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抗线虫基因表达载体质粒构建和遗传转化研究

本研究围绕抗线虫基因的遗传转化展开,主要内容包括:1.植物表达载体的构建;2.农杆菌介导的遗传转化试验;3.基因枪法遗传转化研究;4.抗性植株的分子鉴定。提取克隆载体P1832,用NcoI酶切,经klenow补平,再经SacI酶切,切下完整的基因片段,然后用低熔点胶电泳,回收小片段;提取表达载体pBI121,用SmaI和SacI双酶切,用低熔点胶电泳,回收大片段;pBI121大片段和P1832小片段按1:3的浓度比混合,用T4 DNA ligase连接,11℃保温16-18小时后,反应液直接转化E.coli感受态细胞,在含K100mg/L的LB固体培养基上涂板,在设立对照的情况下,对长出的抗性单菌落提取质粒进行酶切鉴定,对正确的重组子取名为pBI1812/DH5α并进行扩增,提取质粒转化农杆菌Agrobacterium LBA4404,对抗性单菌落进行直接PCR鉴定,获得pBI1812/LBA4404农杆菌株,含35s启动子,用  (本文共60页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国生态农业学报》2004年04期
中国生态农业学报

抗线虫基因表达载体构建与转化甘蔗研究初报

线虫 (Heteroderaavenae)侵入或取食甘蔗幼嫩根尖 ,造成根尖畸形或侧根消失 ,使植株丧失吸收功能而变黄甚至萎焉死亡。传统采用土施农药防治线虫 ,成本高且严重污染环境。本研究利用德国引进的抗线虫基因Hs1pro 1[3,4 ] ,通过基因枪轰击法[4~ 6 ] 获得转基因甘蔗植株 ,使甘蔗自身获得线虫病抗性 ,为降低甘蔗生产农药使用量寻求有效途径[7] 。1 试验材料与方法供试甘蔗材料为引进优良品种“ROC”16 ,取自福建农林大学农业部甘蔗生理生态与遗传改良重点开放实验室农场。由德国引进含有Hs1pro 1基因的克隆载体P1832 ,载体大小约 4kb ,Hs1pro 1长 1.4kb ,植物表达载体pBIL 1大小约 12kb ,含有玉米泛激素UBI启动子、1个外源基因 (Lfy)、胭脂碱合成酶基因终止子和NPTⅡ选择标记基因 ,克隆载体和表达载体的宿主菌为DH5α。pBIL 1和菌株由中国热带农业科学院热带作...  (本文共3页) 阅读全文>>

《武夷科学》2003年00期
武夷科学

农杆菌介导的花生抗线虫基因遗传转化体系初步研究

近年来,花生遭受线虫的危害日益严重[lj,据国外有关报道,危害花生的根结线虫病能增加镰刀菌和曲霉菌对花生荚果的侵染率,黄曲霉中的强致癌物一黄曲霉素的增加已引起人们高度重视闭。线虫是一种重要的植物病原物,对农作物为害严重的大部分寄生线虫为抱囊属(Hete八〕dera)及球抱囊属(G肠心‘ra)的抱囊线虫和根结属(Mel。奴ogyu。)的根结线虫[3:。据报道,甜菜的HSLPr“一’基因是1997年由德国科学家克隆的抗线虫基因,表明利用植物基因工程技术改造受线虫危害的作物以产生人工抗性进而控制各种植物寄生线虫的时代已经到来。据国外报道,来自A.Cardenasii的两个主要基因Mae与Mag可减少虫卵数量或限制结节的形成川。为此通过基因工程方法转导抗线虫基因选育花生抗线虫品种是一项省时、投资小、可实现定向改良的有效方法。 自1968年开展花生植株再生研究以来,人们对花生的组织培养和植株的再生进行广泛的研究,取得了一些成绩。如庄伟建等...  (本文共5页) 阅读全文>>

