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庚型肝炎病毒转基因小鼠模型的建立及其特性研究

GBV-C/HGV是美国Abbott实验室Simons及Genelabs实验室Linnen等人分别于1995年、1996年独立克隆的新型致病因子,分别称为GBV-C及HGV。由于核酸和蛋白水平的高度同源性,二者被认为是同一种病毒,本文统称为HGV。HGV是单正链RNA病毒,长约9400nt,编码2900左右氨基酸,含一个开读框架,基因组5'端结构基因依次编码核心蛋白、包膜蛋白1和包膜蛋白2;3'端非结构基因依次编码非结构蛋白NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B,在5'及3'端侧翼分别为5'及3'非编码区,因此HGV被认为与HCV一样,属黄病毒科成员。本实验室于1998年也成功克隆了HGV的全长cDNA,命名为HGVqz(GenBank登录号为AF081782)。HGV的进一步研究受阻于无合适的HGV研究体系,其宿主范围窄,只感染人和黑猩猩等高等灵长类动物,因此建立转基因小鼠使常规的实验动物“感染”HGV,并对其  (本文共101页) 本文目录 | 阅读全文>>

华中农业大学
华中农业大学

转基因小鼠乳腺表达人瘦蛋白的研究

动物转基因研究是目前分子生物学研究的热点内容之一,其基本特征是改变动物的遗传组成,而改变动物遗传组成的目的是多种多样的。在本研究中,我们希望通过改变动物的遗传组成来赋予转基因动物一种新的性状,所用的试验动物为昆明小白鼠。随着生活水平的提高,肥胖日益成为一种严重的社会问题,现代医学研究表明肥胖与人的糖尿病、心脏稿及高血压有密切关系。由人肥胖基因编码的瘦蛋白是调节脂肪代谢及体重的重要因子之一。能否用转基因动物生产该种蛋白质以及能否将该种蛋白质用于治疗与人肥胖有关的疾病是进行这项研究的目的。用包含兔乳清酸性蛋白基因启动子及其远端上游区(约6.3kb,-6300bp-+28bp)、人肥胖基因的编码序列(约1.0kb)及兔乳清酸性蛋白基因终止子(约0.2kb)的三个质粒经亚克隆构建了融合表达载体,在构建表达载体之前,我们首先用AB1377 DNA测序仪对人肥胖基因进行了序列测定,测定结果表明该序列包含人肥胖基因第一外显子的最后9bp,完整...  (本文共87页) 本文目录 | 阅读全文>>

第四军医大学
第四军医大学

天然抗角蛋白自身抗体转基因小鼠的建立及相关研究

自从Krogh等1970年发现抗角蛋白自身抗体(anti-keratin autoantibody,AK auto Ab)以来,众多学者对其天然存在、生物学特性、生理及病理意义等方面进行了较为广泛的探索。目前研究提示AK auto Ab可能参与了皮肤的多种生理和病理过程,并具有重要的调节作用。然而,由于实验方法等方面的局限性,以往对于AK auto Ab生理、病理意义的认识仍较为有限,而且以往常规的方法无法进行AK auto Ab产生机制等关键问题的研究。因此,为了全面研究AK auto Ab的特性并探讨其产生机制,建立一种理想的模式生物进行在体研究就显得非常必要。近年来抗体转基因动物技术的成熟和应用为彻底阐明上述问题提供了可能。按照抗体基因表达的等位基因排斥定律,如果将经过重排的抗体基因导入转基因小鼠的基因组,那么这些基因将会先于内源抗体基因表达,而且内源抗体基因将不再发生重排,该转基因小鼠将主要表达同一抗原特异性的B细胞。这...  (本文共93页) 本文目录 | 阅读全文>>

