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成年体细胞克隆山羊研究

1.比较了切剖法和抽吸法从屠宰山羊卵巢表面卵泡采集得到的可用卵母细胞数。实验切剖了4201个卵巢,平均采集可用卵母细胞数4.95枚/卵巢(20794枚/4201卵巢)。用抽吸法抽取了360个卵巢,平均采集可用卵母细胞数为2.86枚/卵巢(1029枚/360卵巢)。结果表明两种采集方法采集的可用卵母细胞数差异显著。用切剖法采集不同季节屠宰的山羊卵巢卵母细胞,结果繁殖季节(10-1月)卵巢可采集到可用卵母细胞4.50枚/卵巢(3160枚/702卵巢),非繁殖季节(3-6月)卵巢可采集到可用卵母细胞5.17枚/卵巢(3134/607)。不同季节采集的卵母细胞数差异显著。结果表明非繁殖季节屠宰的山羊卵巢可采集到更多的可用卵母细胞。2.将繁殖季节采集的3286枚卵丘-卵母细胞复合体用于体外成熟,成熟率为67.7%(2223/3286)。非繁殖季节采集的卵巢卵丘-卵母细胞复合体3295枚,成熟率74.1%(2440/3295)。结果表明不同  (本文共143页) 本文目录 | 阅读全文>>

《发明与革新》2001年10期
发明与革新

世界首例成年体细胞克隆山羊自然交配生育成功

8月8日,在西北农林科技大学生物工程研究所实验示范场,人们怀着紧张兴奋的心情,等待着具有重要科学意义的时刻到来。11点55分,“咩……咩……”随着一阵清脆、响亮、有力的羊羔声的传来,在场的人一下子欢呼起来———世界第一例由成年体细胞克隆山羊与胚胎克隆山羊通过自然交配产生的后代终于成功降生了。这只取名“欢欢”的公羊羔重1.4公斤,高23厘米,长24厘米。12点15分,又一只母羊羔顺利落地,人们再一次沸腾起来了,为之振奋,为之欢庆。母羊羔取名为“庆庆”,体重为1.2公斤,高23厘米,长22.5厘米。整个生产过程非常顺利,产后不久小羊羔就站起来找“妈妈”吃奶。成年体细胞克隆山羊自然交配生育成功,再次充分证明了由我国科学家创造的具有自主...  (本文共1页) 阅读全文>>

《河南畜牧兽医》2000年07期
河南畜牧兽医

首例成年体细胞克隆山羊夭亡

记者从中国西北农林科技大学生物工程研究所了解到 ,6月16日降生于该校种养场的世界上第一例成年体细胞克隆山羊“元元”由于肺部发育缺陷 ,造成呼吸困难 ,导致呼吸衰竭于6月18日凌晨1时05分死亡。当时研究人员...  (本文共1页) 阅读全文>>

南京农业大学
南京农业大学

体细胞克隆山羊表观遗传修饰与基因表达特征研究

尽管体细胞核移植在许多物种中获得成功,但是获得表型正常克隆动物的效率却非常低。供体细胞核的不完全重序被认为是造成克隆胚胎不能正常发育到成年的首要原因。深入探讨成年体细胞克隆动物中潜在的表现遗传修饰机制,将有助于了解关于克隆动物能够正常发育的后成重序界限,强化SCNT中相关的伦理观念。本研究以成年体细胞克隆山羊为研究对象,运用同源扩增、PCR克隆测序方法获得山羊印迹基因差异甲基化(DMR)序列,并通过Southern杂交、实时定量RT-PCR、SSCP等技术,进一步探索了成年克隆山羊印迹基因、DNA重复序列的甲基化模式,端粒长度以及生长相关印迹基因和非印迹基因的表达特征,深入探讨甲基化对基因表达的调控模式。1.山羊H19/IGF2和IGF2R第2内含子DMR的克隆测序与分析本实验根据绵羊的DNA序列AJ566210保守区域设计引物扩增出山羊H19基因第一外显子上游长4.2kb的调控区域序列,经生物信息学分析,该序列具有和绵羊、人类...  (本文共158页) 本文目录 | 阅读全文>>

