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新城疫病毒HN蛋白基因的克隆、序列分析、表达及其免疫原性研究

从我国部分地区分离、鉴定了23株新城疫病毒(NDV),并对其部分生物学特性进行了研究。这23株NDV均能凝集鸡和人(O型血)的红细胞,对猪、山羊、绵羊、牛和马的红细胞凝集作用有差异。分离、鉴定的23株NDV,电镜下呈现圆形或椭圆形,直径100-500nm,囊膜上有长约8-10nm的纤突。NDV分离株及F_(48)E_8经鸡胚成纤维细胞培养,形成稳定的病毒蚀斑。血凝解脱及血凝素热稳定试验表明,四平株、昌黎株、青岛株和F_(48)E_8为快速解脱型,血凝素热稳定性差,而长春株为慢速解脱型,血凝素热稳定性好。鸡胚平均致死时间(Mean Death Time of chicken embryos,MDT)、脑内致病指数(Intracerebral Pathogenicity Index,ICPI)和静脉致病指数(IntravenousPathogenicity Index,IVPI)的检测结果表明,长春株是弱毒株(MDT大于168h、I  (本文共131页) 本文目录 | 阅读全文>>

《黑龙江畜牧兽医》2015年03期
黑龙江畜牧兽医

新城疫病毒HN基因的克隆及原核表达

新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的一种禽类急性、高度接触性传染病,给许多国家的养禽业带来严重的经济损失[1-2]。NDV为一种有囊膜、单股不分节段的负链RNA病毒,编码6个主要的病毒结构蛋白[3]。HN蛋白位于囊膜外表面,是NDV感染细胞所必须的,也是重要的宿主保护性抗原。HN蛋白在病毒感染宿主细胞、促进病毒与细胞及细胞与细胞之间融合、病毒毒力等方面具有重要作用[4]。目前,在NDV的抗原检测和疫苗制备方面还存在诸多问题,致使NDV广泛流行。为及时监控NDV的流行和获得有效的免疫保护,本试验以HN蛋白为研究对象,构建重组表达载体,并诱导表达获得重组HN蛋白,现将结果报道如下。1材料1.1病毒NDV La Sota毒株,购自哈尔滨维科生物技术开发公司。1.2载体与菌株p BluscriptⅡKS(+/-)和p ET-28a载体,由温州科技职业学院动物科学系动物病毒研究室保存;E.coli DH5α和BL21(DE3)感受...  (本文共3页) 阅读全文>>

《河南农业科学》2008年08期
河南农业科学

新城疫病毒洛阳分离株HN基因真核表达载体的构建

新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起禽的一种急性、热性,高度接触性传染病[1]。国际兽医卫生组织(OIE)将其定为A类动物疫病,我国将其定为一类动物传染病[2]。NDV为副黏病毒科,副黏病毒亚科,腮腺炎病毒属的成员,是禽1型副黏病毒的代表株[3],是一种具有囊膜的单股、负链、不分节段的RNA病毒,基因组包含6个基因,分别编码3′-NP-P-M-F-HN-L-5′六个主要多肽,即核蛋白(NP)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、融合蛋白(F)、血凝素-神经氨酸蛋白(HN)和聚合蛋白(L)[4]。HN蛋白和F蛋白位于NDV囊膜表面,构成纤突,这2种蛋白与NDV的致病性密切相关。有研究表明,F和HN基因是NDV的保护性抗原基因[5]。HN蛋白具有血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)活性,主要介导病毒与宿主结合,还能够通过与红细胞表面的受体结合而凝集所有两栖类、爬行类、禽类的红细胞[6]。核酸疫苗就是将含有抗原基因的质粒DNA直接导入动...  (本文共3页) 阅读全文>>

《西南农业大学学报(自然科学版)》2004年06期
西南农业大学学报(自然科学版)

新城疫病毒HN基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

新城疫病毒(NDV)为单股负链RNA病毒,属于副粘病毒科、腮腺炎病毒属,其基因组长度约15kb,按3’-NP-P-M-F-HN-L-5’排列,编码6种结构蛋白,其中HN和F蛋白构成了病毒囊膜表面的纤突,前者与宿主细胞受体识别、粘附有关,其球状头部包含了全部抗原位点,为HN蛋白主要功能区[1];后者则通过其融合多肽的穿膜作用介导病毒的侵入及宿主细胞融合[2],2者均可诱导机体产生中和抗体。新城疫是鸡和多种禽类的重要传染病之一,曾造成家禽生产严重的经济损失。随着疫苗的普遍使用,本病的发生和流行表现出散发性病例增加、疾病经过较为温和、死亡率低、临诊症状与病理变化不典型等一些新的特点,即所谓“非典型新城疫”。研究证实基因Ⅶ型是近年来新城疫流行的主要病原[3~5]。近年来,噬菌体展示技术在研究蛋白质的相互作用、抗原表位以及药物设计等方面取得了重要进展[6~10]。作为1种大型的噬菌体,T4噬菌体表面的2种衣壳蛋白SOC(Smallanti...  (本文共4页) 阅读全文>>

华中农业大学
华中农业大学

新城疫病毒F基因和HN基因的克隆、表达及其ELISA抗体检测方法的初步建立

新城疫(Newcastle Disease,ND)又名亚洲鸡瘟,是由新城疫病毒(NDV)引起的一种多病型的高度接触性传染病,主要侵害鸡、火鸡、其它家禽和野禽类,也可感染人,是一种世界范围内的重要的A类传染病,也是我国养鸡业中几十年来长期坚持的免疫预防的主要传染病之一。由于新城疫的流行,给全球养禽业造成了巨大的经济损失。本研究用RT-PCR方法,从新城疫病毒La Sota株基因组中克隆、鉴定了融合蛋白基因(F基因)和血凝素-神经氨酸酶基因(HN基因),并在大肠杆菌中进行了高效表达,得到了具有免疫活性的表达产物。以纯化的HN表达产物为抗原,建立了新城疫病毒抗体ELISA快速检测技术,为鸡新城疫基因工程疫苗及快速诊断试剂的研制奠定了扎实的基础。本实验的主要研究内容包括:1.新城疫病毒融合蛋白(F)基因和血凝素神经氨酸酶(HN)基因的克隆与序列分析 通过设计四对带有BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的引物,利用RT-PCR扩增以及亚克隆的方...  (本文共70页) 本文目录 | 阅读全文>>

《生物技术》2008年03期
生物技术

新城疫病毒F和HN蛋白的原核表达

新城疫(Newcastle Disease,ND)是由新城疫病毒(NewcastleDisease Virus,NDV)引起的一种急性高度接触性传染病,对养禽业危害严重[1]。NDV为单股负链RNA病毒,基因组约15kb,编码6种结构蛋白,分别为核衣壳蛋白(NP)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、融合蛋白(F)、血凝素神经氨酸酶(HN)和高分子量的RNA聚合酶(L)[2]。其中F和HN蛋白是主要的保护性抗原,在致病过程中起重要作用。F蛋白是NDV感染细胞所必需的,它不仅能促进病毒囊膜与宿主细胞膜融合,而且能促进相邻宿主细胞之间发生融合,是构成致病力的重要成分[3]。HN蛋白识别并吸附于细胞表面的受体,参与病毒粒子感染[4,5]。目前有关NDV病毒F和HN蛋白的研究很多,但其在表达系统中的高效表达方法还有待改进。本试验首次通过去除N端信号肽和C端跨膜区的方法提高NDV标准强毒F48E8株的F蛋白与HN蛋白的表达效率,以期获得高效表达...  (本文共3页) 阅读全文>>