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成年大鼠脑内神经干细胞的在体研究

第一部分 成年大鼠中枢神经干细胞的检测及EGF的体内作用目的:检测成年大鼠脑内神经干细胞存在部位,及表皮生长因子(EGF)对神经干细胞增殖的影响。方法:成年健康雄性SD大鼠45只,体重270~320g,随机分为正常组、脑室注射EGF组、脑室注射溶剂组,每组15只。正常组不给药,EGF组通过立体定向单侧侧脑室内微量注射技术给予EGF,浓度为0.1mg/ml,微量泵控制注射速度为 1μl/min,每次5μl,每日 1次,相当于 EGF 500ng/天,连续给药7天。溶剂组脑室内注射生理盐水,注射量及方法同EGF组。3组中各有5只处死前给予5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)注射。BrdU通过腹腔注射给予,剂量 100mg/Kg,每 2小时 1次共 5次。最后一次给药后 1小时,将大鼠过量麻醉后以4%多聚甲醛动脉灌注固定,取脑标本,进行病理及免疫组织化学检查。通过神经干细胞的特异性标记物nestin染色阳性细胞计数,了解神经干细胞的存在部  (本文共59页) 本文目录 | 阅读全文>>

南方医科大学
南方医科大学

Protocadherin11X对神经干细胞增殖和分化的调控作用研究

在大脑皮层的发育过程中,皮层神经元是由位于大脑皮层侧脑室表层室管膜区和亚室管膜区的神经干细胞分裂产生的,并沿着暂时存在的放射状胶质细胞的纤维向皮层远端迁移,最后定居于固定细胞层,并最终参与产生结构严整的大脑皮层。从放射状前体细胞,至中间前体细胞,直至最终迁移至皮层板分化产生皮层神经元,这几个阶段是序列产生的,每个阶段都有其特异性的标记物(Pax6, Tbr2, Tbr1等)。已有研究表明成体干细胞的周围,存在着大量具有特定功能的细胞,它们提供了干细胞赖以生存的各种物质基础,对干细胞的自我更新和分化能力具有调控作用。胚胎期室管膜区和亚室管膜区存在大量的神经干细胞,它们周围存在的微环境是否同样对神经干细胞增殖、分化功能发挥调控作用,以及通过何种机制发挥作用,尚未可知。研究发现大脑皮层的神经干细胞干性的维持与周围环境之间可能存在某种联系,因此,研究神经干细胞与周围环境之间发生联系的物质基础,对于深刻理解神经干细胞具有自我更新及分化能力...  (本文共146页) 本文目录 | 阅读全文>>

《重庆医学》2017年27期
重庆医学

丙泊酚对发育小鼠海马齿状回神经干细胞的影响

丙泊酚因其诱导起效快、苏醒迅速且无蓄积、不良反应小等优点,在临床儿科及产科麻醉中已逐渐推广使用。然而,越来越多的临床观察表明婴幼儿术后认知功能改变与全身麻醉药物接触有密切关系。近期有研究证实全身麻醉药物对发育机体认知功能有潜在的毒性作用,然而其具体作用机制还未明确。文献报道海马齿状回发育与机体认知功能紧密相关,而海马齿状回内干细胞神经发生决定齿状回发育,全身麻醉药物丙泊酚是否通过调控海马齿状回干细胞进而影响机体认知功能尚不清楚。本研究拟采用丙泊酚处理发育小鼠模型,通过免疫组织化学及免疫荧光检测丙泊酚对发育小鼠海马齿状回干细胞的影响,探讨丙泊酚影响发育小鼠术后认知功能的机制。1材料与方法1.1主要试剂丙泊酚购自Astra Zenenca公司,10%脂肪乳购自Fresenius Kabi公司,兔抗Ki67购自Thermo公司,鼠抗巢蛋白(Nestin)购自BD公司,兔抗脑脂结合蛋白(BLBP)及神经元核心抗原(NeuN)均购自Mil...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国组织工程研究》2017年21期
中国组织工程研究

