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表达和共表达H9亚型禽流感病毒血凝素基因和鸡Ⅱ型干扰素基因的重组鸡痘病毒

H9亚型禽流感病毒(AIV)近年在我国部分地区广泛流行,给养禽业造成了严重的经济损失。油乳剂全病毒灭活苗虽对该亚型禽流感的控制发挥了重要作用,但由于其存在干扰免疫监测及成本较高等缺点,使用受到了限制。为了研制新型禽流感疫苗以克服上述缺点,我们对H9亚型AIV中国分离株的血凝素(HA)基因和鸡Ⅱ型干扰素基因(IFN-Ⅱ)进行了克隆、测序和分析,构建了表达HA基因及共表达HA基因和鸡IFN-Ⅱ基因的两种重组鸡痘病毒(rFPV-HA、rFPV-HA-IFN-Ⅱ),并测定了它们的免疫效力。1 H9亚型AIV中国分离株HA基因cDNA的克隆及序列初步分析以酚-SDS法提取H9N2亚型AIV中国分离株A/Chicken/China/F/1998(简称F株)的基因组RNA,以此为模板,采用cDNA合成法及反转录聚合酶链式反应(RT-PCR),扩增到长度分别为1.1Kb和0.8Kb的两段HA基因片段。测序结果表明,这两个片段覆盖了HA基因的完整  (本文共111页) 本文目录 | 阅读全文>>

扬州大学
扬州大学

共表达新城疫病毒融合蛋白基因和H9亚型禽流感病毒血凝素基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力

新城疫是由副粘病毒科的新城疫病毒(Newcastle diseae virus,NDV)引起的一种烈性家禽传染病,它对我国养禽业的危害最为严重。低致病性H9亚型禽流感病毒(Avian Influenza virus,AIV)是目前影响我国养禽业的主要AIV亚型,它对我国养禽业也已造成了严重的经济损失。当前我国对ND和H9亚型AI的控制主要应用常规疫苗的免疫接种。但是作为我国目前控制ND和H9亚型AI流行的重要手段,常规疫苗的免疫接种会干扰现有技术条件下的免疫监测和流行病学调查。而且油乳剂灭活疫苗使用后会引起严重应激,并且生产成本偏高等。为了研制一种可以克服上述缺点的新型载体联合疫苗,本研究用鸡痘病毒(Fowlpox viros,FPV)作为表达载体,构建了能够同时表达NDV融合蛋白(Fusion protein,F)基因和H9亚型AIV血凝素(Hemagglutinin,HA)基因的重组鸡痘病毒,并对其免疫效力进行了评估。1.共...  (本文共124页) 本文目录 | 阅读全文>>

《病毒学报》2003年01期
病毒学报

共表达H_9亚型禽流行性感冒病毒血凝素基因和鸡Ⅱ型干扰素基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力

重组鸡痘病毒疫苗是一类研究较深入、具有广阔应用前景的禽用基因工程疫苗 ,现已有数十种表达不同保护性抗原的重组鸡痘病毒被成功构建[1] 。用于构建重组鸡痘病毒的载体一般为鸡痘病毒疫苗株 ,虽然它们的毒副作用小、安全性高 ,但仍有一定的残留毒性 ,表现为对雏鸡的体重增长和免疫应答的抑制作用[2 ] 。因此 ,近年来许多研究者探索了多种途径来降低载体鸡痘病毒的毒副作用 ,其中之一就是在重组疫苗中引入细胞因子 ,如IL - 2和IFN-Ⅱ ,用以构建共表达保护性抗原和细胞因子的重组鸡痘病毒。此外 ,引入细胞因子还有可能增强疫苗的免疫效力[3] 。因此 ,这一方法成为近年来研制安全、高效鸡痘病毒重组疫苗的有效途径之一[4 ] 。为了预防H9亚型禽流行性感冒 (流感 )的发生和流行 ,本室曾利用鸡痘病毒 2 82E4疫苗株作为载体 ,成功构建了表达H9亚型禽流感病毒 (AIV)中国分离株血凝素 (HA)基因的重组鸡痘病毒 (rFPV -HA...  (本文共7页) 阅读全文>>

《微生物学报》2002年04期
微生物学报

表达H9亚型禽流感病毒血凝素基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力

禽流感病毒 (AIV)属正粘病毒科、A型流感病毒属。根据AIV对禽类致病性的差异 ,可将AIV分为高致病性AIV和低致病性AIV。高致病性AIV所导致的禽流感对养禽业具有毁灭性的打击 ,是国际兽疫局规定的A类疾病之一 ;低致病性AIV导致的禽流感对养禽业也有较大的危害性[1 ] 。因此 ,综合采用各种手段 ,包括疫苗接种的手段来控制H9亚型禽流感的进一步蔓延和扩散就显得十分必要[2 ] 。然而 ,目前在临床上较广泛使用的抗H9亚型禽流感全病毒灭活疫苗却存在着诸多缺限 ,包括价格较高、使用不便和使用后产生的针对AIV血凝素 (HA)和NP蛋白的抗体会干扰免疫监测和流行病学调查等[3] 。为了克服灭活苗的这些缺陷 ,本研究以鸡痘病毒作为表达系统 ,构建了表达H9N2亚型AIV中国分离株HA基因的重组鸡痘病毒 (rFPV HA) ,并初步研究了其免疫效力 ,旨在为控制H9亚型禽流感在我国的发生和流行提供一种新型疫苗。1 材料和方法1 ...  (本文共6页) 阅读全文>>

