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重组腺病毒介导人野生型p53、GM-CSF和B7-1基因体外修饰慢性髓性白血病细胞瘤苗的实验研究

慢性髓性白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)是一种起源于骨髓多能造血干细胞的恶性增殖性疾病,我国年发病率0.36/10万,占各类白血病的20%,占慢性白血病的95%,如不经有效治疗,诊断后平均生存期约2年。目前临床上常用的治疗方法(化疗、放疗和造血干细胞移植)都存在一定的局限性,因此需要探索一种新的有效治疗白血病的方法。军事医学科学院二所三室构建的携带人野生型p53基因和肿瘤免疫相关基因GM-CSF、B7-1的重组腺病毒(命名为BB-102),感染喉癌、肝癌、肺癌原代细胞后,能明显抑制癌细胞的增殖并诱导其凋亡,而且体外能诱导自体外周血淋巴细胞生成肿瘤杀伤性的CTL。本实验应用该重组腺病毒在体外修饰CML原代细胞作为瘤苗进行CML生物治疗的实验研究,以期为CML的临床治疗提供新的方案。据此,本研究完成以下具体工作:1.重组腺病毒的扩增与质量检定在293细胞中分别扩增Ad-p53、BB-102以  (本文共141页) 本文目录 | 阅读全文>>

第四军医大学
第四军医大学

重组腺病毒介导人野生型p53、GM-CSF和B7-1基因治疗胶质瘤的实验研究

研究目的本研究旨在探讨腺病毒载体(AdV)介导的人野生型p53、GM-CSF和B7-1基因对胶质瘤细胞的凋亡效应和免疫原性影响,以及动物在体实验中对胶质瘤的治疗效果,为进一步胶质瘤的联合基因治疗提供实验依据。研究方法确定适宜的AdV感染倍数(MOI),选用胶质瘤细胞系U251和U87为模型细胞,以携带人WT-p53、GM-CSF、B7-1的AdV(BB-102)转染U251和U87细胞后,以Western印迹杂交法检测WT-p53基因的表达,ELISA法检测GM-CSF基因的表达,流式细胞仪检测B7-1基因的表达。台盼蓝染色法观察细胞存活,绘制生长曲线。PI-Hoechst33342染色法检测凋亡效应。MLR反应观察其对胶质瘤细胞免疫原性的影响。并观察BB-102介导的目的基因体外修饰胶质瘤细胞激活细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应。在体实验通过利用非肥胖糖尿病/严重联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠重建人免疫系统和皮下移植人胶...  (本文共65页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国医药指南》2011年15期
中国医药指南

重组腺病毒介导的野生型p53基因对淋巴瘤细胞放疗敏感性的影响

基因治疗是通过基因操作将正常功能的基因转至患者体内并将其表达、替换或替代变异基因或缺陷基因等并使其恢复正常的作用,从而达到治疗疾病的目的。通过近几十年的不懈努力,已经发现了许多疾病的致病基因,由于这些基因的变异或缺失引起表达异常从而导致肿瘤的形成,尤其在恶性肿瘤的形成中起了重要的作用。如果能通过某些手段使其基因变异恢复正常或载入正常基因,即有可能治疗或预防某些疾病。使得重组腺病毒介导的野生型p53基因治疗恶性淋巴瘤成为可能。1材料与方法1.1主要材料Raji淋巴瘤细胞购自上海中国科学院细胞库。Daudi淋巴瘤细胞来自苏州大学免疫教研室馈赠。p53基因药物(今又生)购自深圳赛百诺基因技术有限公司。1.2细胞培养将raji和daudi细胞用含10%灭活小牛血清的RPMI1640培养液接种于25cm 2培养瓶中,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养。一般2~3d传代一次。1.3 MTT方法①观察药物浓度不同及时相不同对于肿瘤...  (本文共3页) 阅读全文>>