第四军医大学
第四军医大学

拉米夫定和干扰素α对孕期降低HBV转基因小鼠血中HBV载量有效性和安全性的初步研究

目的:既往研究证实阻断乙肝病毒宫内传播的关键之一是降低母亲外周血中病毒含量;拉米夫定(3TC)、干扰素α(IFNα)是抗HBV药物中目前在临床上使用最广泛、也是抗病毒效果较好的药物,但它们的妊娠药物分级均为C级,即尚未对妊娠妇女或动物进行研究。本研究在国家自然科学基金(No30070668)的资助下,首次应用可高水平表达HBV的转基因小鼠,在不同妊娠期中,进行3TC、IFNα抗病毒治疗,检测母血中HBsAg、HBV DNA等感染指标变化,同时观察其对母胎生长发育的影响,以期探讨这两种药物对降低母血HBV含量的作用和母胎安全性;通过评价3TC和IFNα对妊娠合并乙型肝炎病毒携带状态的疗效与安全性的探索性实验研究,为进一步的HBsAg阳性孕妇妊娠期,尤其是在妊娠早期是否选择这两种药物进行抗病毒治疗以阻断宫内传播提供一定的动物实验依据。另外,对HBV转基因小鼠作为研究HBV宫内传播动物模型的可能性做初步探索。方法:1.收集昆明种小鼠的...  (本文共124页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国人民解放军军事医学科学院
中国人民解放军军事医学科学院

HBV转基因小鼠的肝脏蛋白质组学研究

肝细胞癌(HCC)是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一,在世界范围内,每年发生HCC的病人超过100万人。HCC的发生是一个多步骤、多诱因的过程,与多种致病因素密切相关,比如黄曲霉素的摄入、高铁饮食以及酗酒等尤其与慢性乙型肝炎病毒(HBV)的感染密切相关。但是,HBV的各个基因在HCC发生过程中的作用机制目前还不清楚。HBV不能感染培养的细胞,黑猩猩是唯一敏感的实验动物,因此建立适当的动物模型对研究HBV致肝细胞癌的机制尤为重要。为了研究HBx基因在肝细胞癌发生过程中的作用,我们利用基因打靶技术,将HBx基因定位整合于小鼠基因组的p21位点,获得了稳定表达并遗传的HBx转基因小鼠。通过对转基因小鼠的组织病理学分析,发现HBx转基因小鼠在6月龄就开始发生肝细胞凋亡,12月龄开始发生肝脏脂肪病变,而且随年龄的增加表型逐渐加重。转基因小鼠从18月龄开始发生肝细胞癌,肿瘤细胞发生核异形,细胞中内质网疏松形成空泡,核糖体脱落。肿瘤细胞内糖原含...  (本文共91页) 本文目录 | 阅读全文>>

天津医科大学
天津医科大学

异种器官移植用血管内皮细胞组织特异性表达人DAF、CD59转基因小鼠的研究

为克服由于人的补体调节蛋白(CRP)在转基因动物体内广泛表达给宿主带来的不利影响,我们采用受精卵显微注射技术,将本室构建的两种包含有血管内皮细胞组织特异性调控元件、目的基因自身第一个内含子及人CRPcDNA序列外源基因导入小鼠受精卵的原核中,通过胚胎移植建立血管内皮细胞组织特异性高效表达人DAF、CD59转基因小鼠,以研究人DAF、CD59基因在转基因小鼠血管内皮细胞组织特异性表达规律,检测这些转基因小鼠抗超急性排斥反应(HAR)能力并探讨外源基因在转基因动物传代过程中的遗传规律。为此本实验组做了如下工作。第一部分 血管内皮细胞组织特异性表达人DAF、CD59转基因小鼠的制备目的 制备原代血管内皮细胞组织特异性表达人DAF、CD59转基因小鼠。方法 用限制性内切酶Xba Ⅰ/BamH Ⅰ/Sca Ⅰ酶切本室构建含有人DAF cDNA外源基因的质粒,回收纯化3.7kb DNA片段,依次包括人ICAM-2启动子序列,人DAF cDN...  (本文共125页) 本文目录 | 阅读全文>>