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融合杀虫基因的分子设计、构建及表达研究

虫害严重影响着农业生产,转基因抗虫植物是控制害虫的最有效手段之一。但是随着转基因抗虫植物的大面积推广,昆虫会逐渐对其产生抗性。构建融合杀虫基因可能是延缓昆虫对转基因抗虫植物产生抗性的一种有效策略。根据Bt杀虫蛋白Cry1A和豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)的高级结构、杀虫机理及昆虫体内肠激酶的作用机理,本着尽量不影响二者功能的原则,设计出了构建Cry1A和CpTI融合杀虫基因CryCI的方案,即将CpTI基因的编码序列连接到GFM Cry1A基因编码区3’端,并在其间用一段编码肠激酶切割位点的序列相连。利用设计的CpTI引物扩增出282bp的CpTI基因片段,将其克隆到pUC19载体上,然后将含有肠激酶切割位点编码序列的接头连接到CpTI基因的5’端,进而把此带有接头的CpTI基因片段克隆到质粒pG4AB上GFM Cry1A基因编码区的3端,构建成携带融合杀虫基因CryCI的载体pGF4ABC。将pGF4ABC上的融合杀虫基因Cr  (本文共102页) 本文目录 | 阅读全文>>

《小学自然教学》2000年05期
小学自然教学

科苑集粹

转基因作物 优质高产杭虫害襄戳截截豁惑豁然豁豁惑寥长柔朱巍豁愁截豁裁害适戴戴蒸范l暮熊交)鲤叠鬓暖戴祖曼戮戴戮i追眯翠翼翠翠翠黔黔黔翠翼翼翠翠翠翠翠翠攀 科学家利用DNA重组技术,已培育出许多优质、高产、抗病虫害的作物新品种—转基因作物。如,苏云杆菌是一种可防治30多种虫害的细菌,科学家成功地将其中的杀虫基因转入烟草细胞中,使烟草也具有了抗虫能力。 墨西哥科学家从马铃薯害虫身上取出了抗虫基因,移植在马铃薯细胞中,培育出抗虫害的马铃薯,使农民的损失减了10%一40%。 蕃茄是重要的蔬菜作物,但成熟的蕃茄易腐烂,不能长时间贮存。美国加州基因公司利用DNA重组技术,使蕃茄成熟后耐贮存、防腐烂,保鲜期延长了一个星期。 进入1990年代,科学家应用基因重组技术培育转基因动物又取得了巨大成功,科学家用一种限制性核酸内切酶的“分子剪刀”从DNA序列中剪下其种特定的基因(外源基因),经克隆(增殖)、加工改造后用连接酶连接到载体上,然后交外源基因...  (本文共2页) 阅读全文>>

《河南科技》1960年10期
河南科技

杀虫基因

杀虫基因郑州牧业工程高等专科学校郭凤蕊,董五辈虫害一直是农业生产最严重的问题之一,人们一直在寻找克服的途径,目前已发展到用基因杀虫,即将杀虫基因通过一定的途径转移到植物细胞内,使植物产生对害虫有自我防护的能力,这就是植物的抗虫基因工程。在抗虫植物基因工程研究中应用最多的是Bt基因。Bt基因是苏云金杆菌(Bacillusthuringiensis)细胞内大型质粒中的一段杀虫蛋白基因,其结构类似于转座子,可以在细菌质粒与染色体间进行转移。Bt基因的自然表达是苏云金杆菌在形成芽抱时产生一种蛋白质性质的伴孢晶体,这种晶体蛋白在碱性条件或昆虫肠液作用下可分解成具有高度杀虫特性的毒性多肽。这些多肽按其分子量大小可分为三类:130-140KD、70KD、27KD,其形状呈校形、立方形。片状、或不定形,半致死量(LD50)一般只有几个ng。昆虫食用孢子或晶体后的典型症状是晶体在肠道的碱性环境和蛋白水解酶的作用下被分解激活。这种被激活的多肽与昆虫...  (本文共1页) 阅读全文>>