《生物技术通讯》2002年01期
生物技术通讯

重组腺病毒介导人野生型p53和B7-1基因诱导喉癌细胞凋亡并增强其免疫原性

基因治疗是在基因水平上对疾病进行预防和治疗,即通过编码相关遗传信息的特异DNA序列的转移来达到治疗目的。肿瘤的发生与细胞遗传物质的改变有关,因此基因治疗对于肿瘤是一种合理的且有着极好发展前景的治疗手段。目前试用于临床的基因治疗方案大多是通过向患者体内导入单一基因(或相关DNA序列)来达到治疗目的。但肿瘤的发生和发展是一个多阶段的复杂过程,往往涉及多种基因的异常和机体抗肿瘤免疫功能的降低[1],因此单靠一种基因或一种治疗方案很难达到广泛而有效的治疗效果。在这种情况下,肿瘤的复合基因治疗往往显得更为合理,即联合应用多种基因治疗策略,通过向患者体内导入多种目的基因,从多个环节控制肿瘤的发生和发展[2]。据此我们设计了一项肿瘤复合基因治疗方案,即以复制缺陷型重组腺病毒为载体,同时向肿瘤细胞中导入肿瘤抑制基因p53以及肿瘤免疫相关基因B7-1,以期通过p53的作用直接抑制癌细胞增殖并诱导其凋亡,同时通过B7-1的作用来增强机体自身的抗肿瘤...  (本文共5页) 阅读全文>>

《肿瘤防治研究》2002年02期
肿瘤防治研究

重组腺病毒介导的人野生型p53、GM-CSF和B7-1基因在肝癌细胞中的表达

腺病毒是目前基因治疗中最常用的载体之一[1,2 ] 。本实验用的腺病毒载体为E1、E3区和包装信号缺失的复制缺陷型 5型腺病毒载体 ,携带人野生型p5 3、GM CSF和B7 1基因 (简称BB 1 0 2 ) [3 ] 。构建方式为首先构建以串联方式携带人野生型 p5 3、GM CSF和B7 1基因的重组质粒pBB 1 0 2 ,同时克隆 5型腺病毒基因组 (E1、E3区和包装信号缺失 )的质粒GT40 5 0 ,通过共转染 2 93细胞获得较高滴度的BB 1 0 2。评价基因治疗中载体有效性包括载体的转染效率、目的基因表达的持续时间和表达水平等几个方面 ,它直接影响基因治疗的效果[4] 。BB 1 0 2在肺癌[5] 和喉癌[6] 的实验性治疗中已取得较好的效果 ,本实验目的是观察BB 1 0 2对肝癌细胞的转染效率及目的基因的表达 ,为进一步研究利用此载体治疗肝癌提供依据。1 材料与方法1 .1 材料Ad GFP...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中华肝脏病杂志》2001年04期
中华肝脏病杂志

腺病毒介导的人野生型p53、GM-CSF和B7-1基因转移诱导肝癌细胞的生长抑制和凋亡

我们采用表达人野生型P53、GM-CSF及B7—l基因的重组腺病毒载体(B-102)体外转染不同的肝癌细胞系,观察其抑瘤效果,为其在肝癌复合基因治疗中的应用提供实验依据。 材料与方法 1.材料:免疫组织化学检测试剂盒(Ultrasen-sitive”MS-P Kit)( Maxim Biotech, Inc), TdT法凋亡细胞原位检测试剂盒 (I Situ Cell Death De-tection Kit· AP) (Biomo),鼠抗人P53单克隆抗体 PAb1801(anti-human p53 monoclonal anti-body PAbl80)(Labvision)。 Ad-GFP由美国百特医疗用品公司提供,表达人野生型 p53、 GM-CSF和B7—l基因的重组腺病毒载体BB—102由邱兆华博士构建[l]。P53基因野生型肝癌细胞系BEL-7402由军事医学科学院放射医学研究所提供; P53基因突变肝癌细胞系H...  (本文共3页) 阅读全文>>