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传染性支气管炎病毒青岛腺胃分离株(SD/97/02)全结构蛋白基因的克隆和序列分析

实验选取了一株分离自有腺胃病变的较为特殊的传染性支气管炎病毒(IBVSD/97/02株)作为基本材料,对该毒株的生物学特性和分子生物学进行了研究。利用RT-PCR技术克隆了此毒株的所有结构蛋白(S1、S2、M、N)基因,并对这些基因的序列进行分析。内容包括:1.将病毒通过9-11日龄鸡胚盲传5-6代,用动物回归和免疫保护试验进行了毒株的基本特性的研究,用气管环组织培养对病毒进行理化特征测定、毒价测定与中和试验,初步证明目前流行的以腺胃肿大为主要特征的传染病的病原是冠状病毒,由于该病引起腺胃的特征性病理变化,所以将该病暂定名为腺胃型传染性支气管炎,并将该青岛分离株定为SD/97/02株。2 参考Genbank发表的IBV S1纤突蛋白基因序列,自行设计合成了一对引物,对传染性支气管炎病毒青岛腺胃分离株(SD/97/02)RNA进行RT-PCR扩增。产物经琼脂糖凝胶电泳分析,呈现一条1657 bp的条带,将其克隆入pMD18-T载体  (本文共113页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国兽医学报》2002年02期
中国兽医学报

传染性支气管炎病毒青岛腺胃分离株(SD/97/02)基质蛋白、5a、5b蛋白基因的克隆和序列分析

传染性支气管炎病毒 (IBV)基因组 RNA共编码 3种结构蛋白 :纤突蛋白 (S,S1+S2 )、核衣壳蛋白 (N)及基质蛋白(M,又叫膜蛋白 ) [1 ] ,另外还编码 2个 RNA聚合酶 (F1+F2 )及一些功能不明的小蛋白 (3a、3b、3c、5 a、5 b)。 S蛋白特别是S1亚单位能诱导机体产生中和抗体 [2 ] ;核衣壳蛋白直接与核酸结合 ,被认为与细胞免疫有关 ;基质蛋白约占病毒总蛋白的40 %左右 ,由 2 2 4~ 2 2 5个氨基酸组成 ,氨基酸多为疏水性。基质蛋白与病毒的复制有关 ,可在细胞的粗面内质网内聚集。5 a、5 b蛋白为 m RNA5所编码的非结构蛋白 ,功能尚不很清楚。IBV腺胃株为近年来我国新发现的毒株 ,因其产生不同于常规 IBV的病变而备受关注 ,克隆其结构蛋白和非结构蛋白 (5 a、5 b)基因 ,可能会从中发现 IBV变异的规律 ,而将其基因进行表达来研究蛋白质的功能 ,对了解病毒...  (本文共3页) 阅读全文>>

《南京农业大学学报》2000年03期
南京农业大学学报

传染性支气管炎病毒腺胃青岛株(SD/97/02)核衣壳蛋白基因的克隆与鉴定

传染性支气管炎病毒 (IBV)可引起鸡的急性、高度接触性传染病[1 ] 。核衣壳蛋白 (N蛋白 )是IBV的主要结构蛋白之一 ,为一种磷酸化蛋白 ,在胞浆基质合成。最近几年的研究发现 ,核衣壳蛋白与激发机体的细胞免疫有关[2 ] 。现普遍认为 ,核衣壳蛋白基因比较保守 ,因此其所诱发的Tc细胞免疫可能具有较广的适用性并在诱发不同血清型的病毒的保护性免疫中起作用。但是核衣壳蛋白基因在不同毒株之间仍有一些变异 ,而且这种变异对各株T细胞杂交瘤分泌上清的反应性不同[3] 。这说明核衣壳蛋白基因的变异对其细胞免疫性是有所不同的。腺胃型传染性支气管炎是一种新病 ,1 995年以来在中国江苏[4] 、山东[5] 、河南[6] 等地均有发生 ,现初步确定它由变异型IBV引起。鉴于此病有较广的流行区域 ,又为一种新的表现型 ,因此有必要对其病原作深入的研究 ,从基因水平探讨其致病、组织嗜性、分子变异的机制。而腺胃型IBV作为一种较特殊、较有代表...  (本文共3页) 阅读全文>>