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鸡传染性支气管炎病毒JS/95/03和SD/97/01株S1糖蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫原性评价

用RT-PCR法分别扩增了IBV肾型毒株JS/95/03和呼吸型毒株SD/97/01的S1全基因,并克隆到pMD18-T克隆载体中。通过酶切鉴定基因的插入和连接方向,构建了分别含JS/95/03和SD/97/01的S1基因的重组质粒pMDJS95032S1和pMD9701S1。对两个毒株的S1基因测序后与10个参考毒株进行了比较和分析。结果表明,JS/95/03和SD/97/01分别与M41和H120株亲缘关系最近,它们可能是疫苗毒株的变异株;JS/95/03和SD/97/O1的亲缘也较近,两者S1蛋白间仅有23个氨基酸的差异,其中有15个位于前130个氨基酸中。在126位氨基酸附近存在着6个氨基酸的差异(116、117、118、128、129、130位),该区域可能与两毒株的致病性差异有关。根据氨基酸序列对两毒株S1蛋白的二级结构进行了预测,比较后发现一个或极少数氨基酸的差异即可导致S1蛋白二级结构和抗原性的改变。为了构建表达  (本文共112页) 本文目录 | 阅读全文>>

《国际检验医学杂志》2017年15期
国际检验医学杂志

3种酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒前S1及S2抗原的比较

酶联免疫吸附试验(ELISA)由于测定灵敏度高,特异性强,操作简便,试剂性能稳定,易于标准化,易与其他相关技术偶联等特点,已成为目前发展较快的一种免疫测定技术,广泛应用于肿瘤、传染病多种疾病相关免疫指标的检测[1-2]。当前ELISA检测主要有传统手工法和全自动酶免仪器法,临床上使用较广的全自动酶免仪包括Addcare ELISA800全自动酶免仪、TECAN freedom evolyzer全自动酶免分析系统[3-4]。本研究就上述3种常用ELISA检测方式进行比较,现报道如下。1材料与方法1.1标本来源40份血清标本均来自第三军医大学附属新桥医院的就诊患者,平均(42.5±14.5)岁,其中男26例,女14例。1.2仪器与试剂Addcare ELISA800全自动酶免分析仪购自烟台艾德康公司;TECAN freedom evolyzer全自动酶免分析系统购自瑞士帝肯公司;MB580酶标仪购自上海汇松公司;洗板机购自苏州新波公...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国家禽》2017年17期
中国家禽

一株鸡传染性支气管炎病毒的鉴定及S1基因序列分析

本研究对从黑龙江某鸡场分离到的一株疑似代,同样的方法连续传代至E5代。将E1~E5代尿传染性支气管炎病毒进行了鉴定分析,并对其S1囊液置-70℃保存备用。基因进行了序列测定分析,构建了进化树,为进一1.2.2致鸡胚矮小化试验步研究奠定了基础。将E5代鸡胚尿囊液接种9日胚龄SPF鸡胚1材料与方法10个,0.1 m L/个,同时设生理盐水对照组,37℃孵1.1材料育144 h,弃去24 h死亡鸡胚,观察鸡胚发育及病疑似传染性支气管炎病毒株(编号为1515)分变情况。离自黑龙江某鸡场发病鸡“花斑肾”病料;新城疫1.2.3病毒尿囊液对鸡红细胞凝集试验病毒La Sota株、A型产气荚膜梭菌由中国兽医微取A型产气荚膜梭菌菌株接种适宜培养基,生物菌种保藏管理中心提供。9日胚龄SPF鸡胚、收获培养液离心后取上清过滤即为A型产气荚膜21日龄SPF鸡,购自北京梅里亚维通实验动物技梭菌滤液。取E5代病毒尿囊液,分为2份:1份术有限公司。病毒基因组DN...  (本文共3页) 阅读全文>>

《浙江大学学报(农业与生命科学版)》2001年03期
浙江大学学报(农业与生命科学版)

