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马传染性贫血病驴白细胞弱毒及其亲本马强毒(L株)基因组序列比较分析以及弱毒感染性分子克隆的构建

马传染性贫血病毒(EIAV,简称马传贫)是反转录病毒科慢病毒属的成员之一,是马传染性贫血病(EIA)的病原体。由于慢病毒给人类和动物的健康造成了严重的威胁,因此慢病毒的免疫预防,尤其是艾滋病的免疫预防成为研究的热点。我国的马传贫驴白细胞弱毒疫苗,是迄今为止世界上唯一投入应用的慢病毒疫苗,该疫苗在我国已成功地控制了马传贫的流行,是研究慢病毒免疫预防非常有价值的动物模型。马传贫驴白细胞弱毒疫苗(DLA-EIAV)是将分离自辽宁省的EIAV L株通过驴体传代,使其毒力明显增强(称为驴强毒,DA-EIAV),然后在驴白细胞培养物上连续传代致弱获得的。在这一过程中,EIAV L株由强毒变为弱毒,用此弱毒疫苗接种动物后不表现临床症状,但可诱导免疫保护。为了揭示我国马传贫弱毒疫苗毒力致弱及免疫保护的分子机制,为人免疫缺陷病毒及其它慢病毒的免疫预防提供借鉴,我们对马传贫驴白细胞弱毒及其亲本马强毒EIAV L株前病毒进行了全基因克隆和序列测定,比  (本文共124页) 本文目录 | 阅读全文>>

《畜牧兽医科技信息》2000年06期
畜牧兽医科技信息

EIAV的长端重复序列是细胞向性的决定因素

马传染性贫血病毒(EIAv)的wyo而ng株是强毒野外株,体外复制成高滴度仅在单细胞衍生的巨噬细胞内。相反,阶。而吧衍生的生长于成纤维细胞的EL气v株一Malnlgjist病毒,其复制发生在马的原胎肾和真皮细胞以及f艺、和Cfzth细胞系内。Wy。而ng和M习nl邵‘st病毒最大区别就在长端重复序列(1几卫)和胞膜区序列。美国S.IJ.Payne等研...  (本文共1页) 阅读全文>>

东北农业大学
东北农业大学

EIAV诱导的特异性T细胞免疫应答检测方法的建立

马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia virus, EIAV)是一种双链RNA病毒,属于反转录病毒科(Retroviridae)慢病毒亚科(Lentivirus),是严重危害养马业的马传染性贫血(EIA)病原体。马传染性贫血病毒(EIAV)主要侵害宿主的免疫系统。马传贫病毒在急性发病期主要在组织中分化的巨噬细胞中复制,病毒可以进入存在于外周血未分化的单核细胞,但不能在单核细胞内复制形成成熟的病毒粒子。马传染性贫血病毒进入机体后,首先受到固有免疫系统的攻击,包括生理屏障和非特异性免疫细胞及其分泌的各种免疫分子。然后是特异性免疫系统的攻击,包括体液免疫和细胞免疫,由于其主要是通过细胞与细胞间的接触进行扩散,接触不到体液,所以细胞免疫在抗马传染性贫血病毒中起主要作用。主要通过CD8+T细胞接受内源性抗原刺激后分化增殖为细胞毒性T细胞发挥免疫作用。机体细胞免疫的检测对于某些疾病的诊断和发病机理研究、免疫治疗...  (本文共52页) 本文目录 | 阅读全文>>

新疆农业大学
新疆农业大学

伪型EIAV病毒的制备

马传染性贫血病毒(Equine Infectious Anemia Virus, EIAV)是一种非灵长类慢病毒,而且是基因组结构最简单的慢病毒,可以将前病毒基因组持久地整合到感染细胞的染色体上并在感染细胞和子代细胞中表达病毒基因,可作为将外源基因引入细胞的载体。本研究的目的在于利用我国在马传染性贫血病毒(EIAV)研究上的成果,在EIAV感染性克隆(pLGFD3-8和pOK8266T)的基础上,构建EIAV包装盒表达载体,选择EIAV基因转移载体的最佳表达条件,完成有效的EIAV基因转移载体四质粒系统构建,获得具有感染性的复制缺陷型伪型EIAV病毒。本实验利用反向遗传操作技术,以EIAV感染性克隆质粒(pLGFD3-8和pOK8266T)为基础,将EIAV gag/pol基因片段和rev基因片段插入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,成功构建了EIAV包装盒表达载体,即囊膜缺失的EIAV gag/pol表达质粒pCDFGP和...  (本文共76页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国预防兽医学报》2009年03期
中国预防兽医学报

EIAV基因转移载体包装盒表达质粒的构建

马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia virus,EIAV)属于逆转录病毒科慢病毒属,是基因组结构最简单的慢病毒,其前病毒基因组能高效稳定整合到非分裂细胞和终末分化细胞的染色体上[1],可以用于构建基因转移载体,目前已成功获得转基因猪[2]、鸡[3-4]和鹌鹑[5]。而病毒包装盒是基因转移载体系统中的一个重要组成部分,即包装信号Gag/Pol蛋白。而EIAV rev基因调节病毒基因组RNA的选择性拼接,促进未拼接和部分拼接的病毒RNA的核输出及表达[6],对Gag/Pol蛋白的表达具有重要作用。但是否是必要条件,或者为了减小体内病毒重组的可能性而分别转染细胞能否实现Gag/Pol蛋白的表达,还需要实验证实。已知rev基因的全部功能性结构域都位于第2个外显子[7],所以本研究中将rev基因与gag/pol基因分别独立构建,采用分别独立转染和共转染的方式,比较包装信号Gag/Pol蛋白的表达情况。1材料...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国预防兽医学报》2008年09期
中国预防兽医学报

EIAV驴白细胞弱毒疫苗株减毒过程第61代毒前病毒全基因组DNA的克隆与分析

马传染性贫血病毒(Equine imfectious anemiaviru,EIAV)属反转录病毒科慢病毒属。慢病毒成员无论在形态、细胞嗜性、基因组结构、病毒复制的分子机制、病毒的生活周期、抗原漂移规律、免疫机理及病毒与宿主的相互作用等方面都极其相似[1,2]。由于慢病毒具有对宿主持续感染性和高度变异性的特点,使得慢病毒疫苗的开发极为困难。而EIAV的RNA基因组是慢病毒属基因组中最短最简单的,它编码结构蛋白基因gag、pol和env。EIAV最吸引人的特点在于大多数受其感染的动物最终会抑制病毒复制而成为长期的隐性持续性感染[3]。因此,对EIAV主要基因的分子生物学研究对其他慢病毒疫苗的研制具有重大的意义。二十世纪七十年代我国科学家将EIAV强毒株经过多次体外培养驯化,研制成功了EIAV驴白细胞弱毒疫苗,在我国大范围应用后,成功控制了EIA的流行。该疫苗不仅可以抵抗同源毒株的攻击,而且对美国、阿根廷、古巴等异源强毒株也具有良好...  (本文共6页) 阅读全文>>