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马传染性贫血病驴白细胞弱毒及其亲本马强毒(L株)基因组序列比较分析以及弱毒感染性分子克隆的构建

马传染性贫血病毒(EIAV,简称马传贫)是反转录病毒科慢病毒属的成员之一,是马传染性贫血病(EIA)的病原体。由于慢病毒给人类和动物的健康造成了严重的威胁,因此慢病毒的免疫预防,尤其是艾滋病的免疫预防成为研究的热点。我国的马传贫驴白细胞弱毒疫苗,是迄今为止世界上唯一投入应用的慢病毒疫苗,该疫苗在我国已成功地控制了马传贫的流行,是研究慢病毒免疫预防非常有价值的动物模型。马传贫驴白细胞弱毒疫苗(DLA-EIAV)是将分离自辽宁省的EIAV L株通过驴体传代,使其毒力明显增强(称为驴强毒,DA-EIAV),然后在驴白细胞培养物上连续传代致弱获得的。在这一过程中,EIAV L株由强毒变为弱毒,用此弱毒疫苗接种动物后不表现临床症状,但可诱导免疫保护。为了揭示我国马传贫弱毒疫苗毒力致弱及免疫保护的分子机制,为人免疫缺陷病毒及其它慢病毒的免疫预防提供借鉴,我们对马传贫驴白细胞弱毒及其亲本马强毒EIAV L株前病毒进行了全基因克隆和序列测定,比  (本文共124页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国农业科学院
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马传染性贫血病毒基因转移载体系统的构建及分析

慢病毒如同其它逆转录病毒,可以将前病毒基因组持久地整合到感染细胞的染色体上并且在感染的细胞和子代细胞中表达病毒基因,可以作为将目的外源基因引入细胞的载体。由于慢病毒除了能够感染分裂状态的细胞外还具有感染非分裂细胞的能力,因而,慢病毒载体备受关注。以HIV-1为基础的慢病毒基因转移载体是目前研究最为透彻的慢病毒载体。尽管已经在增加HIV载体的生物安全性和减少产生具备复制能力的病毒方面做了很多改进,但要应用于人类临床实验仍然存在较大的安全隐患。因此,开发非灵长类慢病毒基因转移载体系统成为当前研究的热点之一。马传染性贫血病毒(Equine Infectius Anemia Virus,EIAV)是一种非灵长类慢病毒,而且是基因组结构最简单的慢病毒。中国EIAV驴白细胞弱毒疫苗株(EIAV-DLA)是目前唯一成功开发并大规模应用的慢病毒疫苗。本研究的目的在于利用我国在马传染性贫血病毒(EIAV)研究上的成果,在EIAV驴白细胞弱毒疫苗株...  (本文共133页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国农业科学院
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马传染性贫血病驴白细胞弱毒感染性分子克隆及其衍生毒的生物学和分子生物学特性分析

为了阐明马传贫驴白细胞弱毒疫苗(DLA-EIAV)致弱及免疫保护的分子机制,给其它慢病毒的免疫预防提供借鉴,本实验室构建了DLA-EIAV感染性分子克隆(命名为pOK8266)并获得其衍生病毒(命名为vOK8226),同时对我国马传染性贫血病毒强弱毒株进行了序列分析。在此基础上,以pOK8226为骨架,构建了马传染性贫血病毒强/弱LTR嵌合毒感染性分子克隆(命名为pOKVltr),并获得了其衍生病毒(命名为vOKVltr)。本研究对vOK8226、vOKVltr和DLA-EIAV进行了动物接种试验,通过对临床和病理组织学变化、各结构蛋白抗体、感染马体内病毒载量的监测以及LTR及env基因在感染马体内的变异规律进行了研究。将7匹EIAV阴性健康马分为4组,第1组(4#和5#马)接5ml×10~(-5)TCID_(50)嵌合毒(pOKVltr),第2组(6#和7#马)接种5ml×10~5TCID_(50)克隆毒(vOK8226),第...  (本文共101页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国农业科学院
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马传染性贫血病驴白细胞弱毒疫苗细胞免疫机理的研究

