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新城疫病毒HN蛋白基因的克隆、序列分析、表达及其免疫原性研究

从我国部分地区分离、鉴定了23株新城疫病毒(NDV),并对其部分生物学特性进行了研究。这23株NDV均能凝集鸡和人(O型血)的红细胞,对猪、山羊、绵羊、牛和马的红细胞凝集作用有差异。分离、鉴定的23株NDV,电镜下呈现圆形或椭圆形,直径100-500nm,囊膜上有长约8-10nm的纤突。NDV分离株及F_(48)E_8经鸡胚成纤维细胞培养,形成稳定的病毒蚀斑。血凝解脱及血凝素热稳定试验表明,四平株、昌黎株、青岛株和F_(48)E_8为快速解脱型,血凝素热稳定性差,而长春株为慢速解脱型,血凝素热稳定性好。鸡胚平均致死时间(Mean Death Time of chicken embryos,MDT)、脑内致病指数(Intracerebral Pathogenicity Index,ICPI)和静脉致病指数(IntravenousPathogenicity Index,IVPI)的检测结果表明,长春株是弱毒株(MDT大于168h、I  (本文共131页) 本文目录 | 阅读全文>>

《河南农业科学》2008年08期
河南农业科学

新城疫病毒洛阳分离株HN基因真核表达载体的构建

新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起禽的一种急性、热性,高度接触性传染病[1]。国际兽医卫生组织(OIE)将其定为A类动物疫病,我国将其定为一类动物传染病[2]。NDV为副黏病毒科,副黏病毒亚科,腮腺炎病毒属的成员,是禽1型副黏病毒的代表株[3],是一种具有囊膜的单股、负链、不分节段的RNA病毒,基因组包含6个基因,分别编码3′-NP-P-M-F-HN-L-5′六个主要多肽,即核蛋白(NP)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、融合蛋白(F)、血凝素-神经氨酸蛋白(HN)和聚合蛋白(L)[4]。HN蛋白和F蛋白位于NDV囊膜表面,构成纤突,这2种蛋白与NDV的致病性密切相关。有研究表明,F和HN基因是NDV的保护性抗原基因[5]。HN蛋白具有血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)活性,主要介导病毒与宿主结合,还能够通过与红细胞表面的受体结合而凝集所有两栖类、爬行类、禽类的红细胞[6]。核酸疫苗就是将含有抗原基因的质粒DNA直接导入动...  (本文共3页) 阅读全文>>

华中农业大学
华中农业大学

新城疫病毒F基因和HN基因的克隆、表达及其ELISA抗体检测方法的初步建立

新城疫(Newcastle Disease,ND)又名亚洲鸡瘟,是由新城疫病毒(NDV)引起的一种多病型的高度接触性传染病,主要侵害鸡、火鸡、其它家禽和野禽类,也可感染人,是一种世界范围内的重要的A类传染病,也是我国养鸡业中几十年来长期坚持的免疫预防的主要传染病之一。由于新城疫的流行,给全球养禽业造成了巨大的经济损失。本研究用RT-PCR方法,从新城疫病毒La Sota株基因组中克隆、鉴定了融合蛋白基因(F基因)和血凝素-神经氨酸酶基因(HN基因),并在大肠杆菌中进行了高效表达,得到了具有免疫活性的表达产物。以纯化的HN表达产物为抗原,建立了新城疫病毒抗体ELISA快速检测技术,为鸡新城疫基因工程疫苗及快速诊断试剂的研制奠定了扎实的基础。本实验的主要研究内容包括:1.新城疫病毒融合蛋白(F)基因和血凝素神经氨酸酶(HN)基因的克隆与序列分析 通过设计四对带有BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的引物,利用RT-PCR扩增以及亚克隆的方...  (本文共70页) 本文目录 | 阅读全文>>

《生物技术》2008年03期
生物技术

新城疫病毒F和HN蛋白的原核表达

新城疫(Newcastle Disease,ND)是由新城疫病毒(NewcastleDisease Virus,NDV)引起的一种急性高度接触性传染病,对养禽业危害严重[1]。NDV为单股负链RNA病毒,基因组约15kb,编码6种结构蛋白,分别为核衣壳蛋白(NP)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、融合蛋白(F)、血凝素神经氨酸酶(HN)和高分子量的RNA聚合酶(L)[2]。其中F和HN蛋白是主要的保护性抗原,在致病过程中起重要作用。F蛋白是NDV感染细胞所必需的,它不仅能促进病毒囊膜与宿主细胞膜融合,而且能促进相邻宿主细胞之间发生融合,是构成致病力的重要成分[3]。HN蛋白识别并吸附于细胞表面的受体,参与病毒粒子感染[4,5]。目前有关NDV病毒F和HN蛋白的研究很多,但其在表达系统中的高效表达方法还有待改进。本试验首次通过去除N端信号肽和C端跨膜区的方法提高NDV标准强毒F48E8株的F蛋白与HN蛋白的表达效率,以期获得高效表达...  (本文共3页) 阅读全文>>

山东农业大学
山东农业大学

鸭新城疫病毒HN蛋白单克隆抗体的制备及间接ELISA方法的建立

鸭新城疫,又称为鸭副黏病毒病(Duck paramyxovirus disease,DPMV)是由禽副黏病毒I型(APMV-I)引起的一种急性、高度接触性传染病,各日龄鸭均易感,给养鸭业带来严重经济损失。新城疫病毒粒子囊膜表面包含两种糖蛋白,分别是血凝素-神经氨酸酶蛋白(hemagglutinin-neuraminidase protein,HN)和融合蛋白(fusion protein,F)。其中HN蛋白与病毒的毒力及致病性密切相关,是主要的保护性抗原,在新城疫病毒(NDV)的研究中具有十分重要的意义。本研究以Gen Bank已公布的鸭源NDV SDWF02株HN基因序列(Gen Bank登录号:HM188399)为模板,在其抗原位点分布较为丰富区域,设计并合成一对特异性引物,运用RT-PCR的方法扩增出鸭源NDV的HN基因片段,经测序分析后,将阳性重组质粒进行原核表达,制备出针对HN蛋白的单克隆抗体,为鸭源NDV的深入研究及...  (本文共66页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国人民解放军军需大学
中国人民解放军军需大学

新城疫病毒HN基因抑瘤效应机制的研究

本研究利用pIRESlneo载体,构建了pIRHNcc、pIRHNsp、pIRFcc、pIRFsp、pIRHNFcc五个核酸表达质粒;在本实验的后期,又利用新的真核表达载体pVAXl构建了pVHN核酸表达质粒。将构建的核酸表达质粒分别转染肿瘤细胞(Hela细胞和OS732细胞)采用血凝效价测定及Western blot分析,检测其HN表达活性。经检测,HN蛋白的表达量以pVHNcc最高,pIRHNcc、pCHNcc次之,pIRHNFcc较低。经间接免疫荧光试验证实,HN蛋白主要存在于转染细胞的胞膜上,有时可在胞浆中也可观察到特异的黄绿色荧光。本实验利用细胞生长抑制实验、吖啶橙染色及染色体DNA电泳等方法,研究了含NDV病毒的重组质粒对肿瘤细胞的影响,证明NDVcc的HN基因(HNcc)有一定的诱导凋亡的作用。NDV病毒HN的全部核酸表达质粒均能抑制肿瘤细胞的生长并造成细胞骨架的破坏。本实验成功复制C57BL/6鼠的B16肿瘤模型...  (本文共55页) 本文目录 | 阅读全文>>