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去细胞神经支架修复周围神经缺损的研究

周围神经缺损在战争及和平时期都很常见,目前临床上仍采用自体神经游离移植的方法修复周围神经缺损,虽然其疗效比较肯定,但由于切取供移植的自体皮神经不可避免地造成新的感觉障碍,而且存在供区受限的问题,所以开发理想的神经桥接材料仍是周围神经外科的重要课题,具有十分重要的临床意义。虽然在非神经自体组织移植、神经组织工程和异体神经等方面的研究都取得了一定的进展,但至今尚未开发出能够代替自体神经移植的理想方法。本论文用形态学与功能相结合的方法对一种新型生物支架材料(去细胞神经支架)单独应用,以及与外源性生长因子联合应用修复同种异体神经缺损的效果进行了评价;并进一步对去细胞神经支架能否用于异种移植进行了初步研究。实验分为以下6个部分:1.用改良的化学程序对兔胫神经进行处理,制取去细胞的神经支架材料。组织学染色证明获得的去细胞神经支架内无任何细胞结构,免疫组织化学方法显示去细胞神经支架由含有丰富laminin的管状结构组成。支架本身外观完整,具有  (本文共139页) 本文目录 | 阅读全文>>

广西医科大学
广西医科大学

脂肪干细胞诱导的雪旺样细胞复合去细胞神经支架修复大鼠坐骨神经缺损的研究

目的:体外分离、培养、鉴定SD大鼠脂肪干细胞(adipose-derived stem cells, ADSCs)、雪旺细胞(Schwann cells, SCs),将脂肪干细胞诱导分化为雪旺样细胞(Schwann-like cells),制备SD大鼠去细胞神经支架,为下一步实验提供种子细胞及支架材料。方法:无菌条件下切取4周龄SD大鼠双侧腹股沟脂肪垫,应用胶原酶Ⅰ消化40分钟,分离大鼠ADSCs,进行体外培养、传代,倒置显微镜观察细胞的生长增殖及形态变化,诱导成骨、成脂,分别进行碱性磷酸酶(ALP)、茜素红、von Kossa染色及油红0染色,绘制生长曲线及用流式细胞仪检测细胞表面标记。使用多聚-L-赖氨酸,福斯高林,全反式维甲酸,β-巯基乙醇,碱性成纤维细胞生长因子,血小板源性生长因子及神经生长因子,将第三代脂肪干细胞诱导分化为雪旺样细胞,并使用荧光定量PCR检测S100B及神经胶原纤维酸性蛋白(Glial fibrilla...  (本文共79页) 本文目录 | 阅读全文>>

中南大学
中南大学

组织工程化周围神经修复大鼠坐骨神经损伤的实验研究

第一章大鼠去细胞组织工程化神经支架的制备及形态学研究目的:采取化学处理方法,去除大鼠周围神经中的细胞和髓鞘以取得去细胞的组织工程化神经支架。方法:10只SD大鼠,共20条坐骨神经分为2组,每组10条。分别为正常神经对照组和化学去细胞实验组。然后在光镜和电镜下对各组神经组织行组织学结构观察,通过免疫组织化学分析其成分。结果:去细胞神经呈淡乳白色圆柱状外观,略透亮,其延展性较化学处理前略增加。经脱细胞处理后,去除了Schwann细胞、神经纤维的髓鞘和轴突,保存了由Schwann细胞基底膜管以及神经外膜和束膜的细胞外基质构成的三维支架结构。结论:化学处理所获得的去细胞神经在组织结构和成分上已经达到了相应的要求,能否成为有效的神经移植修复材料,仍需要进一步的实验研究加以验证。第二章大鼠脂肪干细胞的培养及向类Sehwann细胞的诱导分化目的:掌握大鼠脂肪干细胞的分离、培养和扩增的方法,并探讨其生物学特性及向类Schwann细胞方向分化的条...  (本文共112页) 本文目录 | 阅读全文>>

重庆医科大学
重庆医科大学

复合GDNF和VEGF质粒的异体脱细胞神经支架对大鼠坐骨神经缺损的修复作用

本研究拟通过化学萃取获得脱细胞的大鼠同种异体神经支架,复合上编码胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic growth factor, GDNF)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)基因的真核表达质粒,构建一种具有生物活性的人工神经复合体并研究其在修复大鼠坐骨神经缺损中的作用,为探索自体神经移植的替代方法提供理论和实验依据。第一部分大鼠脱细胞同种异体神经支架的构建目的:构建大鼠脱细胞同种异体神经支架。方法:健康雌性SD大鼠50只,体重在450g-500g之间作为供体。采用Triton-X100和脱氧胆酸钠通过低渗-脱细胞的组织工程学方法来处理新鲜大鼠坐骨神经。钴-60γ射线辐照消毒灭菌后,通过大体观察、光镜观察、扫描电镜观察评价其组织形态。4只Wistar大鼠作为受体行体内桥接实验,术后3天,4周取支架作石...  (本文共113页) 本文目录 | 阅读全文>>

第四军医大学
第四军医大学

高仿真组织工程神经修复材料的制备及应用研究

周围神经再生和功能修复是尚未解决的临床难题。对于短节段的神经损伤,可以将断裂的神经直接对端吻合,使近端再生的神经纤维能长入远端。但对于长节段的神经缺损,临床上无法进行无张力缝合,目前治疗的金标准是将未损伤区域的自体神经移植到损伤区域来桥接损伤的神经断端。然而,应用自体神经移植受到很多因素限制:获取供体神经需要二次手术,供区神经来源不足,继发的供区神经功能丧失,以及供受神经在组织结构和尺寸上不匹配等。因此,研发能够有效代替自体神经的移植替代物是目前亟待解决的难题。近年来,组织工程周围神经成为研究的热点。应用组织工程学方法制备组织工程移植物桥接长节段神经缺损收到较好疗效,受到了越来越多的关注。组织工程移植物一般由生物支架材料、种子细胞和生物活性因子三部分构成。其中支架作为种子细胞和神经营养因子的载体,作为组成神经损伤修复微环境的主体,其构建和性能改进研究成为制约周围神经损伤修复的关键。支架材料的组成及内部微结构是影响组织工程移植物修...  (本文共132页) 本文目录 | 阅读全文>>

郑州大学
郑州大学

化学萃取神经支架修复面神经缺损的实验研究及脑桥小脑角区内镜解剖学研究

研究目的:1.采用新的化学处理方法清除大鼠胫神经和兔腓神经中的细胞和髓鞘、保留基底膜,萃取长段的神经支架。2.观察化学萃取异体神经支架修复大鼠面神经缺损后近期神经再生的情况。3.观察化学萃取异体神经支架修复神经缺损Schwann细胞的变化情况。4.探索化学萃取神经支架用于异种移植,桥接面神经缺损的可行性。方法:1.切取10只大鼠胫神经和10只兔腓神经,以Triton X-100溶液和脱氧胆酸钠溶液按一定浓度和程序进行化学处理。萃取神经及新鲜神经行HE染色、Luxol fast blue髓鞘染色,以观察细胞、髓鞘;S100和Laminin免疫组织化学染色以显示Schwann细胞及其基底板层;毛细血管碱性磷酸酶化学染色以显示毛细血管内皮细胞。2.60只大鼠随机分成三组:A组—自体胫神经移植组,B组—化学萃取异体胫神经移植组和C组—新鲜异体胫神经移植组,每组20只。大鼠一侧面神经下颌缘支缺损6mm的模型,以上述三种移植物桥接修复。术后...  (本文共151页) 本文目录 | 阅读全文>>