西北农林科技大学
西北农林科技大学

大熊猫成纤维细胞体外培养与异质克隆胚构建

本项研究首先用山羊和牛的皮肤组织进行了细胞培养预备试验,对其细胞系建立方法和基本特性进行了探讨。在此基础上,成功建立了大熊猫皮肤成纤维细胞有限和无限细胞系,获得体外发育至囊胚的大熊猫-牛种间核移植胚胎。结果如下:一.用含有10%NCS、100IU/ml青霉素、10OIU/ml链霉素的M199 4℃保存皮肤组织,8小时内组织块均能存活。添加10%NCS、100IU/ml青霉素、100IU/ml链霉素的M199、DMEM、HLH培养液,均可用于山羊和牛的皮肤细胞的体外培养,其中青山羊皮肤组织块在上述培养液中原代培养的成活率分别为75.0%、71.4%和80.0%。用添加D-Hanks’配制的0.25%胰蛋白酶(trypsin),0.02%EDTA,胰蛋白酶-EDTA(0.25%胰蛋白酶,0.02%EDTA,简称TE)消化液控时控温消化,重新接种后24小时的细胞贴壁率分别为86.4%、88.5%、95.8%。根据上皮细胞与成纤维细胞对...  (本文共115页) 本文目录 | 阅读全文>>

《华北农学报》2011年02期
华北农学报

山羊体外成熟卵母细胞去核时间及方法对去核效率的影响

核移植涉及技术环节多,每一个环节出问题,都会影响核移植的总体效率。去核是核移植中的第一步,是非常重要的,去核的好坏直接影响以后的注核、融合等核移植环节的效率以及重构胚的正常发育。传统的去核方法采用的是盲吸法[1],以成熟卵母细胞排出的第一极体作指示,极体刚排出时,细胞核染色体就在极体附近。用去核管去掉极体及其附近1/3~1/4的细胞质,就能把核去掉。但随着成熟时间的延长,极体的位置会发生变化,从而指示细胞核染色体的位置不准确,造成去核率下降。为了提高去核率,后来在小鼠上率先发展了荧光指导法去核[2],用荧光染色确定细胞核染色体的位置,去核率可达100%。本研究对山羊卵母细胞体外成熟培养不同时间极体与细胞核的相对位置关系,以及不同的去核方法(盲吸法、荧光指导法)对卵母细胞去核率的影响进行了研究。旨为选择山羊卵母细胞最佳去核方法及去核时间提供依据。1材料和方法1.1卵母细胞的采集与体外成熟1.1.1屠宰场山羊卵巢的采集山羊卵巢取自天...  (本文共4页) 阅读全文>>

《黑龙江畜牧兽医》2009年15期
黑龙江畜牧兽医

不同培养时间对山羊卵母细胞体外成熟的影响

在体外受精过程中,山羊卵巢卵母细胞体外成熟情况在很大程度上决定着卵母细胞的体外受精率和胚胎发育率。影响卵母细胞成熟的因素很多,主要包括卵泡大小、培养基、激素、培养时间等。试验对不同培养时间对山羊卵母细胞体外成熟的影响进行探讨,现报道如下。1材料和方法1.1卵母细胞体外成熟和受精1.1.1卵母细胞体外成熟培养山羊卵巢采集于地方山羊品种。将采集的卵巢放入温度为20~30℃含0.3 mg/mL硫酸庆大霉素的生理盐水中,在3 h内运抵实验室。用灭菌生理盐水洗卵巢3次,并剪去输卵管等附属组织,然后采用切剖法收集卵母细胞复合体,也就是将准备好的卵巢置于平皿中,用刀片切割1~6 mm卵泡,使得卵母细胞随卵泡液进入PBS中。完成后,在体视显微镜下收集卵丘-卵母细胞复合体(COCs)。选择胞质均一致密、外围至少有3层以上的颗粒细胞包裹而且包裹致密的A级卵母细胞进行体外成熟培养。培养条件为38.5℃、5%CO2,培养时间分别为24,27,30 h。...  (本文共2页) 阅读全文>>