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猪链球菌2型毒力相关蛋白的检测及其基因片段的克隆与表达

136kD的溶菌酶释放蛋白(muraminidase-releasedprotein,MRP)和110kD的胞外蛋白因子(extracellular proteinfactor,EF)是猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2)的毒力相关蛋白。提取猪链球菌2型江苏分离株HA9801的胞壁蛋白和胞外蛋白,分别进行SDS-PAGE,切割相对分子量为136kD的MRP和110kD的EF,按常规方法制备其抗体。用此抗体分别以免疫转印和ELISA法检测猪源链球菌18株国内分离株、1株德国分离株及1株猪链球菌2型人分离株的毒力相关蛋白。提取20株待检菌株的胞壁和胞外蛋白,经测SDS-PAGE,与HA9801株的MRP和EF的抗体作免疫转印。结果显示,11株MRP阳性,10株EF及EF~*阳性,MRP及EF的分布存在4种表型:MRP~+EF~+(8/20),MRP~+EF~*(1/20),MRP~+EF~-(1/20)  (本文共114页) 本文目录 | 阅读全文>>

南京农业大学
南京农业大学

猪链球菌2型在模型动物豚鼠体内的动态分布及基因免疫

用豚鼠建立了猪链球菌2型(Streptococcus suis Type 2)引致脑炎和败血症的动物模型,研究了猪链球菌2型在动物模型体内的动态分布。并将该菌毒力相关的溶菌酶释放蛋白基因(mrp)克隆到真核表达载体构建了真核表达质粒,并研究其对豚鼠的免疫效果。1 选用对猪具有致病性的猪链球菌2型江苏分离株HA9801感染豚鼠,引致脑炎及败血症,建立了动物模型。结果显示16~24日龄的豚鼠较易感,最佳感染途径是皮下注射,鼻腔、腹腔次之。感染豚鼠表现出典型脑炎的临床症状及病理变化。经重复试验检测了该菌株对豚鼠的LD_(50),从感染死亡豚鼠体内包括脑脊液、大脑、血液及各实质器官均可分离出该病原菌,与仔猪自然感染情况相似。该动物模型的建立,为进一步探究猪链球菌2型感染的体内动态分布、感染机制、毒力因子及免疫应答奠定了基础。2 用猪链球菌2型江苏分离株HA9801,皮下或鼻腔接种豚鼠,检测体内动态分布。结果显示:皮下接种后,该菌最早可于...  (本文共120页) 本文目录 | 阅读全文>>

《上海畜牧兽医通讯》2017年05期
上海畜牧兽医通讯

分光光度法测定猪链球菌菌悬液浓度

*为通信作者课题名称:上海地区猪链球菌耐药基因DHPLC检测方法的建立与序列分析[沪农青字(2016)第2-3号],上海地区主要动物病原微生物种质资源保存利用[沪农科攻字(2014)第7-3-3号]在细菌的耐药性检测和日常保存工作中常需要对细菌菌液的浓度进行测定,目前常规的测定细菌菌液浓度的方法主要有比浊法、显微镜计数法和平皿计数法,但该方法在日常检测工作中往往存在一定的不便利,例如比浊法所需的麦氏比浊仪在常规实验室中并不普遍,标准比浊管在日常使用中也会由于不同细菌的菌体大小差异,其浊度与菌液浓度的关系存在较大偏差。显微镜计数和平皿计数法虽然准确性较比浊法要高,但此两种方法均存在费时费力、操作不便、耗时长等缺点,因此在日常检测中,尤其是在进行药敏检测等对菌液浓度具有较高要求的试验中,很难选出适合的方法,不利于工作的开展。根据多位研究者的研究发现[1~7],不同细菌在一定浓度范围内,与紫外光的吸光度呈现良好的线性关系。为此,本文选...  (本文共2页) 阅读全文>>

《宁波农业科技》2016年01期
宁波农业科技

荧光定量PCR检测猪链球菌2型主要毒力因子方法的建立

猪链球菌是一种重要的人畜共患病原菌,猪链球菌可以分为33个血清型,其中以猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)致病力最强,也是全世界范围内引起人类疾病的最常见的致病血清型[1-2]。SS2可引发猪脑膜炎、关节炎、心内膜炎、败血症、肺炎等,各年龄段猪均可感染猪链球菌病。SS2不仅是各国养猪业发展的一种重要疫病,同时,该病还可感染养猪相关从业人员,引起细菌性败血症、休克、脑膜炎和永久性的听力丧失,甚至死亡,给养猪业及公共卫生构成严重威胁[3]。SS2在很多国家均受到广泛重视,对其研究重要集中在毒力相关因子(virulence correlated fac-ters VAFs)的研究上,研究表明VAFs与猪链球菌引起的病症密切相关[4]。其中荚膜多糖(CPS)是目前已确定的猪链球菌2型主要的细菌毒力相关因子,具有抗吞噬的作用[5-6],因其具有很高的种特异性,CPS2J常被作为检测猪链球菌2型的靶基...  (本文共5页) 阅读全文>>

《浙江检验医学》2007年03期
浙江检验医学

人猪链球菌2型感染及实验室诊断研究进展

猪链球菌(Streptococcus suis)是革兰阳性兼性厌氧的球菌,是一种重要的人兽共患病原菌,可引起猪脑膜炎、关节炎、心内膜炎、败血症、肺炎等,并可感染特定人群并致死。人感染猪链球菌是一种新发传染病,我国将其定为Ⅱ类动物疫病。本病多发生在屠夫、养殖厂工人、生肉加工和销售人员中,主要表现为败血症、中毒性休克综合症和脑膜炎等,预后凶险,病死率高,不仅给养猪业造成很大威胁,而且危害着公共卫生安全。2005年6月至8月在四川省资阳、内江等部分地区相继发生人感染猪链球菌病疫情,此次重大的突发公共卫生事件,引起了国内外广泛关注,其疫情元凶为猪链球菌2型。下面简要介绍人猪链球菌2型感染及实验室诊断研究进展。1流行病学猪链球菌(Streptococcus suis)是一种能够感染猪和人的病原体,通常存在于健康猪的鼻腔和扁桃体内,也存在于其它动物体内。根据其表面多糖抗原分型,它可分为35个血清型(1-34和1/2),毒力最强的是1型。尽管...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国兽医科学》2017年08期
中国兽医科学

猪链球菌2型对红细胞的黏附及溶血作用

猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)为一种主要的人兽共患病原菌,可引起人和猪的败血症、脑膜炎、肺炎、多器官功能衰竭综合征及突发性死亡[1-2]。1998年和2005年先后在我国江苏和四川等地暴发[3],造成多人感染和死亡,不仅对养猪业造成了严重的经济损失,同时严重威胁到公共卫生安全,引起国内外学者的广泛关注[4-6]。黏附和溶血作为SS2的重要毒力作用,目前已证实SS2存在多种具有黏附作用的毒力因子[7-9],如溶菌酶释放蛋白(muramidase released protein,MRP)[10]、荚膜多糖(capsular polysaccharide,CPS)[11-13]、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-phosphate dehydrogenase,GAPDH)[14]、纤维蛋白结合蛋白(fibrinogen bindingprotein,FBPS)[15-1...  (本文共7页) 阅读全文>>