我国马传染性贫血病驴白细胞弱毒疫苗(DLV)是唯一成功应用的慢病毒疫苗,是慢病毒免疫预防很有希望的动物模型。因此,揭开DLV的免疫机制使其可能成为研究HIV等慢病毒疫苗的免疫模型。本研究采用流式细胞术(FCM)、~3[H]-TDR掺入法、~(51)Cr释放法等方法对健康马、DLV免疫马、EIA强毒感染马、EIA自然感染马外周血中CD4~+和CD8~+T淋巴细胞亚群数量、淋巴细胞转化功能及细胞毒性T淋巴细胞杀伤功能等的动态变化进行了观察。在淋巴细胞亚群水平,探索DLV的细胞免疫机理。同时,采用反转录酶活性实验和流式细胞术相结合的方法初步探索了EIAV体外对马外周血淋巴细胞的感染性。DLV免疫马在免疫期间与免疫前相比,3/4免疫马淋巴细胞总数波动不明显,1/4免疫马淋巴细胞总数显著降低(p<0.05)。所有免疫马CD4~+T淋巴细胞数变化不明显。3/4免疫马CD8~+T淋巴细胞数升高,其中1匹马显著升高(p<0.05);1/4免疫马...  (本文共85页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国农业科学院
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中国马传染性贫血病毒LTR启动子活性及EIAV_(FDD)弱毒株生物学特性研究

我国研制成功的马传染性贫血驴白细胞弱毒(equine infectious anemia virus donkey leukocyteattenuated,EIAV_(DLA))疫苗成功控制了马传染性贫血病在我国的流行。该疫苗具有良好的安全性和有效性,成为研究包括人艾滋病病毒在内的慢病毒疫苗的良好自然动物模型。EIAV弱毒疫苗研制成功的路线是:将一株来源于马体的EIAV强毒(辽毒株、EIAV_L)经过驴体连续传代100余代使病毒毒力增强后获得了驴强毒株(EIAV_D,对马和驴90%致死率),然后将驴强毒株通过驴白细胞体外连续培养驯化120代,使病毒毒力丧失的同时保持了良好的免疫原性,最终培育成功了EIAV驴白细胞弱毒疫苗(EIAV_(DLA))。将驴白细胞弱毒疫苗进一步通过驴胎皮肤细胞继代,又获得比驴白细胞弱毒疫苗免疫保护效果更好的驴胎皮肤细胞(fetal donkey dermal cells,FDD)弱毒疫苗。前病毒DNA基...  (本文共101页) 本文目录 | 阅读全文>>

华中农业大学
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马传染性贫血病病毒的基因变异与生物学特性研究

马传染性贫血病病毒(EIAV),慢病毒属成员,主要引起马属动物慢性、终生感染,以周期性发热、病毒血症、贫血和血小板减少为特征。70年代,EIAV弱毒疫苗通过以下策略成功研制:首先,将马强毒EIAV-L经过驴体体内传代113次,获得了高毒力的驴强毒EIAV-DA;然后,将EIAV-DA经驴白细胞体外传125代,获得弱毒疫苗EIAV-DLA,该疫苗可保护马和驴免受同源和异源的野生型高毒力EIAV的攻击。中国EIAV的弱化过程可以为研究其他慢病毒疫苗提供有益借鉴,然而EIAV-L和EIAV-DLA的分子生物学特性还有待澄清。基于这个原因,本研究中将7匹试验马分别接种EIAV-DLA、vOK8266、vOK8266chltr或者空白对照,之后用EIAV-L对所有试验马进行攻击。vOK8266是EIAV-DLA的感染性分子克隆(命名为pOK8266)的衍生病毒。将pOK8266的5’和3'LTR替换成EIAV-L的5’和3'LTR得到嵌合...  (本文共122页) 本文目录 | 阅读全文>>