分享到:

鸡传染性支气管炎病毒JS/95/03和SD/97/01株S1糖蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫原性评价

用RT-PCR法分别扩增了IBV肾型毒株JS/95/03和呼吸型毒株SD/97/01的S1全基因,并克隆到pMD18-T克隆载体中。通过酶切鉴定基因的插入和连接方向,构建了分别含JS/95/03和SD/97/01的S1基因的重组质粒pMDJS95032S1和pMD9701S1。对两个毒株的S1基因测序后与10个参考毒株进行了比较和分析。结果表明,JS/95/03和SD/97/01分别与M41和H120株亲缘关系最近,它们可能是疫苗毒株的变异株;JS/95/03和SD/97/O1的亲缘也较近,两者S1蛋白间仅有23个氨基酸的差异,其中有15个位于前130个氨基酸中。在126位氨基酸附近存在着6个氨基酸的差异(116、117、118、128、129、130位),该区域可能与两毒株的致病性差异有关。根据氨基酸序列对两毒株S1蛋白的二级结构进行了预测,比较后发现一个或极少数氨基酸的差异即可导致S1蛋白二级结构和抗原性的改变。为了构建表达  (本文共112页) 本文目录 | 阅读全文>>

四川农业大学
四川农业大学

四川部分地区鸡传染性支气管炎病毒S1基因的遗传进化分析和原核表达

鸡传染性支气管炎(IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(IBV)引起的一种急性高度接触性传染病,是危害世界养禽业的主要疫病,每年给养鸡业造成严重的损失。为了掌握四川地区近年来流行的IBV的遗传特点,本文在2008年-2010年期间进行了四川部分地区IBV的分离鉴定,共分离鉴定出19株IBV。对其S1基因进行克隆测序,并与GenBank上公布的其他参考毒株的相应序列进行了比较分析,从分子水平上探讨四川省IBV的流行和变异规律。本文还对主要流行代表株的S1高变区和高抗原性区域进行原核表达。主要内容有:采集四川主要养鸡地区(包括成都、眉山、乐山等地)鸡场疑似IB发病鸡的肺、肾等组织,通过9-11日龄非免疫鸡胚进行病毒的分离和传代,并对分离毒株进行HA试验、致鸡胚矮小试验和RT-PCR鉴定。结果表明分离出了19株IBV病毒。参考GenBank中已发表的IBV序列,针对S1基因设计了一对特异性引物,RT-PCR方法扩增到长度约为1.73 kb包...  (本文共68页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国农业大学
中国农业大学

鸡传染性支气管炎病毒S1基因和E基因的序列分析以及E基因的原核表达

鸡传染性支气管炎是由冠状病毒属传染性支气管炎病毒(Avian infectious bronchitis virus,简称IBV)引起的高度接触性传染病。此病在世界各地均有发生,给全球养禽业造成巨大的经济损失。传染性支气管炎病毒血清型较多且抗原易发生变异,给该病的诊断和防治造成了困难。S1蛋白是IBV主要的免疫原蛋白,能介导细胞融合,刺激机体产生病毒中和抗体和血凝抑制抗体,S1蛋白基因具有较强的型特异性,并且很容易发生变异,使IBV不断的出现新的血清型。另一个结构蛋白为小囊膜蛋白(E蛋白),它在IBV病毒的复制、病毒粒子的组装、释放等过程中起到重要作用。为了解我国传支病毒流行与变异情况,探索IBV病毒E基因在大肠杆菌原核系统高效表达的方法及其蛋白的免疫生物学特性,进行了本研究。分别使用pGM-T-easy载体和pGEM-T-easy载体克隆了5个IBV中国地方分离株的S1基因和7个IBV中国地方分离株的E基因并进行了测序。应用生...  (本文共77页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国病毒学》1999年03期
中国病毒学

鸡传染性支气管炎病毒S1基因在昆虫细胞中表达水平初探

鸡传染性支气管炎病毒(InfectiousBronchitisVirus,IBV)是冠状病毒科(Coronaviridae)的主要成员之一。IBV的多血清型以及变异株的不断出现,使传统的IB疫苗预防效果往往不够理想[1]。IBV基因工程疫苗的研制是改进传统IB疫苗的一个重要方向。我们已经将IBV的主要免疫原基因S1克隆到形成多角体的杆状病毒表达载体并构建出两个表达质粒:pSXIVVI+X3S1.Holte和pSXIVVI+X3/4S1.Holte[2],S1基因在这两个质粒中的翻译起始位点及起始位点的周围环境不同[2],将影响S1基因的表达水平。我们以这一点为基础,对它们在昆虫细胞中的表达情况进行了研究,并初步探讨外源基因与ATG附近序列对翻译的影响。1 材料与方法1.1 材料含IBVHolte株S1基因的杆状病毒重组转移质粒pSXIVVI+X3S1.Holte(含先导序列)和pSXIVVI+X3/4S1.Holte(...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国兽医学报》1999年05期
中国兽医学报

鸡传染性支气管炎病毒S1基因在昆虫细胞中的高效表达

S1基因是鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的重要免疫原基因,它所编码的S1蛋白能刺激机体产生血凝抑制抗体和病毒中和抗体[1~5]。为此,用核酸重组方法研制IBV亚单位疫苗将具有一定的应用前景,它可避免因使用弱毒疫苗而与野生IBV毒株可能发生的重组变异。Tomley等[6]用IBVBeaudette株S基因重组到痘苗病毒WR株表达的多肽免疫小鼠可产生针对IBV纤突抗原的抗体,并能抑制IBV对支气管纤毛细胞的感染。杆状病毒表达系统表达某些家禽病毒基因已有成功的报道[7~10]。本研究利用这一系统能高效表达外源基因,并能对基因产物在翻译后加工等优点,将IBVHolte株S1基因cDNA插入到杆状病毒基因组中,利用昆虫细胞进行了高效表达。1 材料与方法11 质粒、菌株和病毒 含IBVHolte株S1基因的重组质粒pUC18S1.Holte,由本室构建并经序列分析鉴定[11],S1cDNA长1758bp。杆状病  收稿日期:19981...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国兽医学报》1970年60期
中国兽医学报

鸡传染性支气管炎病毒S1基因在昆虫细胞中的表达

鸡传染性支气管炎病毒S1基因在昆虫细胞中的表达*廖明辛朝安王林川(华南农业大学动物医学系,广州510642)摘要将含有传染性支气管炎病毒(IBV)广东地方分离株D41的S1基因cDNA(从ATG到S前体蛋白裂解位点)的片段克隆到具有多角体启动子(PXIV)和人工合成启动子(Psyn)的杆状病毒转移载体质粒pSX-IVVI+X3中,构建了重组转基因载体质粒pSXIVVI+X3-S1.D41。用该重组转移质粒与无包涵体的粉纹夜蛾核型多角体病毒TnNPV-SVI-GDNA(occ-,gal+)共转染草地夜蛾(Sf9)细胞,筛选并纯化出既能表达S1基因又能形成多角体的重组病毒TnNPV-IBVS1-occ+(occ+,gal-)。通过间接ELISA和Western-blot等方法在感染了重组病毒的Sf9细胞中成功地检测到分子量约62000的S1基因表达产物。虽然该重组S1糖蛋白可能由于N-糖基化不完全而分子量小于天然蛋白,但它可以像正常...  (本文共5页) 阅读全文>>