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一个新的白血病相关基因—LRP16的克隆、序列分析、表达特征及其生物学功能推测

为寻找克隆与急性白血病(AL)复发密切相关的基因,本组曾采用限制性路标基因组扫描技术对初诊与复发两种不同病程阶段的急性髓系白血病(AML)细胞基因组 DNA进行了 CpG岛甲驯差异的比较;最终克隆到一段复发状态白血病细胞中NotI酶切位点CpG高度甲基化的DNA片段(2948bp)。本研究从这一DNA序列出发,通过GenBank nr及hESTs数据库电子杂交信息,采用 3’及 5’-cDNA末端快速扩增技术(Rapid Amplification of cDNA End),克隆到一个与白血病复发相关的人类基因全长编码 cDNA,本组将其命名为 LRP16,作为新基因于 1999年12在国际GenBank首次登录注册(登录号:AF202922)。以 LRP16全长cDNA序列为探针,惜助人类基因组测序信息将该基因精确定位于染色体11q12.1,在该位置与 FLRT1、FLJ20113三个基因共同形成一个小的基因簇。序列分析表明  (本文共99页) 本文目录 | 阅读全文>>

《军医进修学院学报》2000年02期
军医进修学院学报

新的白血病相关基因LRP16的克隆

目前认为基因水平的改变是导致急性白血病发生的重要原因之一,人们正在努力地发现新的白血病相关基因、探讨白血病的发生机制从而达到在基因水平治疗白血病的目的[1]。本研究采用RLGS(restrictionlandmarkgenomicscanning)及RACE(rapidamplificationofcDNAend)等新的分子生物学技术克隆到一新的白血病相关基因LRP16,并已完成染色体定位及全长cDNA序列分析。基金项目:国家自然科学基金资助项目(3997082);“九五”军队科研基金项目(98M141)1 材料和方法11 标本 来源于正常人外周血单个核细胞、正常骨髓细胞及急性非淋巴细胞白血病患者的骨髓细胞;按文献介绍方法提取DNA[2]。12 RLGS技术按文献介绍方法[3,4] 用20U内切酶NotI(Promega)消化基因组DNA,同位素p32末端标记后经20UEcoRV(Promega)酶切,取1.5μg行0.8%琼脂...  (本文共4页) 阅读全文>>

《当代医药论丛》2014年13期
当代医药论丛

用克隆技术分析新白血病相关基因LRP16对白血病发病机制的影响

白血病又被称为“血癌”,它是一种造血干细胞恶性克隆性疾病。白血病的主要发病机制是因血液中某一白细胞系列的前体细胞失去分化成熟能力,进而在骨髓和其他造血组织中发生恶性克隆性增生,或出现积聚现象,最终破坏人体的全身组织器官,影响患者的正常造血功能。白血病患者的临床表现为贫血、出血、感染及其它症状[1]。经过研究发现,基因的改变是导致急性白血病发生的重要原因。为了研究白血病的发病机制,我们对急性白血病患者的基因进行克隆分析,并发现白血病的新相关基因。为了了解白血病新相关基因对白血病发病机制的影响,我们应用RLGS和RACE等新的分子生物克隆技术对相关基因进行研究,同时完成相关基因的染色体定位和全长cDNA的序列分析。1资料与方法1.1一般资料我们从正常人体的外周血单个核细胞、正常骨髓细胞和急性非淋巴细胞中提取出DNA。再从白血病患者的骨髓细胞中提取出DNA。1.2技术方法1.2.1 RLGS技术方法我们采用内切酶消化基因组DNA,并对...  (本文共1页) 阅读全文>>

吉林大学
吉林大学

急性白血病相关基因甲基化异常的研究

DNA甲基化异常是急性白血病(AL)重要发病机制之一。ZO-1是一种紧密连接蛋白,在细胞连接及信号传导中起重要作用,参与调控细胞的增殖与分化。前期工作表明,该基因在白血病小鼠中呈高甲基化状态,推测其可能是一个新的白血病相关基因。本研究通过对细胞系及大量临床标本ZO-1基因启动子区甲基化状态进行检测,首次证明ZO-1基因是一个新的人白血病相关基因,该基因启动子区在各种类型AL中呈特异性高甲基化状态,与AL发生发展密切相关,是一个新的预后不良因素;ZO-1基因的表达受甲基化状态调控。ZO-1基因启动子区高甲基化是一个新的白血病通用分子标志物,对其进行检测可作为AL早期诊断、疗效评估、预后判断、复发预测、靶向治疗、微小残留病(MRD)监测和指导个体化治疗的有效手段,具有深远的临床意义及推广应用价值。首次成功建立用于定量检测ZO-1基因启动子区甲基化水平的SYBR-GreenI RQ MS-PCR方法,灵敏度高、特异性好,可作为一种新的...  (本文共136页) 本文目录 | 阅读全文>>

《医学综述》1998年10期
医学综述

白血病相关基因研究现状

白血病是一组恶性克隆性增生疾病,其生物学特征细胞照射UV,使细胞DNA受损,细胞内P’‘表达也增是增殖失控、分化受阻和凋亡异常,其根本原臼在于基加。因此,认为P”在细胞生长过程中可能作为分子感受因组中3大类基因即癌基因、抑癌基因和凋亡基因的异器,以一种分子警察的身份监测细胞内DNA的状态,常,如癌基因高表达、抑癌基因低表达或不表达和凋亡如果细胞DNA受损,P’‘蛋白水平就增高,以中止增殖,基因的异常表达可使&内正常细胞突变或(和)增殖失使受损细胞获得修复DNA的时间,如果DNA细胞无控,最后导致癌变口j。阐明白血病的基因异常不仅对理法修复,则pn持续增高,引起细胞凋亡。如细胞受UV照解其发病原理,而且也将对其诊断和治疗产生重大影射强度大引起细胞内P”的突变,突变的P”蛋白不能引响,本文综述白血病相关基困研究现状。起细胞的增殖停滞或凋亡,细胞内受损的DNA就不能修lp“墓因复或清除,从而导致体内突变细胞增多,成为生长失控庙‘野生型...  (本文共3页) 阅读全文>>

中国人民解放军军医进修学院
中国人民解放军军医进修学院

性激素及其下游基因LRP16对前列腺癌的影响

目的1.探讨性激素与促性腺激素分泌水平对前列腺癌的影响。2.探讨过表达LRP16基因对人前列腺癌ALVA41和DU145细胞增殖的影响。3.探讨过表达LRP16基因对人前列腺癌ALVA41和DU145细胞增殖的影响的可能的机制。方法1.测定了53例确诊未治的前列腺癌患者性激素:睾酮(T)、雌二醇(E_2)与促性腺激素,包括黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)水平,同时测定了253名正常对照者的性激素与促性腺激素水平。2.(1)构建LRPl6真核表达载体(pcDNA3.1-LRP16)并与对照空载体(pcDNA3.1)分别转染ALVA41和DU145细胞,将G418筛选获得的表达外源LRP16基因以及空载体的四组细胞(A16、A3.1、D16、D3.1)继续传代培养。(2)用四氮唑蓝染色(MTT)法测定并比较各组细胞的生长曲线。3.提取两种细胞的总RNA,通过RT-PCR方法测定雌激素受体仅α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)...  (本文共78页) 本文目录 | 阅读全文>>