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成年体细胞克隆山羊研究

1.比较了切剖法和抽吸法从屠宰山羊卵巢表面卵泡采集得到的可用卵母细胞数。实验切剖了4201个卵巢,平均采集可用卵母细胞数4.95枚/卵巢(20794枚/4201卵巢)。用抽吸法抽取了360个卵巢,平均采集可用卵母细胞数为2.86枚/卵巢(1029枚/360卵巢)。结果表明两种采集方法采集的可用卵母细胞数差异显著。用切剖法采集不同季节屠宰的山羊卵巢卵母细胞,结果繁殖季节(10-1月)卵巢可采集到可用卵母细胞4.50枚/卵巢(3160枚/702卵巢),非繁殖季节(3-6月)卵巢可采集到可用卵母细胞5.17枚/卵巢(3134/607)。不同季节采集的卵母细胞数差异显著。结果表明非繁殖季节屠宰的山羊卵巢可采集到更多的可用卵母细胞。2.将繁殖季节采集的3286枚卵丘-卵母细胞复合体用于体外成熟,成熟率为67.7%(2223/3286)。非繁殖季节采集的卵巢卵丘-卵母细胞复合体3295枚,成熟率74.1%(2440/3295)。结果表明不同  (本文共143页) 本文目录 | 阅读全文>>

南京农业大学
南京农业大学

体细胞克隆山羊表观遗传修饰与基因表达特征研究

尽管体细胞核移植在许多物种中获得成功,但是获得表型正常克隆动物的效率却非常低。供体细胞核的不完全重序被认为是造成克隆胚胎不能正常发育到成年的首要原因。深入探讨成年体细胞克隆动物中潜在的表现遗传修饰机制,将有助于了解关于克隆动物能够正常发育的后成重序界限,强化SCNT中相关的伦理观念。本研究以成年体细胞克隆山羊为研究对象,运用同源扩增、PCR克隆测序方法获得山羊印迹基因差异甲基化(DMR)序列,并通过Southern杂交、实时定量RT-PCR、SSCP等技术,进一步探索了成年克隆山羊印迹基因、DNA重复序列的甲基化模式,端粒长度以及生长相关印迹基因和非印迹基因的表达特征,深入探讨甲基化对基因表达的调控模式。1.山羊H19/IGF2和IGF2R第2内含子DMR的克隆测序与分析本实验根据绵羊的DNA序列AJ566210保守区域设计引物扩增出山羊H19基因第一外显子上游长4.2kb的调控区域序列,经生物信息学分析,该序列具有和绵羊、人类...  (本文共158页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国科学(C辑:生命科学)》2002年01期
中国科学(C辑:生命科学)

成年耳细胞克隆山羊(Capra hircus)

自 1997年,英国科学家Wilmut等人[门首次报道成功地获得了成年体细胞克隆绵羊Dolly后,体细胞克隆动物的研究进展迅速.在美国,Wakayama等人l’]报道用细胞质内直接注射法,获得了卵丘细胞克隆小鼠30余只.实验同时还用睾丸支持细胞和脑神经细胞进行克隆,但只获得了克隆胎儿.同年,日本科学家用培养的卵丘细胞和输卵管上皮细胞进行克隆,结果获得了两种细胞克隆牛8只[’].此后有研究报道,用一头约 13岁牛的颗粒细胞传4-8代后克隆得到两头牛犊卜’‘牛乳腺上皮原代培养细胞和耳部皮肤成纤维细胞厂’以及培养的肌肉细胞厂’进行克隆也都获得了成功.为了转基因体细胞克隆的商业化,胎儿体细胞克隆研究也在进行.在获得胎儿成纤维细胞克隆绵羊后[’],相继在牛l‘-‘’]、山羊[”]和猪[”]也获得成功.在这些研究中,采用的体细胞大多是新鲜或经短期培养传代后的细胞.后来报道用一头17岁牛的耳部皮肤成纤维细胞培养达 3个月传 15代后,经核移植...  (本文共7页) 阅读全文>>

