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运用反义策略对人的两个突变相关基因hMMS2和CROC-1功能的初步研究

细胞遗传不稳定性(genetic instability)是存在于人类遗传疾病及肿瘤中的一种重要现象,可能在其发生中起主导作用。环境致癌性理化因子可诱发细胞遗传不稳定性。我们的研究发现化学致癌物MNNG可在哺乳动物细胞中诱发以非定标性突变(nontargeted mutation)为特征的遗传不稳定性,并且认为可能是通过DNA损伤及非DNA损伤途径激活信号转导系统而诱导细胞内众多基因的表达发生改变,致使细胞内DNA聚合酶酶谱发生变化启用了低保真度的DNA聚合酶,从而导致细胞遗传不稳定性的形成。近年来的研究发现生物体细胞内存在有DNA损伤耐受机制,并且发现其实质就是DNA跨损伤合成(translesion synthesis,TLS)。自1996年以来,已在原核及真核生物细胞中陆续发现了多种参与跨损伤DNA合成的DNA聚合酶,这类跨损伤合成酶能以无误(error-free)和/或易误(error-prone)(致突变,mutage  (本文共83页) 本文目录 | 阅读全文>>

《潍坊高等职业教育》2008年02期
潍坊高等职业教育

Gdnf基因的克隆和表达

胶质细胞源神经营养因子(glial cell line-derivedneuotrophic factor,Gdnf)是Lin等人于1993年从大鼠B49胶质细胞系中分离、纯化和成功克隆的一种新的神经营养因子[1],因其对胚胎中脑的多巴胺能神经元具有特异性营养活性而被广泛重视。最近的研究表明,Gdnf是精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)自我复制所必需的因子[2-4],并且SSCs在体外培养时需要饲养层细胞的支持[5,6],如采用小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fi-broblasts,MEF)或STO(SIM mouse embryo-derived thio-guanine and ouabain resistant)细胞制作饲养层等。研究表明,NIH-3T3细胞比上述两种细胞更能支持SSCs在体外的增殖[7]。因此,我们从小鼠睾丸中克隆了Gdnf基因,构建了pcDN...  (本文共4页) 阅读全文>>

《国际学术动态》2000年05期
国际学术动态

基因克隆法

现已被认定的遗传病有7似6种,这些病都系刁)与一个或几个基因的突变有关。认清人类全部基因,特别是与疾病相关的基因的结构、功能以及各种基因突变与疾病的关系是生命科学家与医学家的使命与追求。在传染病被日益控制、发病率大规模减少的情况下,影响人类健康的主要因素正在转变为遗传疾病。如高血压、心血管病、肿瘤、塘尿病、哮喘病等。据统计,全世界的糖尿病和哮喘病患者各高达2.7亿人,而在儿科门诊中竟有约 1/3就诊者有某种遗传学上的问题。因此,研究基因结构及其功能,基因突变导致的遗传性疾病的发生,是很重要的任务。 基因的分子生物学研究的第一步是基因克隆。自DNA操作技术问世以来,70年代人们发明了基因的功能克隆法。该方法用纯化的蛋白制备出抗体,藉助免疫反应,把在多聚核搪体上正在合成的相应肤链连同其模板mRNA一起沉淀下来,这个mRNA就是该蛋白的基因转录物,经反转录可得到这个基因的cDNA克隆。随着DNA分子克隆库技术的发展,又创建了另一条路线...  (本文共2页) 阅读全文>>

《生物技术》2017年04期
生物技术

莲藕Na~+/H~+逆向转运蛋白基因-LrNHX的克隆及表达分析

莲藕属于睡莲科莲属多年生水生草本植物,在我国长江中下游以南地区广泛栽培,是一种特色的水生蔬菜,同时也是重要的水旱轮作作物[1-2]。近年来,我国东南沿海地区沿海滩涂面积逐渐扩大,设施土壤连作障碍(盐渍化程度)逐年加重,提高莲藕耐盐特性尤为必要,对充分利用滩涂盐碱土地、扩大莲藕栽培范围具有重要的意义[3]。目前,生产上栽培类型莲藕对盐敏感,低浓度的盐能够影响植株正常发育,而耐盐资源存在于野生种或花莲类型中,所以研究莲藕耐盐机理对培育莲藕耐盐生产用种非常重要。目前国内外莲藕耐盐相关研究较少,克隆耐盐基因鲜有报道。本研究首次通过从耐盐莲藕资源中分离到一个Lr NHX,在此基础上对其表达进行了分析,为进一步验证其功能,提高莲藕耐盐性奠定基础。Na+/H+反向转运蛋白位于细胞膜上,通过维持细胞内外渗透压,把Na+富集于液泡中(主要与液泡中H+移位酶、H+-ATPase和H+-PPiase相互作用,在细胞内产生电化学势,Na+通过主动运输方...  (本文共5页) 阅读全文>>

《西南农业学报》2017年07期
西南农业学报

滇龙胆香叶醇10-羟化酶基因的克隆与表达分析

【研究意义】滇龙胆为云南省道地药材。近年来,由于其市场需求量急剧增加,野生滇龙胆遭到人为过度采挖,导致其野生资源匮乏,现已被列为国家三级重点保护植物[1]。龙胆苦苷是滇龙胆的主要药用成分,要解决市场上滇龙胆植物原料问题,需要搞清龙胆苦苷的合成途径和调控机制[2],为生产龙胆苦苷创造新途径。在龙胆苦苷生物合成途径中,10-羟香叶醇(10-hydroxygeraniol)是重要的中间产物[3-4]。【前人研究进展】在川西獐牙菜(Swertiamussotii)中,细胞色素P450单加氧酶(CYP)香叶醇10-羟化酶(geraniol 10-hydroxylase,Sm G10H,EC 1.14.14.1)能够催化香叶醇(geraniol)生成10-羟香叶醇[5-7],该反应需要NADP、H+和氧的参与;茉莉酸甲酯(Me JA)能够通过诱导该基因的表达,促进獐牙菜苦苷(swertiamarin)的累积[8]。目前,香叶醇10-羟化酶基...  (本文共8页) 阅读全文>>

《中草药》2017年18期
中草药

鱼腥草HMGR基因cDNA克隆、差异表达及蛋白质结构分析

萜类化合物是鱼腥草主要有效药用成分之一,3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A redutase,HMGR)是萜类化合物合成途径中重要的限速酶[1-2],其活性是将3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原成甲羟戊酸(MVA)。植物的HMGR结构由4个部分组成:N-末端、跨膜区、连接区和C-末端区。具有催化活性的C-末端区和跨膜区在不同物种中高度保守,HMGR的催化区有4个保守的基元[3]。HMGR基因在调控植物萜类化合物的生物合成中发挥关键作用。目前在药用植物中克隆和研究HMGR基因已成为近年的研究热点,许多药用植物的该基因已被成功克隆。如雷公藤Tripterygium wilfordii Hook.f.[4]、阳春砂Amomumvillosum Lour.[5]、甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.[6]、秦艽Gentiana macr...  (本文共5页) 阅读全文>>