《贵州畜牧兽医》2017年04期
贵州畜牧兽医

中西医结合防控鸡痘病毒与大肠杆菌混合感染

鸡痘是由鸡痘病毒引起鸡的一种急性、热性和高度接触性传染病。临床上通常以鸡体表无毛或少毛处出现散在的结节状增生病灶;口腔、食道黏膜等上呼吸道纤维素性坏死性增生病灶单纯或混合表现为特征。2014—2015年,我校实习牧场鸡群连续发生鸡痘病毒与大肠杆菌混合感染病例,通过中西医结合的用药方式,有效控制并消灭了疫情,现将诊治情况报道如下。1发病及感染情况我校实习牧场鸡群中的肉用商品鸡从校外专业种蛋场购进种蛋,进行孵化、育雏、育成而得;蛋鸡来源于校外专业蛋鸡场购买的已开产鸡群;种鸡(用于采精和输精实训)来源于校外专业种鸡场。以上鸡群及种蛋在引进过程中,每批次均经过严格的检疫检验,校内鸡群2014年5月前从未发生过鸡痘,2014年5—6月曾在成年肉鸡及种鸡群中发生痘病,后在蛋鸡群中也有相应病例出现;雏鸡因独栋饲养未见感染发病。发病率:肉用鸡和种鸡为75%,蛋鸡为85%;死亡率:肉用鸡和种鸡为3%,蛋鸡为5%;白羽鸡为黄羽鸡感染率高,且发病严重...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国兽医学报》2013年03期
中国兽医学报

鸡痘病毒在哺乳细胞内复制的研究

痘病毒用于构建重组疫苗的载体表达外源基因已应用多年。最初,多数集中在VV、痘病毒标准型。鸡痘病毒(FPV)表达系统是继痘病毒以后又一种动物病毒载体,以它作载体除具有与痘苗病毒相同的优点,如基因组结构庞大,含有多个复制非必需区,可在其感染的细胞中忠实地进行修饰,外源基因的表达产物可以诱导机体产生持续时间较长的体液与细胞免疫反应,严格的胞浆内复制避免了病毒基因重组入宿主细胞染色体的可能性,从而消除了重组病毒的应用对人类造成的潜在威胁。然而在人和其他哺乳动物细胞内的复制是不完全清楚的,过去的观点认为鸡痘病毒不能在哺乳动物细胞系内扩增。因此,鸡痘病毒的宿主范围使得更多的禽痘病毒用于人类和哺乳动物的重组病毒载体的研究。然而安全性是首要问题。在考虑构建有效、非复制的疫苗载体,鸡痘病毒遇到一些不可避免的问题。本试验选用鸡痘病毒作为载体,将FMDV的衣壳蛋白前体P1-2A和蛋白酶3C基因插入到鸡痘病毒表达载体中,构建重组鸡痘病毒转移载体质粒pU...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国生物制品学杂志》2010年10期
中国生物制品学杂志

鸡痘病毒在鸽体内的分布及毒性

到目前为止,由于种种原因,世界上只有少数国家生产鸽痘疫苗,多数国家采用鸡痘疫苗预防该病。但近年来,由于免疫失败造成鸡痘的发病率不断增加。分析其原因可能是出现了与疫苗株抗原性不同的变异株或新的毒株。为了预防鸡痘的发生和流行,开发和研制新型疫苗是当前迫切需要解决的难题。鸡痘疫苗对鸽、鹌鹑等禽类均能提供足够的保护。为检测鸡痘病毒的生物安全性,本文利用PCR方法检测鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)弱毒疫苗株在鸽体内的分布及毒性,为以鸡痘病毒作为载体构建重组疫苗奠定基础。1.材料与方法1.1病毒鸡痘病毒弱毒疫苗株由本所病毒室保存。1.2实验动物30日龄幼鸽(美国落地鸽)由长春市信鸽协会提供。1.3主要试剂Taq DNA聚合酶、PCR反应缓冲液和dNTP等均为Promega公司产品;DNA试剂盒为AXYGEN公司产品。1.4动物分组及免疫将64只幼鸽随机分为2组:对照组24只,试验组40只。试验组经翅膀内侧无血管处刺种2针FP...  (本文共4页) 阅读全文>>