禽传染性支气管炎病毒S1基因植物表达载体的构建

禽传染性支气管炎病毒 (Avian InfectiousBranchitis Virus,IBV)属冠状病毒科冠状病毒属 ,因 IBV抗原性的漂变可引起呼吸型、肾型、腺胃型、肌肉型等不同病变类型的鸡传染性支气管炎 ,对养禽业危害极大 ,是最重要的传染病之一[1] .该病毒属单股正链 RNA病毒 ,具有 S、M和 N三种结构蛋白 . S蛋白是由 S1和 S2组成的寡聚蛋白 ,S1和 S2均为糖蛋白多肽 ,其分子量分别为 90 k D和 84k D,用酶去除寡糖后S1和 S2的分子量分别为 6 4k D和 6 1 k D[2 ,3] .Cavanagh[4 ]确证 S1蛋白是宿主的主要保护性抗原 ,能诱导机体产生中和抗体和血凝抑制抗体 ,继而使机体得到保护 ,在免疫学方面起着重要作用的 S1基因一直是世界各国研究该病毒的热点 .自 2 0世纪 90年代以来 ,国内外对 IBV的研究取得了长足进展 ,已有关于 IBV S1基因在昆虫杆...  (本文共4页) 阅读全文>>

《兽医导刊》2017年21期
兽医导刊

鸡传染性支气管炎病毒广东分离株S1基因的克隆与序列分析

鸡传染性支气管炎 (infectious bronchitis,IB)是由鸡传染性支气管炎病毒 (infectious bronchitis virus)引起的一种急性、高度接触性传染病,主要影响呼吸系统、消化系统、泌尿生殖系统等。各种日龄的鸡都会感染IBV,主要引起呼吸困难、肾炎、产蛋量和蛋品质的下降,IBV 还可侵害肾脏、肠道、腺胃、肌肉等组织,给养禽业带来经济上的损失。IBV自身有结构特殊性,并且RNA聚合酶具有不完善的纠错机制能力,使得病毒基因组在复制的过程易突变和重组频率增高,能够产生许多血清型,目前已报道的血清型已有30多种,在我国主要以Mass,T,Gray 和 Holte 株等为主。IBV基因组为线性单股正链RNA,全长约27.6 kb,编码小膜蛋白(E)、膜蛋白(M)、核衣壳蛋白(N)和纤突蛋白(S)4 种主要结构蛋白。当S蛋白与宿主细胞膜上的病毒受体结合,并通过宿主细胞的蛋白酶裂解到S1和S2时,病毒包膜可与...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国兽医学报》2007年06期
中国兽医学报

禽传染性支气管炎病毒S1基因在毕赤酵母中的表达

禽传染性支气管炎是由禽传染性支气管炎病毒(In fectious bronch itis v irus,IBV)引起的鸡的一种急性、高度接触性的传染病。IBV的基因组为单股正链RNA病毒,包括主要编码4种结构蛋白:纤突蛋白(S)、膜蛋白(M)、核蛋白(N)、小囊膜蛋白(sE)。S蛋白构成了IBV的最表层纤状突起,包括2种糖多肽S1和S2。S1蛋白是IBV最主要免疫原基因,其作用主要表现为:(1)刺激机体产生特异性中和抗体和血凝抑制抗体,决定病毒的组织嗜性;(2)在病毒吸附细胞过程中发挥重要作用;(3)在血清学分类上起决定性作用。已有在大肠杆菌、昆虫杆状病毒、马铃薯、毕赤酵母pP ICZA中表达IBV S1蛋白的报导,但是还未见IBV S1蛋白利用分泌型表达载体pP IC 9K在毕赤酵母中表达的报导。毕赤酵母表达系统是一类能以甲醇为唯一碳源和能量来源的酵母菌,它和其他真核、原核表达系统相比,具有高表达、高稳定、高密度发酵、适度糖基...  (本文共4页) 阅读全文>>