分享到:

海水鱼细胞系FG、SPH和RSBF的特性分析及其在典型海洋污染物毒性检测上的应用

鱼类细胞培养已成为鱼类病毒学、肿瘤学、毒理学、遗传学和免疫学等研究的重要手段。本文首先从形态、蛋白质(同工酶)和DNA(RAPD分析)三个层次水平对牙鲆鳃细胞系FG、鲈鱼心脏细胞系SPH和真鲷鳍细胞系RSBF的特性进行了分析,并分别与其所对应的原代培养组织作了比较。形态、蛋白质和DNA分析的结果表明:(1)三株海水鱼细胞系的乳酸脱氢酶(LDH)酶谱彼此明显不同,可作为对它们进行种属鉴定和交叉污染鉴别的有效遗传标记;(2)与所对应的原代培养组织的LDH酶谱相比,细胞系FG的LDH酶谱维持不变,而细胞系SPH和RSBF的LDH酶谱变化较大;(3)与所对应的原代培养细胞的形态相比,细胞系FG的细胞形态没有明显改变,而细胞系SPH和RSBF的细胞形态则发生了明显改变;(4)60个DNA随机引物对三株细胞系及其原代培养组织的RAPD分析表明,有35-48%的引物在细胞系及其原代培养组织之间产生完全相同的RAPD指纹,为这三株细胞系种属来源  (本文共101页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国协和医科大学
中国协和医科大学

人肺癌分子细胞遗传学异常改变的研究

肺癌是人类高发恶性肿瘤,其发病率和死亡率都呈逐年上升的趋势,严重危害人类健康,深入研究肺癌发生的分子细胞遗传学机理,可以为肺癌的预防、早期诊断和治疗提供理论依据,有利于从根本上控制肺癌这一恶性肿瘤的发生和发展。本文以双色荧光原位杂交(Dual-color FISH)和比较基因组杂交(CGH)技术为主,配合Western Blot、PCR、免疫组织化学染色等技术,对人支气管上皮细胞永生化细胞系M和临床肺癌、癌旁支气管上皮、支气管镜刷片/活检标本细胞中的遗传学改变进行了研究。结果如下:1.对细胞系M和10例临床肺癌标本的CGH结果表明,肺癌中发生的染色体改变主要是1q,3q,7p,8q,17q,20q等的扩增和3p,4q,5q,8p,10q等的丢失。这些染色体不稳定性改变在肺癌标本中的发生率很高,可能会影响到位于该区域的癌基因或抑癌基因的异常表达,从而促进肿瘤的发生和发展。2.用双色荧光原杂交技术发现,细胞系M中,P1 1063(p...  (本文共84页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国协和医科大学
中国协和医科大学

人肝母细胞瘤细胞系(HepG2)所合成的2'5'低聚腺苷酸合成酶的生物学特点及其在临床上的应用

2′5′低聚腺苷酸合成酶(2′5′AS)是干扰素(IFN)抗病毒过程中的一个关键酶。在通常情况下,它是干扰素诱导产生的。自1957年发现干扰素以来,迄今已有近四十年的历史。从70年代开始,相继发现干扰素除具有广谱的抗病毒繁殖活性以外,还有许多生物学活性,例如调节机体的免疫功能,抑制细胞分裂,抑制肿瘤生长,改变细胞膜的生物学性质等。干扰素是细胞功能的重要调节系统。可是,IFN-2′5′AS系统抗病毒,抗肿瘤的作用机理及途径至今尚不十分明了。本研究在HepG2细胞系(肝母细胞瘤细胞系)上进行2′5′AS的系列工作,旨在进一步了解IFN-2′5′AS抗病毒,抗肿瘤的作用机制,结合2′5′AS在临床上的应用,寻觅和探索病毒性肝炎-肝硬化-肝癌的发生机理。研究分二部分进行。(一)人培养HepG2细胞系所合成的,2′5′AS的生物学特点。通过HepG2细胞培养,收获后对细胞匀浆进行2′5′AS基础活性测定,并比较不同细胞系2′5′AS的特异...  (本文共118页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国协和医科大学
中国协和医科大学

