分享到:

重组腺病毒介导人野生型p53、GM-CSF和B7-1基因体外修饰慢性髓性白血病细胞瘤苗的实验研究

慢性髓性白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)是一种起源于骨髓多能造血干细胞的恶性增殖性疾病,我国年发病率0.36/10万,占各类白血病的20%,占慢性白血病的95%,如不经有效治疗,诊断后平均生存期约2年。目前临床上常用的治疗方法(化疗、放疗和造血干细胞移植)都存在一定的局限性,因此需要探索一种新的有效治疗白血病的方法。军事医学科学院二所三室构建的携带人野生型p53基因和肿瘤免疫相关基因GM-CSF、B7-1的重组腺病毒(命名为BB-102),感染喉癌、肝癌、肺癌原代细胞后,能明显抑制癌细胞的增殖并诱导其凋亡,而且体外能诱导自体外周血淋巴细胞生成肿瘤杀伤性的CTL。本实验应用该重组腺病毒在体外修饰CML原代细胞作为瘤苗进行CML生物治疗的实验研究,以期为CML的临床治疗提供新的方案。据此,本研究完成以下具体工作:1.重组腺病毒的扩增与质量检定在293细胞中分别扩增Ad-p53、BB-102以  (本文共141页) 本文目录 | 阅读全文>>

《临床医药实践杂志》2008年07期
临床医药实践杂志

急性白血病B7-1基因的表达及临床意义

白血病是较为常见的肿瘤之一,细胞凋亡紊乱与机体免疫功能下降对疾病的发生发展有着密不可分的联系。虽然白血病细胞存在肿瘤特异性抗原,但肿瘤细胞仍然能够在人体免疫监视下发展、转移,这与肿瘤细胞缺乏协同刺激信号、无法有效诱导免疫应答有关。B7-1是最为重要的协同刺激分子之一,它在抗原暴露后的免疫反应调控中起重要作用。应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)研究急性白血病(AL)患者在初治、化疗缓解后、复发时B7-1mRNA表达水平的变化,对白血病发病机制及预后因素做初步的研究。1资料与方法1.1一般资料64例AL(患病组)患者(初治21例、复发7例、缓解36例)为2006年10月-2007年4月期间住院和门诊随访的患者,经过骨髓细胞形态学、组织化学、免疫表型、融合基因、染色体等检查确诊,均符合FAB诊断标准。其中急性淋巴细胞白血病(ALL)26例(L111例,L215例);急性非淋巴细胞白血病(ANLL)38例(M02例,M14例,M25...  (本文共2页) 阅读全文>>

《中国医科大学学报》2005年03期
中国医科大学学报

共刺激分子B7-1与汉坦病毒核蛋白基因共表达载体的构建及免疫调节作用

抗原提呈细胞(antigenpresentingcell,APC)在DNA疫苗诱发免疫反应中起重要作用,通过肌肉、皮下组织接种DNA疫苗,均需要大剂量的DNA[1]。共刺激分子B71与DNA疫苗共同接种,可有效的提高APC摄取DNA疫苗在组织中表达的抗原量,是优化基因免疫的新途径[2]。本研究构建B71(CD80)基因和汉坦病毒S基因(编码核蛋白)共表达载体,探讨共刺激分子B71(CD80)对汉坦病毒核蛋白基因疫苗的免疫调节作用。1材料与方法1.1主要试剂EcoRⅠ、SalⅠ、BglⅡ等限制性内切酶、PCR扩增试剂盒、连接试剂盒、DNA琼脂糖凝胶回收试剂盒均从Takara公司购进。1.2质粒和细胞质粒pCA14由加拿大Microbix公司购进;质粒pTARGET hanS含汉坦病毒(76118株)S基因编码区的真核表达载体由本实验室构建;pcDNA3B7(含B71全编码基因)由中国医学科学院许雪梅老师提供;pcDNA3.1S(含...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中华胃肠外科杂志》2003年01期
中华胃肠外科杂志

