分享到:

GDNF基因治疗大鼠脊髓损伤实验研究

本研究通过克隆大鼠 GDNF cDNA,并将其与真核表达载体 pEGFP-C3相连接,在国内外首次构建了大鼠在体转基因重组质粒pEGFP-GDNF,利用EGFP的发光性,为GDNF基因转染后在活体细胞中表达的动态观察建立了新的报告基因。借助多价阳离子脂质体DC-Chol 介导,在国内外首次成功的将pEGFP-GDNF基因导入正常大鼠中胸段脊髓组织中并得到良好表达。由于GDNF的 N端缺失11个氨基酸残基后并不影响 GDNF的神经营养活性。本实验设计将EGFP基因融合在GDNF基因的5’端,并且两者之间以编码柔软肽段的核昔酸连接以保持EGFP与GDNF各自的活性。这样既保留了GDNF蛋白的神经营养活性,又能通过EGFP观察GDNF蛋白在体内的表达。本研究首次发现在大鼠急性脊髓重度压迫损伤后经蛛网膜下腔局部给予 GDNF蛋白 10μg/日能减少胶质细胞增生,促进脊髓损伤区大鼠皮质脊髓束轴突再生和神经骨架蛋白的修复,并能有效促进损伤大  (本文共105页) 本文目录 | 阅读全文>>

苏州大学
苏州大学

rAAV2介导GDNF联合早期康复训练治疗大鼠脊髓损伤的实验研究

研究目的:本实验以雄性SD大鼠为研究对象,造模后应用rAAV2介导GDNF联合早期康复训练对脊髓损伤的大鼠进行实验研究,采用运动学评分、组织形态学和免疫组化等技术,通过分析脊髓损伤大鼠在不同时间点后肢运动功能的变化、损伤脊髓处GDNF的蛋白表达、运动神经元形态和数量的变化等,比较早期康复训练、基因治疗以及这两种因素的联合作用对脊髓损伤大鼠恢复的影响。研究方法:本实验采用了rAAV2介导GDNF基因治疗、早期康复训练及两者联合三种方法对脊髓重物打击造模后的大鼠进行干预:雄性SD大鼠90只,随机分为假手术组(n=18)、自然愈合组(n=18)、基因治疗组(n=18)、康复训练组(n=18)、联合治疗组(n=18),其中每组按照取材时间点不同随机分为造模后7d组(n=6)、14d组(n=6)、21d组(n=6)。对基因治疗组、联合治疗组大鼠造模成功后24h注射携带有人GDNF基因的重组腺相关病毒。对康复训练组、联合治疗组大鼠在造模成功...  (本文共66页) 本文目录 | 阅读全文>>

吉林大学
吉林大学

GDNF基因修饰的雪旺细胞对大鼠脊髓损伤保护作用的实验研究

脊髓损伤(Spinal cord injury, SCI)是外科常见的创伤性疾病,由于创伤后运动神经元的变性和轴突的断裂、降解而导致神经退行性改变或者运动功能的障碍。脊髓损伤后的神经修复一直是困扰医学界的难题。随着分子生物学的发展,基因治疗成为SCI治疗的重要手段之一,其疗效主要决定于目的基因和载体系统的选择。由于雪旺细胞(Schwann cells,SCs)易于获得和培养,植入宿主后能在宿主体内长期存活并能继续分裂,这些特性使其具有更广阔的应用前景。本研究旨在体外分离培养SCs,利用分子生物学技术,将胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotropic factor,GDNF)一种对神经元的发育、分化和存活具有重要作用的神经营养因子,通过脂质体导入SCs,观察其对脊髓神经元细胞凋亡基因的调控作用进而初步阐述其促进脊髓损伤的修复作用的机制,结果显示:在体外成功分离和鉴定得到的高纯度的S...  (本文共96页) 本文目录 | 阅读全文>>

