分享到:

新型拟生物染料亲和配基纯化碱性磷酸酶及碱性磷酸酶性质研究

本文首次通过在价廉、易得的偶氮染料上引入碱性磷酸酶(AKPEC.3.1.3.1)抑制剂基团,制备出八种用于亲和纯化小牛肠碱性磷酸酶的拟生物染料亲和配基,用MS、IR及~1H-NMR等手段鉴定它们的结构。分别测试它们对小牛肠碱性磷酸酶的纯化效果,发现配基V对小牛肠碱性磷酸酶的吸附选择性最好,进一步对其用于小牛肠碱性磷酸酶亲和纯化的层析条件进行了优化。用配基V首次纯化了文献尚未见报道的海藻孔石莼碱性磷酸酶,同时对孔石莼碱性磷酸酶的性质进行了研究。首次利用EPR、VIS、XRS谱学方法研究了各种金属离子对小牛肠碱性磷酸酶活性影响的微观机制。最后利用邹氏酶活性不可逆抑制动力学研究了EDTA对小牛肠及海藻孔石莼碱性磷酸酶的不可逆抑制动力学,揭示这两种来源不同的酶在结构上的差异。得到了以下一些有意义的结果:1.在八种合成的配基中,配基V对小牛肠AKP有高的亲和能力,其性能优于国际通用的Cibacron Blue F3GA。2.配基V在琼脂糖  (本文共118页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国协和医科大学
中国协和医科大学

M-CSFR配基结合功能区的克隆与表达

从人胎盘中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增出巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSFR)胞外区的,具有全部配基结合活性区域的前三个免疫球样蛋白结构域(D1-3)cDNA[Wang et al,Mol Cell Biol,13:5348-59,1993],经平端连接将其克隆到原核表达载体pET-28a的His-Tag下游,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导,D1-3在宿主菌中获得高效表达,表达量约占菌体总蛋白的46%。重组蛋白经Ni~(2+)组氨酸结合树脂螯合层析柱纯化,获得了纯化的D1-3,经SDS-PAGE显示为单一区带,其表观分子量为34kDa。当D1-3终浓度分别为1、0.1及0.01μM时,可以抑制白血病细胞系J6-1的集落形成,具有明显的生物学活性。将D1-3免疫家兔获得了高效价的抗D1-3血清,并纯化得到抗rhM-CSFsR的IgG。用酶联免疫吸附分析(enzyme-linked immunosorb...  (本文共96页) 本文目录 | 阅读全文>>

《分析化学》2005年09期
分析化学

亲和色谱仿生配基的筛选和设计

利用选择性好、稳定性高、价格低廉的仿生配基作为亲和色谱的功能基团,实现对目的蛋白质的亲和分离,可以弥补常规的单克隆抗体和...  (本文共5页) 阅读全文>>

《沈阳部队医药》2001年06期
沈阳部队医药

寡核苷酸配基在医学实验方法中的应用

寡核苷酸配基(oligonucleotid ligand,又称配基-Aptamer,以下简称配基),根据寡核苷酸的类别可分为DNA配基和RNA配基,其长度一般设计在30~40个碱基对(bp)左右,...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国生化药物杂志》2000年06期
中国生化药物杂志

组特异性亲和配基在分离纯化中的应用

分类介绍了常用的组特异性亲和配基在蛋白质分离纯化中的应用。...  (本文共3页) 阅读全文>>

《滨州医学院学报》1987年02期
滨州医学院学报

具有抗癌作用的蛋白质

哈佛大学医学院的研究人员已经分离提纯并克隆化一种蛋白质,它能刺激人体血管网的生...  (本文共1页) 阅读全文>>