内部核糖体进入位点控制人癌胚抗原与共刺激分子B7-1的表达

由微小RNA病毒的内部核糖体进入位点(internalribosomalentrysite,IRES)连接的两个开放阅读框架,其转录产物在翻译时核糖体能同时进入并开始翻译IRES上游及下游的两个转录子。其中IRES上游的mRNA的翻译起始遵循一般的真核生物基因的翻译起始规律,IRES下游的mRNA的翻译起始由核糖体直接进入IRES位点后起始翻译。IRES曾经被用于构建不同类型的表达载体犤1-4犦。我们构建由IRES连接的人癌胚抗原(CEA)和共刺激分子(B7-1)共表达质粒载体,对其作为注射用肿瘤疫苗诱发机体产生特异性抗肿瘤免疫进行动物实验研究,为将来成为结直肠癌术后预防复发与转移辅助治疗奠定实验基础。材料与方法一、材料大肠杆菌DH5、Top-ten,本室保存。COS-7细胞购自中国科学院细胞所。结直肠癌组织取自临床检测CEA阳性患者手术切除的结直肠癌组织。鼠B7-1基因为本室保存。pGEM-Teasy载体购自Promega公司...  (本文共3页) 阅读全文>>

《国外医学.输血及血液学分册》2003年01期
国外医学.输血及血液学分册

B7-1在急性髓系白血病治疗中的研究进展

双信号分子模型 T细胞激活需要两个信号:一个是抗原特异性的,通过T细胞受体和抗原一主要组织相容性复合物(MHC)相互作用来传递;另一个是非抗原特异性的,通过共刺激分子及其受体的相互作用来传递。Schwartz[‘l通过建立细胞培养模型证实了共刺激信号存在与否,可决定T细胞产生杀伤作用还是进人一种抗原特异性的非应答状态即T细胞无能。2 B7一l的结构及功能 B7是迄今为止发现的最有潜力的共刺激分子家族,包括两个主要成员B7一l和B7一2。两者的表达限于淋巴组织激活的B细胞、树突状细胞和巨噬细胞,并依赖于细胞的激活。B7一1的表达调控缓慢,一般峰值在刺激后的4一5天;而B7一2的表达调控迅速,一般峰值在刺激后48小时圈。也有实验表明,脂多糖可以诱导B细胞表达B7一l和B7一2,两种共刺激分子表达的峰值均在刺激后的18一42小时,但B7一2表达的量在任何时间都显著高于B7一IL33。 B7一1基因组ONA长度约32kb,由6个外显子组...  (本文共3页) 阅读全文>>

苏州大学
苏州大学

抗人B7-1人—鼠嵌合抗体的制备及生物学功能研究

目的:在本科室成功构建的抗人B7-1人-鼠嵌合抗体重组表达质粒pIRES/ch-4E5的基础上,将其转染CHO细胞,获得持续稳定分泌嵌合抗体的真核表达细胞株CHO-ch-4E5并制备嵌合抗体。进而分析抗体的生物学功能。方法:(1)采用小量质粒抽提试剂盒提取抗人B7-1人-鼠嵌合抗体的重组表达质粒pIRES/ch-4E5,经脂质体法转染CHO细胞,用G418选择培养基加压培养约2周,收集培养上清,经流式细胞术(FCM)进行检测。阳性孔细胞再经亚克隆筛选;(2)收集稳定分泌嵌合抗体的CHO细胞,采用Trizol法抽提总RNA,经RT-PCR方法合成cDNA,再加入特异性引物经PCR扩增嵌合重、轻链基因;(3)大规模无血清培养稳定分泌嵌合抗体的CHO细胞,收集上清,经高速离心、超滤浓缩及PBS透析过夜,采用Protein G亲和层析柱进行分离纯化,Lowry法定量,间接免疫荧光及FCM法分析抗体对Raji、Daudi、U937、K56...  (本文共64页) 本文目录 | 阅读全文>>