胎鼠不同脑组织中神经干细胞和神经元所占比例及差异

文章快速阅读:比较E14胎鼠全脑、大脑皮质和前脑组织中神经干细胞和神经元所占比例及差异细胞免疫荧光鉴定:(1)消化为单细胞,贴壁培养3.0-4.0 h;(2)细胞免疫荧光鉴定神经干细胞(Nestin+)和神经元(Tuj1+);分离E14胎鼠脑组织:(3)分析神经干细胞(Nestin+/DAPI)和神经元(Tuj1+/DAPI)所占结论:(1)全脑;比例及差异。(1)前脑组织中神经干(2)大脑皮质;细胞所占比例最高;(3)前脑。(2)神经元所占比例最实时荧光定量PCR技术:低。(1)提取RNA,反转录为c DNA;(2)实时荧光定量PCR检测Nestin和Tuj1 mR NA的表达水平。文题释义:神经干细胞:是神经系统中的一类多潜能细胞,由于神经干细胞的取材来源十分有限,如何快速培养出大量优质神经干细胞用于后期研究仍是亟需解决的问题。研究通过细胞免疫荧光和实时荧光定量PCR技术分析比较了E14小鼠全脑、大脑皮质和前脑组织中神经干细...  (本文共6页) 阅读全文>>

《中国组织工程研究》2017年21期
中国组织工程研究

神经干细胞神经分化示踪中GFAP启动子驱动荧光报告系统的价值

文章快速阅读:GFAP启动子驱动的荧光报告系统成功示踪小鼠神经干细胞神经分化结论:方法:观察指标:体外表达neo-GFAP(1)神经干细胞的分离培养和鉴定;(1)神经干细胞形态学特征;(promoter)-dT omato载(2)慢病毒包装并感染神经干细胞;(2)神经干细胞表面标记;体的小鼠神经干细胞可(3)神经干细胞的纯化及诱导分化和鉴(3)神经干细胞分化过程中定。dtomato荧光表达变化。以体外示踪GFAP基因的特异表达。文题释义:神经胶质纤维酸性蛋白:是一种Ⅲ型中间丝状蛋白,以单体形式存在。主要分布于中枢神经系统的星形胶质细胞,参与细胞骨架的构成并维持其张力强度。而星形胶质细胞是哺乳动物中枢神经系统的主要细胞类型之一,对神经元具有支持、营养和分隔等作用,也在组织损伤修复、宿主防御机制等过程中起到重要的作用。神经胶质纤维酸性蛋白是星形胶质细胞的特异标志物。dT omato:是一种来自水果蛋白的橙色衍生物,其分子结构具有一对...  (本文共6页) 阅读全文>>

《西部医学》2017年08期
西部医学

Huwe1-shRNA靶向沉默L2.3神经干细胞的Huwe1表达

3.出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室,四川成都610041)大量研究证明,NOTCH信号通路在神经干细胞的增殖、分化调控过程中扮演着重要角色[1-6]。而Huwe1作为NOTCH信号通路上游的重要调控基因,在调控神经干细胞活性、促进神经元生成过程中发挥着重要作用[7-8]。Huwe1可能参与神经干细胞周期调控及其分化过程。Huwe1的缺失可引起小鼠大脑N-myc蛋白及NOTCH配体DLL3蛋白水平的升高,并激活NOTCH1信号通路[9]。Huwe1在缺血缺氧性脑损伤过程中的具体作用机制尚未见报道。综合以往研究,我们提出假设:Huwe1可能通过调控NOTCH1信号通路参与神经干细胞增殖与分化过程。这可能是脑缺血缺氧过程中重要的自我保护机制。为了探讨和验证这个假设,我们首先拟建立一种可功能性靶向沉默Huwe1基因的体外细胞培养模型,选择性抑制Huwe1基因进而抑制相关的信号通路,为下一步的研究奠定基础。1实验与方法1.1神经干...  (本文共4页) 阅读全文>>

《实用医院临床杂志》2017年05期
实用医院临床杂志

嗅觉通路神经干细胞研究进展

[4]李泽建.老年人肺纤维化和肺气肿综合征临床特点探讨[J].安徽卫生职业技术学院学报,2016,15(3):49-50,52.[5]许小毛,蒲纯,杨翼盟,等.老年人肺纤维化和肺气肿综合征临床特点研究[J].中华老年医学杂志,2014,33(2):129-133.[6]Chae KJ,Jin GY,Han YM et al.Prevalence and progression of com-bined pulmonary fibrosis and emphysema in asymptomatic smokers:Acase-control study[J].European radiology,2015,25(8):2326-2334.[7]陈恒屹,康军,崔社怀,等.特发性肺间质纤维化合并肺气肿的临床特征分析[J].中华肺部疾病杂志(电子版),2014,7(1):7-11.[8]Kwak N,Park CM,Lee J,et ...  (本文共4页) 阅读全文>>