《华北农学报》2011年02期
华北农学报

山羊体外成熟卵母细胞去核时间及方法对去核效率的影响

核移植涉及技术环节多,每一个环节出问题,都会影响核移植的总体效率。去核是核移植中的第一步,是非常重要的,去核的好坏直接影响以后的注核、融合等核移植环节的效率以及重构胚的正常发育。传统的去核方法采用的是盲吸法[1],以成熟卵母细胞排出的第一极体作指示,极体刚排出时,细胞核染色体就在极体附近。用去核管去掉极体及其附近1/3~1/4的细胞质,就能把核去掉。但随着成熟时间的延长,极体的位置会发生变化,从而指示细胞核染色体的位置不准确,造成去核率下降。为了提高去核率,后来在小鼠上率先发展了荧光指导法去核[2],用荧光染色确定细胞核染色体的位置,去核率可达100%。本研究对山羊卵母细胞体外成熟培养不同时间极体与细胞核的相对位置关系,以及不同的去核方法(盲吸法、荧光指导法)对卵母细胞去核率的影响进行了研究。旨为选择山羊卵母细胞最佳去核方法及去核时间提供依据。1材料和方法1.1卵母细胞的采集与体外成熟1.1.1屠宰场山羊卵巢的采集山羊卵巢取自天...  (本文共4页) 阅读全文>>

《黑龙江畜牧兽医》2009年15期
黑龙江畜牧兽医

不同培养时间对山羊卵母细胞体外成熟的影响

在体外受精过程中,山羊卵巢卵母细胞体外成熟情况在很大程度上决定着卵母细胞的体外受精率和胚胎发育率。影响卵母细胞成熟的因素很多,主要包括卵泡大小、培养基、激素、培养时间等。试验对不同培养时间对山羊卵母细胞体外成熟的影响进行探讨,现报道如下。1材料和方法1.1卵母细胞体外成熟和受精1.1.1卵母细胞体外成熟培养山羊卵巢采集于地方山羊品种。将采集的卵巢放入温度为20~30℃含0.3 mg/mL硫酸庆大霉素的生理盐水中,在3 h内运抵实验室。用灭菌生理盐水洗卵巢3次,并剪去输卵管等附属组织,然后采用切剖法收集卵母细胞复合体,也就是将准备好的卵巢置于平皿中,用刀片切割1~6 mm卵泡,使得卵母细胞随卵泡液进入PBS中。完成后,在体视显微镜下收集卵丘-卵母细胞复合体(COCs)。选择胞质均一致密、外围至少有3层以上的颗粒细胞包裹而且包裹致密的A级卵母细胞进行体外成熟培养。培养条件为38.5℃、5%CO2,培养时间分别为24,27,30 h。...  (本文共2页) 阅读全文>>

《上海畜牧兽医通讯》2008年02期
上海畜牧兽医通讯

GDNF、LIF和SCF对山羊卵母细胞体外成熟的影响

卵母细胞体外成熟(I VM)不仅是胚胎体外生产的关键一环,还可以为体细胞核移植提供受体卵母细胞。卵母细胞的成熟是一个复杂的动态过程,影响卵母细胞体外成熟的因素众多,成熟率通常为40%~80%,优化培养条件是提高体外培养卵母细胞成熟率及体外成熟卵母细胞质量的关键,大量的研究者通过在培养液中添加细胞因子来促进卵母细胞成熟〔1〕。文献报道将胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、白血病抑制因子(LIF)、干细胞因子(SCF)用于小鼠、绵羊和人的细胞培养中取得了较理想效果〔2〕,但未见将三种成分用于山羊的报道。本试验研究比较了不同浓度GDNF、LIF、SCF及其不同组合对山羊体外培养卵母细胞成熟率的影响,拟优化培养条件,提高卵母细胞的成熟率。1材料和方法1.1试剂GDNF、LIF、SCF、血清白蛋白(BSA)为Sigma公司生产;培养用M199由Gibco公司生产;胎牛血清(FBS)由杭州四季清公司生产;垂体促卵泡素(FSH)、雌二醇(E...  (本文共2页) 阅读全文>>

《农业知识》2006年01期
农业知识

“山羊体细胞克隆技术研究”通过鉴定

日前,在两个克隆小“姐妹”—“阳春”、“立夏”的陪伴下,山——东省首只克隆山羊“白雪”度过一周岁生日。与此同时,山农大“山羊体细胞克隆技术研究”顺利通过技术鉴定。据悉,山东省在此项拥有自主知识产权的研究中已建立起一套较为合理的独立技术体系。“立夏”是世界首例长期培养(传代20~2...  (本文共1页) 阅读全文>>