分享到:

抗血小板膜糖蛋白基因工程抗体的制备和性质研究

血小板血栓形成是血管闭塞性疾病的主要成因。其表面的糖蛋白Ⅱb/Ⅲa是血小板聚集最终共同途径的关键要素。阻断GPⅡb/Ⅲa与纤维蛋白原的结合,能高效地抑制血小板的聚集,进而使血小板血栓不能形成。SZ-21是我室制备的一株针对GPⅢa的单克隆抗体,经家兔颈动—静脉血栓模型证实能显著降低血栓形成,显示了在抗血栓治疗中的潜在价值。为降低鼠源性单抗免疫原性(HAMA)及全抗体Fc段对血小板的破坏,本研究将SZ-21制备成小分子抗体,并对这一抗体片段进行了纯化、复性和体外性质的研究。一 SZ-21单克隆抗体可变区基因的克隆和序列分析采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从分泌抗血小板膜糖蛋白Ⅲa单克隆抗体SZ-21杂交瘤细胞中克隆了该抗体的重、轻链可变区(V区)基因,并测序分析。SZ-21重链(V_H)基因全长为342 bp,轻链(V_L)基因全长为306 bp,分别编码114和102个氨基酸。基因序列登录号为VH:AF35405  (本文共76页) 本文目录 | 阅读全文>>

第一军医大学
第一军医大学

完全人源化基因工程抗体anti-HBsAg Fab原核体系表达纯化工艺路线放大可行性研究

目的:1.在摇瓶水平上对可影响大肠杆菌生长及外源蛋白表达的因素进行多因素分析,明确这些影响因素对菌体生长及表达的影响程度。2.在BioFlo110型发酵罐中摸索高密度发酵方法,确定合理的发酵路线;3.探索具有可放大的、非特异性纯化目的抗体片段的工艺路线。方法:1.通过预实验及文献回顾,确定出需实验考察的可能影响大肠杆菌生长及外源蛋白表达的8个因素。采用Plackett-Burman多因素两水平分析法和Box-Behnken响应面分析法对这8个因素进行多因素交互作用的实验设计,随后按照设计要求在摇瓶水平上进行实验;2.在BioFlo110型发酵罐中考察不同的补料模式可能实现的发酵水平及蛋白表达水平。考察3种补料模式:恒速补料、指数补料及溶氧反馈控制补料。3.在纯化路线设计方面,先以经过Ni~(2+)敖合层析的抗体为“标准品”,摸索阳离子交换柱和疏水层析柱的纯化条件;随后按照自行设计的组合层析策略,将获得的菌体冻融上清经预处理后按照...  (本文共125页) 本文目录 | 阅读全文>>

第三军医大学
第三军医大学

人源化氨基端脂多糖结合蛋白(NH-LBP)基因工程抗体的构建及其生物学活性研究

背景:内毒素血症(endotoxemia)是临床创(烧)伤病人最常见的并发症之一。LPS是G~-细菌细胞壁外膜的主要成分,当细菌死亡时LPS释放入血,由肝细胞产生的LBP将其传递给靶细胞膜上的CD14(mCD14)或血液循环中的可溶性CD14(sCD14),三者形成LPS/LBP/CD14三联复合体,再经过TLR4-MD2-MYD88跨膜受体识别复合物向靶细胞内传递信号,促使胞浆内的NF-κB易位至胞核,导致一系列转录因子的活化,进而释放大量炎性介质和细胞因子,诱发全身炎症反应综合征(SystematicInflammatory Response Syndrome,SIRS)、多器官功能不全综合征(Multiple OrganDysfunction Syndrome,MODS)。在生理状态下循环血液中只有5—10μg/ml的LBP,在内毒素血症时LBP的浓度可以增高10倍左右,低浓度的LBP可将LPS与CD14的结合放大3-4个...  (本文共112页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国协和医科大学
中国协和医科大学

抗KG1a细胞表面分子基因工程抗体及其抗原分子的研究

造血是一个受高度调控、具有复杂细胞社会性行为的生理过程,造血干/祖细胞在这一过程中处于中心地位。造血干/祖细胞表面具有多种分化阶段特异性标志分子、细胞因子受体分子及粘附分子等多种细胞表面分子,在造血细胞的增殖、分化、迁移和归巢等过程中发挥重要作用。分离这些细胞表面分子及其抗体,研究它们的结构与功能作用是实验血液学的重要研究课题,对于深入理解血细胞发生、发展的生理及病理过程,发展血液系统恶性肿瘤的新型诊疗方法和生物制剂具有重要的理论价值和实际意义。本论文的目的在于寻找新的有功能的抗造血干/祖细胞表面分子的抗体,探索其功能特性,并通过所获得的抗体分离抗原分子及其基因。首先,构建KGla细胞免疫小鼠的噬菌体展示单链抗体(scFv)文库。用具有造血干/祖细胞特征的人髓系自血病细胞系KGla细胞免疫小鼠,取其脾细胞,提取RNA,利用设计合成的用于扩增全套抗体重链可变区和轻链可变区的寡核苷酸引物,经RT-PCR扩增VH和VΚ基因,将其先后克...  (本文共113页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国协和医科大学
中国协和医科大学

抗KDR基因工程抗体的研制及生物学活性研究

肿瘤的侵袭转移是肿瘤治疗失败的主要原因,也是目前肿瘤治疗所面临的主要困难和挑战。70年代以来,人们对肿瘤的发生、增殖、浸润和转移机制的认识有了质的飞跃,研究证实恶性肿瘤的增殖、侵袭和转移与肿瘤诱导的新生血管生成(angiogenesis)密切相关。从抑制肿瘤的血管生成、切断肿瘤细胞的营养供应和转移途径等方面开展的抗肿瘤血管新生治疗已成为近年肿瘤生物治疗中一个十分引人注目的领域,寻找高效的肿瘤血管生成抑制剂已成为当务之急。KDR(Kinase insert domain-containing receptor,VEGFR一2)作为血管内皮细胞生长因子主要受体之一,在介导VEGF的内皮细胞增殖、迁移、分化、微管形成、血管通透性增加等一系列生物活性中发挥重要作用。从而VEGF/KDR信号传导途径被认为在肿瘤相关的血管新生过程中起到关键作用。通过制备KDR酪氨酸激酶受体抑制剂,阻断VEGF/KDR的相互作用,可以抑制肿瘤相关血管新生,最...  (本文共139页) 本文目录 | 阅读全文>>

第四军医大学
第四军医大学

抗人CD3单链抗体基因构建、表达及表达产物的分离、纯化和活性测定

CD3分子是成熟T淋巴细胞表面的一种分化抗原,与T细胞表面 受体(TCR)紧密结合构成TCR/CD3复合物,TCR识别和结合抗原后,通过CD3分子的信号转导系统,将刺激信号传入T淋巴细胞内部,激活酪氨酸激酶(PTK)及蛋白激酶c(PKC),触发一系列级联效应及多种细胞因子的释放。最终导致T淋巴细胞的活化。抗CD3抗体具有丝裂原作用,可诱导T淋巴细胞的活化和增殖,一般认为是抗CD3抗体与CD3分子结合后,导致TCR/CD3复合物构型改变,并通过其它辅助细胞参与,引起  (本文共95页) 本文目录 | 阅读全文>>