《植物病理学报》2007年02期
植物病理学报

植物抗线虫基因工程新途径及其在分子育种中的应用

植物寄生线虫是一类世界性分布的植物病原物,其寄生范围广,环境适应性强,几乎可以侵害各种作物。大多数植物寄生线虫侵染植物的根或其它地下部分,干扰植物水分和营养物质的吸收,造成直接危害;一些线虫还能传播植物病毒,破坏寄主植物对其它病原物如真菌、细菌的抗性。随着现代农业的规模化发展,植物寄生线虫造成的经济损失逐年上升,短短十几年已由770亿美元增至1250亿美元[1]。我国地处温带和亚热带,气候适宜于线虫的活动和繁殖,世界性重要植物线虫病害在我国均有发生,其中以根结线虫和胞囊线虫引起的危害最为严重。目前,大豆胞囊线虫在我国的发生面积常年在135万hm2以上;根结线虫在保护地蔬菜生产中造成的损失严重时可达70%,甚至绝产;山东发生花生根结线虫已有40多年历史,对花生产量影响极大。因此,植物寄生线虫的严重危害已成为制约我国农业可持续发展的突出问题。防治线虫的传统方法包括轮作、杀线虫药剂、生物防治和抗线虫品种培育等,由于作物轮作不适于防治寄...  (本文共8页) 阅读全文>>

《南方农业学报》2011年09期
南方农业学报

植物抗线虫分子机制研究进展

0引言植物线虫病害是一种严重制约农作物产量的重要病害,其危害超过细菌和病毒,仅次于真菌病害,每年造成世界农业生产损失约1250亿美元(Chitwood,2003)。线虫能危害粮、油、棉、烟、茶、蔬菜、果树、林木、花卉、药材、牧草等各种植物,其适应范围广、传播途径多,是一种极难防治的土传性病害(张绍升,1990)。植物寄生线虫有外寄生线虫和内寄生线虫两类,其中危害最严重的线虫种类多属内寄生线虫,尤其以根结线虫、孢囊线虫和球形孢囊线虫3个属最为严重。常见的线虫防治方法有轮作、化学杀线虫剂、使用抗病品种等,但这几种方法均存在一定的缺陷,从而限制其的广泛使用。轮作主要是通过易感病作物与感病轻的作物轮作,可以一定程度降低虫口密度,但由于部分孢囊线虫在土壤中存活的时间长达10多年,且作物轮作不适于防治寄主范围较广的根结线虫,使作物轮作往往不能奏效或只对有限地域的有限作物起一定作用。化学杀线虫剂可以有效降低根结线虫对作物的危害,但多次使用后线...  (本文共6页) 阅读全文>>

《植物保护》2012年02期
植物保护

植物抗线虫基因与抗性机理研究进展

植物寄生线虫严重危害全球农业生产,全世界每年因线虫造成的作物产量损失高达1 000亿美元[1]。植物寄生线虫的取食策略各不相同,外寄生线虫主要寄生在植物的根皮细胞,如毛刺线虫属(Trichodorus spp.),而内寄生线虫,如根结线虫属(Meloidogyne spp.)和孢囊线虫属(Heteroderaspp.和Globoderaspp.),在植物根部建立永久性的取食位点后,线虫便从中吸取营养,进行生长发育和繁殖[2]。内寄生线虫可通过轮作、土壤消毒和选用抗病品种进行防治,然而,根结线虫具有广泛的寄主范围,孢囊线虫在无寄主的条件下仍可在土壤中存活长达10年以上,这使得通过轮作来防治线虫也无济于事。防治植物内寄生线虫的化学措施,包括利用一些非特异性的和极其有毒的杀线虫剂,由于化学药剂对环境造成污染和受政府的严格控制,这一方法在实际生产中受到严重制约。因此,抗线虫品种的选育显得愈来愈重要,最重要的是研究抗性基因及其内在的抗性机...  (本文共8页) 阅读全文>>