吉林大学
吉林大学

壳聚糖纳米粒子胶质细胞源性神经营养因子基因复合体在脊髓损伤中应用的实验研究

目的:构建GDNF真核表达载体,制备壳聚糖纳米粒子,研究壳聚糖纳米粒子载GDNF基因在脊髓继发性损伤中的作用,为治疗脊髓损伤寻找新的途径。方法:首先应用RT-PCR、基因测序、分子克隆获得pcDNA3.1/GDNF质粒。同时制备壳聚糖纳米粒子,并对壳聚糖纳米粒子作为基因载体的相关性能进行检测。在体外实验中,壳聚糖纳米粒子载质粒GDNF基因从细胞外转入胶质细胞内,并在细胞内表达GDNF蛋白,进行细胞免疫化学,细胞增殖试验,流式细胞仪以及Westernblot检测;在体内实验中,首先制作脊髓损伤模型,将壳聚糖纳米粒子GDNF基因复合体(CS-nano/pcDNA3.1/GDNF)转入损伤的脊髓,应用免疫组化、实时RT-PCR半定量技术检测GDNF的表达,并进行细胞凋亡检测(TUNEL法)。结果:(1)成功构建大鼠GDNF真核表达载体;(2)制备壳聚糖纳米粒子,壳聚糖性能稳定,对GDNF有很好的保护作用;(3)体外实验中,壳聚糖纳米粒...  (本文共139页) 本文目录 | 阅读全文>>

青岛大学
青岛大学

GDNF基因修饰的嗅鞘细胞移植对大鼠脊髓损伤的治疗作用

脊髓损伤的修复仍是医学中的一大难题。目前尚缺乏有效的治疗方法。成年中枢神经系统(CNS)损伤后神经元的轴突能够发出足够的芽,长距离地生长并可通过外周神经移植物,但是,由于周围胶质细胞对其生长的抑制作用,从而CNS再生受阻。但嗅球除外,这主要是由于嗅球的嗅鞘细胞可改善损伤局部的微环境,进而促进损伤的脊髓神经纤维再生。多年来,人们采用细胞移植、胚胎组织移植、给予外源神经营养因子和基因治疗等方法治疗脊髓损伤,并已取得一定效果。近年来,人们发现嗅鞘细胞(Olfactory ensheathing cells,OECs)是介于雪旺氏细胞(Schwann cells)与星形胶质细胞之间的一类性质独特的胶质细胞类型。它可以通过周围—中枢神经移行区,并可在中枢环境中存在。OECs可以产生神经营养因子、神经连接素和表达细胞黏附分子。近年来,人们通过在脊髓损伤处移植OECs,发现OECs可以促进轴突的再生,使部分功能得到恢复。OECs的这些特性使其...  (本文共52页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中华创伤骨科杂志》2005年09期
中华创伤骨科杂志

胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)在大鼠骨髓基质干细胞中的表达

胶质细胞源性神经营养因子(glial cell-line de-rived neurotrophic factor,G D N F)最初由Lin等犤1犦(1993年)从大鼠胶质细胞瘤B49的条件培养基中分离纯化获得,同年在Science上发表G D N F的核酸及氨基酸全序列。大量动物实验证实G D N F不仅对多巴胺能神经元有明显的营养作用,而且对脊髓运动神经元、背根神经节、颈上神经节、小脑purkinye细胞等中枢神经组织细胞均具有促生长作用。尤为重要的是,G D N F是目前所有已知的神经营养因子中惟一既可抗神经元凋亡、又可阻止神经细胞胞体萎缩的因子犤2犦。因此,我们应用R T-PCR技术得到G D N F完整编码区的cD N A片段,体外构建大鼠G D N F的真核表达载体,并在大鼠骨髓基质干细胞(bone m arrow strom al cells,BM SCs)中得到表达,为后续研究G D N F在脊髓损伤中的应用...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国医科大学学报》2007年03期
中国医科大学学报

神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤后GDNF基因表达的影响及意义

脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后如何促进损伤脊髓的再生与修复是该领域的重要研究方向[1]。神经干细胞(neural stem cell,NSC)移植可补充坏死、凋亡的神经细胞,桥接脊髓断端,促进传导通路的重建从而恢复神经传导通路[2],但具体机制缺乏深入的研究和定量的评价。本研究通过对神经干细胞的培养,并在移植后通过RT-PCR和免疫组化方法检测胶质细胞源性神经营养因子(glial cellline-derived neurotrophic factor,GDNF)的表达,为细胞移植治疗脊髓损伤提供实验依据。1材料与方法1.1实验动物及试剂Wistar雄性大鼠60只,新生24h内Wistar大鼠6只(中国医科大学实验动物中心),DMEM/F12(1∶1)培养基、胰蛋白酶、胎牛血清(美国Gibco公司)、B27、抗巢蛋白(Nestin)抗体、GDNF抗体,SABC试剂盒、DAB显色剂(美国Sigma公司)...  (本文共3页) 阅读全文>>