病毒株的产生[1],并且抗病毒药物往往在病毒感染后48 h之内有效[2],而临床上患者确诊时,往往已经错过了药物治疗的最佳时机。被动免疫是抑制病毒在机体内复制的一个有效策略[3]。H5N1亚型AIV属于正黏病毒科,病毒粒子表面有血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)和M2粒子通道蛋白3种囊膜蛋白。其中HA具有较强的抗原性,可以诱导机体产生保护性免疫,为疫苗和抗病毒药物研制的首选靶标蛋白。HA通过与细胞表面的病毒受体结合,启动病毒的感染过程。HA蛋白特异性中和抗体可以有效抑制病毒对靶细胞的识别和吸附,因此可以用...  (本文共4页) 阅读全文>>