《中国科学(B辑 化学 生命科学 地学)》1991年08期
中国科学(B辑 化学 生命科学 地学)

苏云金芽孢杆菌杀虫基因导入中国栽培水稻品种中花11号获得转基因植株

水稻是我国最重要的粮食作物之一,然而,水稻生产却受到鳞翅目害虫(如三化螟、二化螟、稻纵卷叶螟、大螟等)的严重威胁,每年都因害虫危害造成大量减产. 化学农药防治法对控制水稻害虫的危害起着十分重要的作用.但随着时间的推移,农药残毒问题、环境污染问题以及害虫抗药性问题日益突出,采用抗虫品种是防治虫害的经济、安全、有效的方法.近年来,常规的水稻抗虫育种取得了一定进展,但由于育种年限长,遗传资源有限,抗虫机制不甚明了以及害虫新生物型的发展导致抗性的不稳定等原因【’],水稻抗虫育种工作的进程受到了极大的限制. 苏云金芽抱杆菌对鳞翅目害虫具有高效的毒杀作用.B.thuringiensis晚awai7一29菌株是防治水稻螟虫的优良菌株.采用基因工程技术将B. t.杀虫基因导人水稻,对于培育水稻抗虫品种具有十分重要的意义.近年来,以水稻原生质体为受体,进行外源模式基因(如抗卡那第8期谢道听等二苏云金芽抱杆菌杀虫基因导人中国栽培水稻品种中花n号获得...  (本文共5页) 阅读全文>>

东北农业大学
东北农业大学

苏云金芽胞杆菌资源多样性分析与杀虫基因发掘

苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis, Bt),革兰氏阳性细菌,在芽胞形成期可产生具有杀虫活性的伴胞晶体。Bt晶体主要由cry基因编码的杀虫晶体蛋白组成,在害虫的防治中具有重要作用,有巨大的商业价值,因此发掘新基因并进行知识产权保护是Bt资源研究的重要内容。知识产权作为综合竞争力的重要体现,而目前我国在Bt杀虫基因资源的知识产权方面处于劣势,大部分Bt杀虫基因的专利权掌握在西方各大型农业生物技术企业手中,我国掌握的Bt新的基因发明专利不足60项。高通量测序技术的发展为发掘杀虫基因提供了新思路,成为国内外发掘Bt杀虫基因的主要手段。但是测序价格较高,Bt资源库中存在的冗余菌株会造成较大的资金浪费,目前尚没有便捷的方法去除重复菌株。因此,迫切需要建立可以快速分析比较大量样品的方法,来排除重复菌株,进一步提高杀虫基因发掘效率。本论文在分离1500株Bt菌株的基础上,进一步建立了菌株多样性分析方法,对菌株多样性进...  (本文共85页) 本文目录 | 阅读全文>>

《南方农业学报》2012年08期
南方农业学报

融合杀虫基因对甘蔗的遗传转化

0引言【研究意义】甘蔗(Saccharum officinarum L.)在生长期间常遭受同翅目的甘蔗绵蚜(Ceratovacuna lani-gera Zehnther)、蔗螟等重要害虫的危害,导致甘蔗减产和品质变劣,造成严重的经济损失。甘蔗是高度杂合、遗传背景复杂的无性繁殖作物,生产上极缺乏高抗虫品种(系),而且采用常规育种不易培育出抗虫甘蔗新品种,因此利用转基因技术获得抗虫转基因甘蔗是培育甘蔗抗虫品种最有效的途径。【前人研究进展】目前,在甘蔗抗虫转基因研究中使用的抗虫基因较单一,主要有Bt基因(Arvinth et al.,2009,2010;Kalunke etal.,2009;冯翠莲等,2010,2011;Weng et al.,2011;高世武等,2011)、GNA基因(Sétamou et al.,2002;Tomov et al.,2003;刘晓娜等,2010)及PI基因(Christyet al.,2009;刘...  (本文共4页) 阅读全文>>