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类风湿性关节炎的反义VEGF基因治疗实验研究

滑膜血管翳形成是类风湿性关节炎(RA)的主要病理特征,大量研究发现滑膜组织中血管内皮生长因子(VEGF)的过度表达是引起滑膜血管翳形成的主要因素。如果能够抑制RA发病过程中血管内皮生长因子的过度表达,将有可能抑制滑膜血管翳的形成,对RA产生一定的治疗作用。采用VEGF抗体或受体拮抗剂进行关节腔注射是一种方法,但注射的外源性蛋白质半衰期短,并且容易引起免疫排斥反应,所以应用受限。为了克服生物制剂(抗体,受体拮抗蛋白等)关节腔注射疗法半衰期短,局部反应大的缺点,我们采用滑膜组织基因转染的方法,将表达反义VEGF基因的腺病毒载体导入病变的滑膜组织,在基因水平上千预病变滑膜的VEGF过度表达,并探讨其对RA形成的影响。第一部分VEGF在大鼠类风湿性关节炎模型中的动态表达目的:观察大鼠类风湿性关节炎形成过程中滑膜组织VEGF的动态表达。方法:采用皮下多点注射Ⅱ型胶原的方法诱导大鼠胶原性关节炎模型,采用免疫组化,计算机图像分析技术观察VEG  (本文共125页) 本文目录 | 阅读全文>>

成都中医药大学
成都中医药大学

电针对转基因鼠类风湿性关节炎HLA-DR_4基因调控的研究

目的:以转基因鼠为研究对象,运用现代生物技术,从免疫学,遗传学等角度深入系统地探讨电针对类风湿性关节炎易感基因调控机制。方法:采用人类HLA-DR_4β1基因转基因小鼠,转基因阴性小鼠和非转基因小鼠胶原性关节炎为疾病模型,以电针为主要治疗方法,将大于5周龄的小鼠随机分成电针治疗组、甲氨喋呤对照组和模型对照组,运用分子生物学、遗传学、免疫学、细胞学和病理学等多种手段和技术,从动物个体、组织、细胞、分子及基因水平,研究电针治疗RA的特点和环节,并阐明其作用机理。结果:①电针具有明显的抗炎、镇痛作用;②电针可以抑制T淋巴细胞和NK细胞的活化;③电针在调控类风湿性关节炎易感基因的表达中有一定的作用。结论:电针通过调控类风湿性关节炎易感基因的表达,影响MHCⅡ类分子的抗原递呈功能达到对CIA小鼠的治疗目的。  (本文共102页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国人民解放军军事医学科学院
中国人民解放军军事医学科学院

阻断IL-1与TNF-α治疗类风湿性关节炎的初步探索

IL-1与TNF-α是RA发病与病程演变过程中起重要作用的两个细胞因子,临床和实验研究均证明,分别阻断这两个细胞因子都可以有效减轻RA症状,而且治疗效果有一定的互补性。Alison等将IL-1ra和PEG化的TNFR Ⅰ联合运用在小鼠CIA模型的治疗中,发现两种药物联合治疗的效果要明显好于二者的累加效果。本研究旨在通过对IL-1ra突变体和TNFR Ⅱ15-157与IgG铰链区融合蛋白的研究,进行阻断IL-1与TNF-α治疗RA的初步探索。第一,筛选更加有效地阻断IL-1的IL-1ra突变体。首先构建了IL-1ra的突变体库,通过噬菌体表面呈现,利用膜上富含IL-1R的EL-4细胞对噬菌体-IL-1ra突变体进行亲和富集和phage-ELISA筛选,共筛选到21个与EL-4和Raji细胞都特异性结合的克隆,经过序列分析确定其中有11个是发生了错义突变的IL-1ra。为了进一步检测所获得的突变体的活性,将野生型IL-1ra与获得的...  (本文共79页) 本文目录 | 阅读全文>>

大连医科大学
大连医科大学

MMP-12在类风湿关节炎中和骨性关节炎中的表达及中药对类风湿性关节炎的治疗作用

目的:基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase,MMPs)是分解细胞外基质的重要因子。人类金属弹性蛋白酶(Human metallolastase, MMP-12)是MMPs的一种。现已证实由巨噬细胞分泌MMP-12的异常表达与许多疾病有关,如类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis, RA),骨性关节炎(Osteoarthritis, OA) 等。本试验的目的是研究RA和OA病变中MMP-12在其滑膜组织与关节液中的表达,同时观察中药对类风湿性关节炎的治疗作用。方法:滑膜组织取自临床确诊的22例RA及29例OA患者(均为膝或髋关节置换手术患者),用免疫组织化学,Northern blot, Western blot及 Zymography 等实验方法进行分析。此外,用Western blot及Zymography对滑液中的MMP-12进行定量分析。同时对中药应用组和非中药应用组的滑膜组织...  (本文共73页) 本文目录 | 阅读全文>>

第四军医大学
第四军医大学

DDR2参与类风湿性关节炎发病的分子机制研究

类风湿性关节炎(RA)是一种以慢性、对称性多关节炎为主要临床表现的自身免疫性疾病。它的发病机制复杂,有多种细胞、细胞因子和蛋白酶类参与。DDR2是一类新发现的受体型蛋白酪氨酸激酶,它的胞外区的盘状结构域可以识别并结合胶原,在细胞的增殖、分化、侵袭和转移中具有重要作用。研究显示DDR2在类风湿性关节炎的滑膜细胞中高表达,并且可以上调滑膜细胞MMP-1表达。MMP-1是一种基质金属蛋白酶类,可以降解细胞外基质的多种成分,最终导致软骨、韧带及骨的破坏,在RA发病中占有重要的地位。在类风湿性关节炎发病机制中另外一种更为重要的基质金属蛋白酶为MMP-13。与MMP-1相比,它降解胶原、破坏软骨的能力更强。DDR2是否可以通过调节MMP-13的表达参与类风湿性关节炎的发病目前尚无报道。研究DDR2对MMP-13表达的影响及其机制将有助于丰富对DDR2参与类风湿性关节炎发病机制的理解,为进一步研究新的治疗手段奠定基础。研究目的:观察DDR2对...  (本文共94页) 本文目录 | 阅读全文>>

吉林大学
吉林大学

黄芩及Glucosamine/Chondroitin对类风湿性关节炎治疗作用的实验研究

为了详细探讨黄芩(SB)和glucosamine/chondroitin(GC)及二者联合(联用后的药物以Arthrigia 命名)对类风湿性关节炎治疗作用的分子机制,选择RA 的体外模型-人关节滑膜细胞株MH7A 细胞和人软骨细胞株C28/I2 细胞,利用RT-PCR 及Western Blot 技术研究SB 和GC 对IL-1β和TNF-α细胞因子表达的影响,并检测SB 和GC 抗炎时对MMP-1 和MMP-13 mRNA 表达的影响。结果显示SB 可不同程度降低MH7A 细胞中MMP-1 和MMP-13 mRNA 的表达;GC 可轻微降低MH7A 细胞中MMP-1 mRNA 的表达;SB 可降低MH7A 细胞中TNF-α的蛋白表达,对IL-1β蛋白表达作用不明显。采用完全弗氏佐剂足跖部注射方式建立单侧后肢佐剂性关节炎的大鼠模型。对佐剂性关节炎的大鼠分别用SB、GC及不同浓度的Arthrigia 进行治疗给药,结果证实, A...  (本文共137页) 本文目录 | 阅读全文>>