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表达禽流感病毒HA-NA、HA-NP及NP基因重组禽痘病毒的构建及其免疫效力的研究

禽流感(Avian Influenza,AI)是由A型流感病毒引起的禽类的感染和/或疾病综合征,广泛流行于世界上许多国家和地区,给养禽业造成了巨大的经济损失。高致病力禽流感(HPAI)多以突然发病和高死亡率为主要特征,常常导致感染鸡群的全群覆没,被国际兽疫局列为A类烈性传染病。近几年来,在我国的一些地区也相继出现了AI的流行,并于1996年,从广东鹅体内分离到对鸡具有高致病力的H5N1亚型AIV每株,这对于我国的养禽业无疑是个极其危险的信号。一年后,97’香港禽流感直接传播给人并致人死亡事件的发生,更加突出了AIV的公共卫生学意义。为进一步阐明我国所分离的AIV毒株与香港流感毒株之间的关系,本研究对AIVA/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)[GD3/96]的神经氨酸酶(NA)基因进行了RT-PCR扩增、克隆与测序。结果所得到的NA基因cDNA包含完整的开放阅读框,全长为1410bp,共编码469个氨基酸;通过  (本文共118页) 本文目录 | 阅读全文>>

《华北农学报》2011年05期
华北农学报

猪白细胞介素-2基因的克隆及其重组禽痘病毒载体的构建

白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)主要是由激活T淋巴细胞产生的一类Th1型细胞因子,在抗肿瘤、抗毒素、免疫调节及感染性疾病的治疗中具有重要作用[1]。它能够有效地提高免疫功能,促进T、B淋巴细胞的增殖,增强NK细胞、单核巨噬细胞等的杀伤活性;能激活、提高免疫细胞的多种功能,如提高它们杀伤癌细胞、病毒或细菌感染细胞、促进抗体生成和分泌的能力,在免疫应答系统中具有十分重华北农学报26卷要的免疫生理调节效应[2-4],是一种最早发现的具有广泛生物活性的细胞因子。自1983年Taniguchi等[5]首次克隆了人IL-2cDNA以来,迄今为止已有30多种动物的IL-2基因被成功克隆。Goodall等[6]于1991年首次成功克隆出了猪IL-2基因并对其序列进行了初步研究。国内猪白细胞介素2(Porcine interleukin-2,pIL-2)的研究起步较晚。1998年,余兴龙等首次成功从ConA刺激的猪外周血单核...  (本文共5页) 阅读全文>>

《华北农学报》2008年06期
华北农学报

表达鸡白细胞介素18重组禽痘病毒的构建及其表达产物生物学活性的检测

禽痘病毒是目前所知最大的动物病毒,至少可容纳25 kb的外源基因,是构建多价疫苗的理想载体。到目前为止,已经有多种禽类病原的免疫原基因在禽痘病毒载体上被表达,如马立克氏病毒糖蛋白gB基因、鸡传染性法氏囊炎病毒VP2基因和禽流感病毒的HA基因等[1-3],这些重组病毒都可使免疫鸡产生抵抗强毒攻击的免疫力。虽然禽痘病毒疫苗的毒副作用小、安全性高,但仍有一定的残留毒性,表现为对雏鸡的体重增长和免疫应答的抑制作用[4]。所以,为了提高禽痘病毒的安全性,研究者将眼光放在佐剂上,特别是一些细胞因子的研究上[5]。白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)是1995年首次报道的一种新型细胞免疫调节因子[6],具有多种生物学功能,人类医学研究证明,IL-18在抗微生物感染,尤其是在抗肿瘤免疫方面具有重要的潜在应用价值[7,8]。鸡IL-18(Chicken IL-18,ChIL-18)则于2000年首次报道[9],由于它具有与...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国兽医科学》2007年04期
中国兽医科学

H5N1亚型禽流感病毒NA基因在重组禽痘病毒中的表达及其产物的免疫原性

禽流感(avian influenza,AI)是由正黏病毒科流感病毒属A型流感病毒所引起的禽类的感染和/或疾病综合征,其中由部分H5和H7亚型禽流感病毒(AIV)引起的高致病性禽流感被世界动物卫生组织确定为A类烈性传染病[1]。流感病毒的病毒颗粒表面有血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)两种糖蛋白。与高度变异的HA基因相比,NA基因的变异程度要小。NA基因编码的NA蛋白是AIV的主要表面抗原之一,又是体液免疫的靶抗原,可诱导机体产生特异性抗体,抑制病毒从感染细胞释放,再感染其他细胞,从而减少病毒的增殖[2-4]。在表达AIV HA和NA基因的重组禽痘病毒对SPF鸡的免疫效力试验中发现,用HA与NA双基因重组禽痘病毒rFPV-HA-NA免疫的鸡能够100%的抵抗H5N1亚型高致病力禽流感病毒(HPAIV)的致死性攻击,同时又获得了对H7N1亚型HPAIV攻击的保护力[5]。对这2个毒株进行分析发现,H5N1与重组病毒所表达的HA为同...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国家禽》2007年19期
中国家禽

使用现代分子技术鉴别禽痘病毒分离株

因为禽痘病毒之间分歧的程度,常规方法识别所有种类验证困难,PCR的禽痘病毒特异性寡核苷酸探针和序列测定支持系统发育的研究。先前的初步研究用fpvl67位点,其编码同源牛痘病毒核心蛋白P4b(A3)。PCR本身在病毒之间并没有区别,但限制酶或序列分析表明禽痘病毒不是与禽痘病毒就是与金丝雀痘病毒聚集成群。进一步研究鹦鹉P4b位点证明了一个第三群。禽痘病毒系统发育的确证需要额外的核心资料。作为诊断目的,直接用PCR进行片段长度多态性分析比用fpvl67基因位点限制性内切酶消化分析更有用。试验测定收集了23株禽痘病毒,包括分离株、疫苗和实验室株,开始在fpvl67基因位点,然后用许多特异性引物对FWPV和CNP...  (本文共1页) 阅读全文>>

《中国兽医杂志》2004年10期
中国兽医杂志

禽痘病毒表达载体在兽用重组疫苗中的应用

禽痘病毒表达载体是已构建表达外源基因的病毒载体中的一种 ,它在表达外源基因上具有明显的优势 :(1)它的基因组结构庞大 ,能耐受较大的外源基因(2 5~ 35 kb)在其基因组的不同位点插入。 (2 )严格的胞浆内复制 ,避免了病毒基因重组入宿主细胞染色体的可能性。且禽痘病毒的宿主范围较窄 ,仅感染禽类 ,在哺乳动物体内仅产生一过性感染 ,安全性较高。(3)表达产物 (蛋白质 )在翻译后的加工修饰过程与体内极为相似 ,因此活性高。且保留了相应的抗原性、免疫原性。基于这些特点 ,使得禽痘病毒载体不仅可作为禽源疫苗 ,而且还可作为哺乳动物乃至人类的基因工程活载体疫苗 ,具有广阔的应用前景。1 重组禽痘病毒的构建禽痘病毒 (FPV)属于痘病毒科 ,禽痘病毒属的成员。重组禽痘病毒的构建主要利用 FPV的非必需区(NER) ,它包括左手末端区 ,WR株内部 Hind F片段以及胸腺嘧啶激酶 (TK)基因 ,其中 TK基因在构建重组痘病毒载...  (本文共3页) 阅读全文>>