人肝癌Bel_(7402)细胞系天然耐药及5-FU获得性耐药的机理以及几种天然化合物逆转多药耐药的作用的研究

肝癌是临床肿瘤化疗敏感性最差的恶性肿瘤之一,对抗肿瘤药天然耐药和化疗过程中产生的继发性耐药是其化疗敏感性差的重要原因之一。迄今,氟尿嘧啶类抗癌药及其衍生物目前仍是临床上治疗肝癌的首选药物之一。肝癌对该类药物的耐药又十分常见。迄今国内外尚无通过体外药物筛选建立该类药物肝癌耐药模型并进而探讨其耐药机理的研究报导。为此,我们首先研究了人肝癌Bel_(7402)细胞株的天然耐药性及其机制,继而又以Bel_(7402)作为亲本细胞,经过体外约6个月的多步骤连续5-FU筛选,得到了对5-FU耐药约161倍的5-FU耐药细胞系Bel_(5-FU20000),并对其生物学特征及耐药机理进行了研究。旨在为临床克服肝癌耐药提供理论依据,并为筛选新的抗肝癌药及化疗增敏剂提供体外模型。在上述研究基础上,我们应用以上耐药细胞株及其他已知的MDR耐药株筛选耐药逆转剂,幸运地发现,XX中药粗提取物LCC及其单体LC,LCl,在体外对几种肿瘤多药耐药(MDR)...  (本文共145页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国协和医科大学
中国协和医科大学

儿童急性淋巴细胞白血病及细胞系p73、DCC、nm23-H1、nm23-H2和E2A-PBX1基因异常表达的研究

我们应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术、定量RT-PCR技术检测了63例急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞系和53例原发性儿童ALL患者的p73、DCC、nm23-H1、nm23-H2和E2A-PBX1融合基因mRNA表达改变情况,同时结合病人的临床病例资料进行了分析。应用DNA甲基化酶谱测定(REP)、双亚硫酸盐修饰的PCR(MSP)和PCR产物测序(BGS)等技术对63例急性淋巴细胞白血病细胞系p73基因第1外显子的甲基化进行了检测。63例ALL细胞系中,p73mRNA异常表达率33.3%(21/63);DCC mRNA阴性表达率46.0%(29/63);nm23-H1、-H2 mRNA表达明显高于正常血细胞;E2A-PBX1融合基因mRNA占11.0%(7/63),全部为前B-ALL,占前B-ALL 19.0%(7/37)。53例原发性儿童ALL中,p73 mRNA阴性表达率26.4%(14/53),DCC mRNA...  (本文共99页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国林业科学研究院
中国林业科学研究院

昆虫脂肪体细胞体外增殖方法及同源病毒敏感脂肪体细胞系建立研究

昆虫细胞系具有非常广泛而重要的科学和应用价值。本研究参考动物细胞培养中植块培养的方法,从昆虫幼虫脂肪体细胞的原代培养入手,系统研究了以昆虫脂肪体组织为实验材料建立昆虫细胞系的方法,并初步探讨了昆虫细胞在体外增殖的机制,试图为更多昆虫脂肪体细胞系的建立提供有效的技术手段。研究中选用健康的光肩星天牛(Anoplophora glabripennis)幼虫脂肪体组织为实验材料进行原代培养,通过比较不同虫龄、不同取材部位的大小和完整性、不同培养表面、不同培养液种类和pH、不同血液中酚氧化酶原抑制物的种类和添加比例、原代培养物的贴壁处理等因素对原代培养结果的影响,以及传代方式、条件、时机等对传代培养结果的影响,试图探索出一套特有的昆虫脂肪体细胞建系方法。实验结果表明,由脂肪体组织建立昆虫细胞系,最佳的取材为末龄或进入预蛹期幼虫体内完整的脂肪体组织,优先使用一次性塑料培养瓶,原代细胞培养液的最佳配制比例为:TNM-FH(80%),胎牛血清(...  (本文共105页) 本文目录 | 阅读全文>>