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IL-6相关新基因的克隆鉴定、表达纯化及结构功能预测

细胞因子作用于相应受体时的一个重要结果是诱导基因表达,细胞膜上的受体接收特定的来自胞外的信号刺激后将这种信号传至胞内,产生一系列新的信号分子和有序的系列化级联反应,最终对细胞乃至整个生物体的生理功能产生影响。白细胞介素-6(IL-6)是一种多功能的细胞因子。其作用于敏感细胞时,必将导致一些基因的表达,克隆这些基因,必将有助于进一步阐明IL-6信号转导途径及发现新的信号分子,同时也将有助于进一步阐明IL-6与某些疾病的相关性。我们用cDNA-RDA法和改进的DD-PCR法,分离了IL-6处理前后U937细胞差异表达的基因片段;之后用电子克隆和RT-PCR技术克隆了一些新基因片段的全长cDNA序列;并用生物信息学方法对新基因的结构和功能预测;最后在原核系统对其中的STRF8基因进行了表达和纯化。首先,分离了16个差异表达的基因序列,反向Northern杂交证实了它们与IL-6的相关性。序列分析表明,其中7个差异表达的EST代表在细胞  (本文共91页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国病理生理杂志》2017年04期
中国病理生理杂志

替米沙坦抑制U937细胞增殖及诱导凋亡

白血病作为一类发病机制尚不完全清楚的异质性恶性克隆性疾病,系幼稚白血病细胞大量增生浸润并影响正常造血功能的造血系统恶性肿瘤,主要表现为贫血、出血、感染等临床症状。近几年来,各种因素导致白血病发病率显著升高,虽然随着化疗药物的不断改进及分子靶向治疗、造血干细胞移植术的逐渐开展,其生存率有所提高,然而造血干细胞移植术由于配型严格、费用较高、并发症多且风险较大等缺点限制了其广泛开展,因而积极探索新的抗癌药物对白血病的临床治疗及病人生存质量显得尤为重要。过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisomeproliferator-activated receptorγ,PPARγ)属于核激素受体,是一种核转录因子,广泛参与细胞的炎症反应、增殖、凋亡、自噬、分化等生命活动进程[1]。PPARγ在多种细胞中都有丰富的表达,同样在多种人类肿瘤细胞如肠癌细胞、乳腺癌细胞、前列腺癌细胞以及白血病细胞等均有丰富的表达。近几年针对PPARγ及其配体在抑...  (本文共7页) 阅读全文>>

《重庆医学》2012年25期
重庆医学

U937细胞染色体动粒变异的研究

动粒(kinetochore)又称着丝粒点(centromeric dots,Cd),是细胞分裂前/中期维系姐妹染色单体的重要结构。动粒主要是由多种着丝粒蛋白(centromeric proteins,CENPs)和串联重复的卫星DNA等组成,其内层附着在着丝粒上,外层和纺锤丝微管相连,并在其牵引下完成染色体移动和分离等过程。动粒结构或者组成的缺失或者变化,可能会导致纺锤丝微管的附着失败或者不平衡,进而引起染色体分离异常。有研究发现,在各种类型的肿瘤中染色体数目和形态异常是其显著的遗传学特征,而染色体不分离或错误分离是产生上述结果的直接原因。有研究发现,在HEP-2和SW626等细胞染色体上动粒变异的概率远高于正常细胞[1-2],而在健康人外周血淋巴细胞动粒的变异则极为罕见[3]。上述发现提示动粒的畸变可能是引起肿瘤细胞染色体异常的原因之一。作者采用改良的动粒-核仁组织区(centromeric dots-nucleolus o...  (本文共3页) 阅读全文>>

《海南医学院学报》2009年01期
海南医学院学报

培哚普利对U937泡沫细胞血管内皮生长因子表达的影响

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是常见的危害严重的心血管疾病。泡沫细胞是动脉粥样硬化斑块内出现的特征性病理细胞,一般认为在动脉粥样硬化形成的早期,血液中的单核细胞进入内皮下间隙,在内膜下被激活后分化为巨噬细胞,后者主要通过清道夫受体无反馈性下调地吞噬大量氧化修饰的低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL),导致细胞内脂质堆积,形成泡沫细胞。研究表明斑块内巨噬泡沫细胞分泌的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)可促进斑块内血管新生(angiogenesis),而血管新生与斑块的生长、破裂、出血及血栓形成关系密切[1]。本研究通过氧化低密度脂蛋白诱导体外培养的人单核/巨噬细胞系U937细胞成泡沫细胞,观察VEGF在泡沫细胞中的表达情况及培哚普利对其表达的影响。1材料与方法1.1实验材料人单核/巨噬细胞系...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中华临床医师杂志(电子版)》2008年09期
中华临床医师杂志(电子版)

培哚普利对U937泡沫细胞血管内皮生长因子表达与分泌的影响

血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是目前所知的惟一特异性血管内皮细胞有丝分裂原[1]。对于VEGF抗动脉粥样硬化还是促动脉粥样硬化仍存在很多争议。有报道表明斑块内巨噬泡沫细胞分泌的VEGF可促进斑块内血管新生,而血管新生与斑块生长、破裂、出血以及血栓形成关系密切[2]。血管紧张素转换酶抑制剂(angiotensin converting enzyme inhibitor,ACEI)有抗动脉粥样硬化的作用,但是否影响斑块内泡沫细胞VEGF表达及血管新生则少见明确报道。材料与方法一、主要材料与仪器RPM I 1640培养基,购自G ibco公司;胎牛血清,购自杭州四季青公司;低密度脂蛋白(LDL),购自中国医学科学院基础研究所;MDA药盒,购自南京建成生物工程公司;培哚普利,购自施维雅公司(MW:441·61);Trizol试剂,购自Invitro-gen公司。逆转录试...  (本文共7页) 阅读全文>>

《中成药》2007年11期
中成药

和厚朴酚对U937细胞的体外作用

厚朴的根茎皮在亚洲是用于治疗焦虑、咳嗽和胃肠功能紊乱的传统中药,和厚朴酚(Honokiol,HNK)是由其中提取出的羟基多酚化合物,具有抗血栓、抗感染、抗焦虑和抗氧化等功效[1-3]。近年来国外相继报道了HNK的抗肿瘤作用[4~6],发现它可以诱导白血病细胞株HL-60、Molt-4和多发性骨髓瘤等多种肿瘤细胞株发生凋亡,为其治疗恶性血液病提供了理论基础和实验依据,本试验试图通过研究HNK对人髓系白血病细胞株U937细胞和正常人外周血单个核细胞的体外增殖抑制和细胞毒性作用,探讨HNK诱导肿瘤细胞凋亡的效应及其作用的靶向性。1材料与方法1.1药物和厚朴酚(HNK)由广州市三先生物制品公司提供并鉴定,经临界萃取技术得到厚朴提取物纯度为大于95%。用二甲基亚砜将和厚朴酚配置成浓度为20mg/mL母液,-20℃贮存。1.2主要试剂和仪器噻唑蓝(Sigma,USA);碘化丙啶(PI)及RNA酶(北京鼎国生物技术有限公司);Annexin ...  (本文共4页) 阅读全文>>