分享到:

胰岛素样生长因子结合蛋白-1基因克隆、表达以及功能研究

胰岛素样生长因子结合蛋白-1基因克隆、表达及功能研究胰岛素样生长因子结合蛋白-1(Insulin-like growth factor bindingProtein IGFBP-1)是重要的内分泌激素之一。它的生物学作用及作用机制仍未完全阐明。我们根据 分子生物学、生物信息学理论,采用基因重组、酵母双杂交、细胞培养、CAM及鸡胚神经背根节培养等技术对IGFBP-1进行了系列研究。全文共分三个部分一、为了获取IGFBP-1基因和蛋白,本研究采用PCR方法,从人胎肝cDNA文库中成功钓取了IGFBP-1基因。并采用基因重组技术,构建了IGFBP-1融合表达载体,首次利用IGFBP-1与GST基因融合表达方式,实现了重组IGFBP-1在原核细胞中的高效表达,采用亲和层析法和凝血酶切割分离获得纯度达85%以上的重组IGFBP-1蛋白。二、为发现IGFBP-1可能的生物学作用及作用机制,首次采用酵母双杂交技术对IGFBP-1进行了研究。结  (本文共87页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国科学院研究生院(海洋研究所)
中国科学院研究生院(海洋研究所)

三种养殖扇贝热休克蛋白HSP70在逆境因子下的表达和相关基因的克隆

本文利用免疫学和分子生物学手段对我国三种养殖经济扇贝,栉孔扇贝(Chlamys farreri)、海湾扇贝(Argopecten irradians)和虾夷扇贝(Mizuhopecten yessoensis)热休克蛋白 70(Heat Shock Protein 70, HSP70)的诱导表达和基因序列进行了研究。应用免疫印迹法(Western immunoblotting),对高温刺激条件下,栉孔扇贝不同组织中 HSP70 的表达进行了检测。实验结果显示,热休克可以使扇贝鳃组织中 HSP70 的表达明显升高,但在肌柱、外套膜、性腺中未检测到 HSP70 表达的变化。论文首次将 FCM 技术引入扇贝血淋巴细胞 HSP70 表达的研究。2003 年五月,应用流式细胞术(flow cytometry,FCM)对几种逆境因子(高温、低温、细菌感染、水质恶化)作用下,栉孔扇贝血淋巴细胞中 HSP70 的表达进行了初步的研究。实验数据的...  (本文共116页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国海洋大学
中国海洋大学

文昌鱼分子生物学:AmphiSRP19、AmphiLysC与AmphiS19基因克隆、表达和进化研究

文昌鱼(Amphioxus)是介于无脊椎动物和脊椎动物之间的过渡类型,是研究动物进化和胚胎发育的典型材料。利用分子生物学手段,研究文昌鱼有关基因的结构、进化和表达,可以揭示文昌鱼发育的分子生物学机制,有助于我们从分子水平上来了解脊椎动物的起源和进化。本文从青岛文昌鱼(Branchiostomabelcheri tsingtaunese)肠cDNA文库(本实验室保存)中,克隆了具有完整编码框的信号识别颗粒SRP19(AmphiSRP19)、溶菌酶(AmphiLysC)和核糖体蛋白S19(AmphiS19),并对其结构、表达和进化展开了研究。AmphiSRP19全长869bp,编码141个氨基酸组成的蛋白。该蛋白与人、小鼠、果蝇、大米、水芹和五种真菌的SRP19蛋白的相似性分别为52.8%,54.9%,42.3%,35.3%,28.2%和19.7%-24.6%。与其他真核生物SRP19蛋白一样,位于SRP RNA结合位点上的氨基酸残...  (本文共169页) 本文目录 | 阅读全文>>

复旦大学
复旦大学

人类激酶基因CK1γ1L2和PDIK1L的克隆和功能研究

蛋白激酶是催化蛋白质磷酸化的酶,它们在细胞信号传导中发挥重要作用。蛋白激酶可以分为丝/苏氨酸蛋白激酶和酪氨酸蛋白激酶。酪蛋白激酶是广泛存在于真核生物的丝/苏氨酸蛋白激酶,包括CK1和CK2两大亚类。其中CK1是发现较早的,哺乳动物的CK1发现有α、β、γ、δ和ε等5个亚家族,CK1γ亚家族目前发现有CK1γ1、CK1γ2和 CK1γ3三个成员。还有一种既能催化丝/苏氨酸残基磷酸化又能催化酪氨酸残基磷酸化的激酶,这种具有双底物特异性的激酶称为双特异性蛋白激酶。我们从胎脑cDNA文库中克隆得到两条人类的新激酶基因:CK1γ1L2和PDIK1L。CK1γ1L2为酪蛋白激酶CK1γ1的一个新的剪切体,该基因全长1756 bp,编码含438个氨基酸残基的蛋白,其核苷酸序列和氨基酸序列与大鼠CK1γ1基因相比分别为93%和94%的同源性。CK1γ1L2定位于人染色体15q22.31,包含11个外显子。亚细胞定位结果发现CK1γ1L2定位于细...  (本文共134页) 本文目录 | 阅读全文>>

复旦大学
复旦大学

人类SCDR10B、LHFPL1和CYPJ基因的克隆及其编码蛋白的特征与功能研究

由于生物基因组进化中的保守性,具有某一功能的基因在不同物种之间常具有一定的同源性。这种同源性对新基因的克隆和功能研究具有指导作用。利用这种基因间的同源性,有目的的克隆基因家族新成员,已经成为新基因克隆的有效策略。本论文分为三个部分,第一和第二部分利用同源策略,克隆到新的人短链脱氢酶/还原酶基因SCDR10B和脂肪瘤HMGIC融合伴侣类基因LHFPL1,对其功能进行了初步研究,第三部分对脯氨酸异构酶Cyclophilin J 的生化特性和结构进行了研究。短链脱氢酶/还原酶(Short-chain Dehydrogenases/Reductases,SDR)家族是一个由很多成员组成的大家族,其中大部分是NAD+或NADP+依赖的氧化还原酶。在本论文第一部分中,我们通过同源筛选的策略,用11β-HSD1为信息探针,拼接并从人脑组织cDNA文库中克隆到新基因SCDR10B。该基因编码的蛋白质具有保守的短链脱氢酶/还原酶结构域,氨基酸序列...  (本文共94页) 本文目录 | 阅读全文>>

复旦大学
复旦大学

灰飞虱免疫相关基因及微管蛋白基因的克隆和分子鉴定

灰飞虱(Laodelphax striatellus)是水稻条纹叶枯病毒(RSV)等病毒的介体,可传播水稻条纹叶枯病等严重的水稻病害。为了了解灰飞虱的先天免疫及其与病毒之间的相互作用,本实验利用抑制消减杂交法(SSH)试图克隆与E.coli免疫刺激及RSV感染有关的免疫相关基因。经三轮筛选后,从E.coli免疫刺激消减文库中得到44个阳性克隆,从RSV感染消减文库中得到13个阳性克隆。将阳性克隆插入片段测序并继续同源搜索后发现:其中22条差异表达片段与13种不同的基因或基因家族有较高的同源性,有些基因已经被证实与先天免疫相关, 其余的差异表达片段与已知的基因没有同源性,可能是新基因。对来自RSV感染消减文库的一个免疫相关基因Mucin 基因进行Northern杂交分析,结果显示只能在RSV感染的灰飞虱中检测到它的转录物,而用细菌感染的灰飞虱中检测不到。推测该基因的表达与RSV感染有关,从而也证明了作为一种快速便捷的方法,SSH可...  (本文共86页) 本文目录 | 阅读全文>>