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大麦黄矮病毒GPV株系复制酶基因介导的抗病毒转基因小麦的研究

将已知BYDV-GPV部分序列,与其他黄症病毒序列比较,合成相应的上下游引物,以BYDV-GPV株系病毒RNA为模板,RT-PCR分别扩增了GPV株系的ORF1和ORF2基因片段。经过酶切、连接、转化,将2个基因片段分别插入到pUC19质粒之中,获得了重组质粒pUC19-ORF1和pUC19-ORF2。对基因片段进行序列分析结果表明,ORF1全长1953个核苷酸,可编码651个氨基酸、分子量为71.4kD的蛋白质;ORF2全长1872个核苷酸,可编码624个核苷酸、分子量为70.1kD的蛋白。在ORF1和ORF2之间存在着一较长的重叠区域,达601个核苷酸。与其他黄症病毒的序列比较结果,GPV与RPV的同源性最高,ORF1同源性达66.4%,ORF2达81.7%;推测出的编码氨基酸序列,P_1同源性为55.6%,P_2为81.5%。与PAV的同源性最低,核苷酸同源性分别为ORF1/44%,ORF2/42%,并且仅为部分同源;推测  (本文共111页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国农业科学院
中国农业科学院

大麦黄矮病毒GPV株系ORF5基因的克隆、表达载体构建及转基因研究

将已经测定的GPV株系ORF5部分基因序列与RPV株系的序列进行比较,根据ORF5起始区域的核苷酸序列合成上游引物,以RPV ORF5基因框架3’外侧核苷酸及编码氨基酸序列作为参考,设计3’简并引物,以GPV ORF5基因组RNA为模板,RT—PCR扩增GPV ORF5基因片段,用pGEM-T载体克隆扩增片段。对克隆基因片段进行序列分析结果表明,ORF5全长1326个核苷酸,可编码441个氨基酸、分子量为50kD左右的蛋白质。这是首次获得GPV株系ORF5基因完整序列。与其他黄症病毒ORF5基因核苷酸序列进行比较的结果显示,GPV与RPV的同源性最高,同源性达68.1%;与马铃薯卷叶病毒(PLRV)和甜菜西方黄化病毒(BWYV)的同源性次之,分别为33.6%和39.8%,与PAV、SGV、GAV、MAV的同源性分别为30.2%、28.8%、28.5%和29%。根据核苷酸序列推测出ORF5基因编码的氨基酸序列,对GPV株系与本组其...  (本文共135页) 本文目录 | 阅读全文>>

《植物保护》2008年05期
植物保护

应用农杆菌介导法获得转大麦黄矮病毒GPV株系复制酶基因ORF2小麦植株

由大麦黄矮病毒(Barley yellow dwarf virus,BYDV)引起的小麦黄矮病是危害小麦生产的重要病害。自20世纪60年代在我国发现以来,已先后多次流行,流行年份减产20%~30%,严重时可达50%,为我国小麦生产带来了严重的经济损失。我国所分离到的GPV株系与国外报道的5种株系(PAV、MAV、RPV、RMV、SGV)均无血清学反应,为我国特有的株系和主流株系。由于化学防治对小麦黄矮病的防治效果不佳,并且在普通小麦中未发现抗性基因,因此人工构建抗性基因的转基因小麦就成为最有效的途径。植物的基因转化是植物基因工程最为关键的步骤之一。近几年农杆菌介导法以其操作简单、转化效率高、成本低、拷贝数少以及外源基因在转基因后代中比较稳定等优点而日益引起人们重视。1997年Cheng等利用农杆菌介导法首次获得转基因小麦植株[1],许多实验室已先后展开了此方面的研究并取得了成功[2-5]。本研究利用大麦黄矮病毒GPV株系复制酶基...  (本文共5页) 阅读全文>>

《植物病理学报》2008年06期
植物病理学报

应用农杆菌介导法获得转大麦黄矮病毒GPV株系复制酶基因ORF1的小麦植株

由大麦黄矮病毒(Barley yellow dwarf virus,BYDV)引起的小麦黄矮病是危害小麦生产的重要病害。自20世纪60年代以来,该病在我国先后多次流行,流行年份一般减产20%~30%,严重时可达50%,给我国小麦生产造成严重的经济损失。我国所分离到的GPV株系为我国所特有的株系和主流株系,与国外报道的5种株系(PAV、MAV、RPV、RMV、SGV)均无血清学反应。由于小麦黄矮病的化学防治效果不佳,并且在普通小麦中未发现抗性基因,因此人工构建抗性基因的转基因小麦就成为防治小麦黄矮病的有效途径之一。植物的基因转化是植物基因工程的关键步骤之一。近几年农杆菌介导法以其操作简单、转化效率高、成本低、拷贝数少以及外源基因在转基因后代中比较稳定等优点而得到人们关注。1997年Cheng等[1]利用农杆菌介导法首次获得转基因小麦植株。随后,许多实验室也展开了此方面的研究并成功获得转基因小麦植株[2~5]。本研究利用大麦黄矮病毒...  (本文共6页) 阅读全文>>

