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重组腺病毒载体介导血管抑素基因治疗大鼠脑胶质瘤的实验研究

目的:构建重组缺陷型腺病毒血管抑素基因(angiostatin)载体,进行血管抑制基因治疗脑胶质瘤的体内及体外的实验研究。方法:RT-PCR法克隆血管抑素基因,同源重组共转染293细胞构建携带血管抑素基因的腺病毒载体,体外检测血管抑素的重组缺陷型腺病毒载体对内皮细胞增殖的抑制作用。建立大鼠皮下及脑内C6胶质瘤模型,给予体内基因治疗,观察及评价治疗脑胶质瘤的效果。结果:克隆得到约1.2Kb的血管抑素cDNA。构建携带血管抑素基因重组腺病毒载体AdhCMV-AGS,体外试验表明,重组载体可以强烈抑制内皮细胞的增殖。体内试验表明重组载体可以在体内表达血管抑素,并且有效抑制皮下胶质瘤的生长,使脑内荷C6胶质瘤大鼠长期存活。结论:以重组腺病毒为载体的血管抑素基因治疗脑胶质瘤效果显著,将是一种基因治疗肿瘤的新策略。  (本文共91页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中华神经外科杂志》2001年06期
中华神经外科杂志

重组腺病毒载体介导血管抑素基因治疗大鼠脑胶质瘤的实验研究

肿瘤的生长依赖于丰富的血供 ,通过抑制肿瘤新生血管形成就可以使肿瘤缺血坏死达到治疗的目的。血管抑素 (angiostatin)是近年来发现最有效的血管生成抑制剂之一 ,可以通过抑制内皮细胞的增殖达到治疗肿瘤的良好效果 ,本实验克隆血管抑制基因 ,制备重组腺病毒载体 ,基因治疗C6大鼠脑胶质瘤 ,为基因治疗的进一步发展提供新的策略。材料和方法  一、材料各种限制性内切酶、T4DNA连接酶、M MLV逆转录酶均购自华美公司 ,pfu聚合酶购自生工公司 ,引物及大鼠胶质瘤C6细胞、人脐静脉内皮细胞ECV30 4购自中科院细胞所。PJM17质粒、腺病毒LacZ、人胚肾 2 93细胞由邢力博士惠赠 (中科院细胞所 ) ,大鼠立体定向仪为日本Narishegi公司产品 ,DMEM培养基为GIBCO公司产品。二、方法1.细胞培养 :2 93细胞、C6细胞、ECV30 4细胞用高糖DMEM培养基 ,常规添加 10 %小牛血清 ,青霉素 10 0...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国老年学杂志》2011年21期
中国老年学杂志

血管抑素基因联合~(32)P-胶体治疗大鼠肝癌的疗效

由于肝癌的发生、发展及转移的前提是肿瘤血管的形成,所以采用抗肿瘤血管生成的基因治疗可以取得良好的治疗效果。目前,在基因治疗方面国外学者们已取得共识,即尽可能的联合多种基因、多种治疗手段,以期发挥更大、更确切的抑制肿瘤生长和转移效果〔1,2〕。为此,本研究拟采用血管抑素基因联合放射性药物32P胶-体灌注于大鼠肝癌的局部,并观察其治疗效果,分析治疗机制,以期为临床上广泛应用基因治疗提供有力的理论和实践支持。1材料与方法1·1试剂及器材总RNA提取试剂盒(G ibco-BRL公司),TUNEL荧光试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司),FV500 O lympus激光共聚焦显微镜(日本),CT机为GE公司的双排螺旋CT机。放射性32P-胶体购自北京原子高科有限公司。1·2方法1·2·1血管抑素基因重组质粒的构建用Trizol试剂盒提取总RNA。血管抑素基因上游引物为5′-CGAAGCTTGGATCCAT-GGACCATAAGGAAGT...  (本文共3页) 阅读全文>>