《信阳农业高等专科学校学报》2007年03期
信阳农业高等专科学校学报

大麦黄矮病毒GPV株系运动蛋白基因原核表达载体的构建

大麦黄矮病毒(Barley yellow dwarf virus,BYDV)是一种世界性的禾谷类病毒,可侵染小麦、大麦等多种禾本科作物和杂草,对生产造成严重影响[1]。BYDV主要局限于寄主的韧皮部组织,经由韧皮组织进行长距离运输和系统侵染。而对BYDV在寄主体内的运动蛋白基因研究甚少。有关研究认为,BYDV ORF4基因编码的P4蛋白即是病毒的运动蛋白(MP)[2-3],该蛋白的分子量为17kDa,但是这些研究都只是间接证实了ORF4基因编码病毒的运动蛋白,目前还缺乏直接的实验证据,并且BYDV的运动机制尚不清楚。为了更好的认识和防治该病毒,我们对BYDV-GPV株系ORF4基因进行了克隆并构建了原核表达载体pET-O4。1材料与方法1.1材料1.1.1 BYDV-GPV株系供试BYDV-GPV株系由中国农业科学院植物保护研究所基因工程组提供。1.1.2酶与其它试剂限制性内切酶、T4DNA连接酶等酶制剂均购自Promega公司...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国农业科技导报》2009年01期
中国农业科技导报

大麦黄矮病毒GPV株系基因组末端序列的克隆和分析

大麦黄矮病毒(barley yellow dwarf virus,BYDV)隶属于黄症病毒科(Luteoviridae),以蚜虫为介体进行持久性非增殖方式传播。1950年Oswald等[1]在美国加利福尼亚的大麦上首次发现,可引起发病植株出现叶片黄化、植株矮化等症状,是危害小麦生产的全球性重要病毒病害。根据蚜虫的传毒特性,Rochow等[2,3]将大麦黄矮病毒分为5个株系,即分别由禾谷缢管蚜、麦长管蚜、玉米蚜和麦二叉蚜专化性传播的RPV、MAV、RMV和SGV,及由禾谷缢管蚜和麦长管蚜传播的PAV。在中国,周广和等[4]将其分为GAV、PAV、RMV和GPV 4个株系,其中GAV,PAV分别与美国的MAV,PAV株系关系密切,RMV与美国的RMV类似,而在中国所分离到的GPV株系与国外报道的5种株系均无血清学反应,为中国所特有的株系和主流株系。近年来,国内外已完成PAV、MAV、RPV和GAV等株系基因组全序列测定,以及SGV和...  (本文共6页) 阅读全文>>

四川农业大学
四川农业大学

具双T-DNA区的大麦黄矮病毒复制酶基因双链RNAi植物表达载体构建

大麦黄矮病毒(Barley yellow dwarf virus,BYDVs)是单链正义RNA病毒,由蚜虫以循徊型持久传播,病毒粒体在蚜虫体内不增殖,不能通过汁液摩擦接种。禾谷类黄矮病毒病是由大麦黄矮病毒引起的,在小麦、大麦、燕麦和黑麦等多种作物上广为传播的一种毁灭性病毒病害,造成产量损失,同时还劣化谷物品质,它的发病面积和危害程度呈逐年扩大和加重趋势。BYDV-GAV是当前我国流行的病毒株系。由于栽培品种中的抗黄矮病基因极少,因此传统的抗黄矮病育种方法进展缓慢,采用基因工程技术手段研究新的抗黄矮病毒的技术已成为目前抗黄矮病育种工作的关键。本研究是将BYDV-GAV株系的复制酶基因片段GAVpol+(824bp)插入到植物双元表达载体pMBW246的KpnI和EcoRI克隆位点,构建成pMBW246-GAVpol+中间载体;然后将比GAVpol+少217bp碱基的基因片段GAVpol-(607bp)反向插入到中间载体pMBW24...  (本文共58页) 本文目录 | 阅读全文>>