《世界华人消化杂志》2005年12期
世界华人消化杂志

血管抑素基因联合氟尿嘧啶腹腔化疗预防大肠癌术后肝转移的实验

0引言 大肠癌术后肝转移的发生率甚高[l],大剂量腹腔化疗对防 治术后肝转移有重要的临床意义图.我们用裸鼠人LoVo结 肠癌肝转移模型,观察血管抑素基因联合氟尿嗜吮腹腔化 疗对预防大肠癌术肝转移的作用,为血管抑素基因联合氟 尿哦咙腹腔化疗在大肠癌患者的应用提供理论和实验基础. 1材料和方法 1.1材料各种限制性内切酶、T4DNA连接酶、M一MLV逆 1450 ISSN 1009一3079 CN 14一1260lR 世界华人消化杂志2005年6月28日第13卷第12期 转录酶等均购自华美公司.pJM17质粒、腺病毒La。Z、 人胚肾293等购自中科院细胞所.人结肠癌LoV。细胞由 中科院上海药物所提供.Balb/。nu/nu裸鼠48只(SPF 级),4一6周龄,体重18一209,雌雄兼有,购自中科院 实验动物中心,饲养于上海复旦大学附属医学院实验动物 部,裸鼠置于恒温层流箱中,于无特定病原体(SPF)环境 下饲养.12h光照和12...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中华肿瘤防治杂志》2009年09期
中华肿瘤防治杂志

血管抑素基因联合5-FU腹腔化疗治疗大肠癌术后腹腔种植的实验研究

进展期大肠癌术后仍有较高的复发率[1],大剂量腹腔化疗对防治术后腹腔转移和肝转移有重要的临床意义[2]。本研究用裸鼠人LoVo结肠癌细胞腹腔种植模型,观察血管抑素基因联合5-氟尿嘧啶(5-FU)腹腔化疗对预防大肠癌术后腹腔种植的作用。为血管抑素基因联合5-FU腹腔化疗在大肠癌患者的应用提供理论和实验基础。1材料与方法1.1材料各种限制性内切酶、T4DNA连接酶、M-MLV逆转录酶等均购自华美公司。PJ M17质粒、腺病毒LacZ、人胚肾293等购自中科院细胞所。人结肠癌LoVo细胞由中科院上海药物所提供。Balb/c-nu/nu裸鼠48只(SPF级),4~6周龄,质量18~20 g,雌雄兼有,购自中科院实验动物中心,饲养于上海复旦大学附属医学院实验动物部,裸鼠置于恒温层流箱中。12 h光照和12 h黑夜交替。喂养符合卫生部颁布的“医学实验动物全价营养饲料标准”。1.2方法1.2.1细胞培养人结肠癌LoVo细胞、293细胞、ECV...  (本文共3页) 阅读全文>>

郑州大学
郑州大学

人血管抑素基因的克隆、序列分析和体外表达

人血管抑素(angiostatin ANG)是血浆纤维蛋白溶酶原(plasminogen Pgn)中一个38KD的片段,属内生性蛋白质,包含Pgn的前4个三环域(Kringle区)。它能特异地抑制血管内皮细胞的生长。每个Kringle约有80个氨基酸构成。它在人体内有二种生成途径:①某些肿瘤细胞分泌的蛋白酶降解纤维蛋白溶酶原而产生;②由某些金属弹性蛋白酶(如巨噬细胞衍生的金属弹性蛋白酶)降解纤维蛋白溶酶原而生成。正常人血浆中的浓度维持在1.6±0.2μmol/L。体内外实验证实,ANG具有很强的抑制血管生成的能力,在控制肿瘤生长和转移方面有广阔的应用前景。目前,通过体外酶解纤溶酶原方法可以获得一定量的活性ANG,但由于其成本高、操作复杂,远远不能满足临床需要。本实验以人纤溶酶原的cDNA为模板,成功地将ANG相应的93-470位氨基酸的核苷酸克隆到pSP 71载体上,,并进行了序列分析和体外表达,为下一步通过转基因盐藻生产ANG...  (本文共71页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中华实验外科杂志》2003年11期
中华实验外科杂志

血管抑素基因的克隆及在膀胱癌细胞中的表达

血管抑素 (angiostatin)是近年来发现的最有效的血管生成抑制剂之一 ,可以直接抑制肿瘤血管内皮细胞的增殖[1] 。我们通过本实验进行了人angiostatin基因克隆、表达载体构建并观察其在膀胱癌BIU 87细胞中初步表达。一、材料与方法1.材料 :人胚胎肝脏组织取自兰州军区总医院死胎。膀胱癌BIU 87细胞为兰州军区总院全军泌尿外科中心实验室冻存。真核表达载体pcDNA3 .1( +)(Invitrogen公司 ) ,脂质体 (lipofectamine)(Sigma公司 ) ,逆转录 多聚酶链反应酶混合物 (Promega公司 ) ,TrizolTM Reagent(LifeTechnologies公司 ) ,鼠抗人angiostatin单克隆抗体 (Calbiochem公司 ) ,链霉菌抗生物素蛋白 过氧化酶免疫组织化学染色试剂盒 (福州迈新公司 )。2 .引物设计 :依据人angiostatincD NA...  (本文共1页) 阅读全文>>