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TGF-β类生长因子基因的克隆表达及在基因治疗中的应用

TGF-β类生长因子是一类具有广泛生物学活性和重要临床应用价值的细胞因子,包括多种蛋白因子,它们在氨基酸结构上具有不同程度的同源性,共同构成了TGF-β超家族,包括BMPs、活化素、抑制素和缪勒氏物质等。近年来,人们对TGF-β类生长因子与骨修复的关系进行了广泛的研究,证明TGF-β类生长因子能通过化学趋化作用使间充质干细胞聚集,促进其增殖并向成骨方向分化,从而起到促进骨形成的作用。在众多的TGF-β类生长因子中,TGF-β1、BMP2和BMP7因其较强的成骨能力而受到密切的关注。基因工程重组蛋白的应用和基因治疗是TGF-β类生长因子应用中的两种重要的策略。本研究从TGF-β1、BMP2和BMP7基因的克隆和鉴定入手,利用基因工程的方法,在大肠杆菌中表达TGF-β1,制备了具有生物活性的TGF-β1,同时构建了BMP2和BMP7真核表达质粒以及TGF-β1、BMP2和BMP7的重组腺病毒,体外分离培养了骨髓间充质干细胞,通过间接  (本文共91页) 本文目录 | 阅读全文>>

天津医科大学
天津医科大学

人TGF-βⅡ型受体胞外区蛋白在大肠杆菌中的表达

目的:转化生长因子β1(TGFβ1)在肿瘤的生长、分化、细胞凋亡、细胞外间质形成、肿瘤血管形成及机体抗肿瘤免疫反应等方面发挥重要的调节作用。TGFβ1是正常上皮细胞生长抑制因子,但多数肿瘤细胞抵抗其诱导的生长抑制作用,并表现出有利于肿瘤进展的特性。这主要是由于TGF-β对免疫的抑制作用等所致。因此,抑制TGF-β的功能是机体增强免疫系统清除肿瘤细胞的关键点。国外已有许多研究方法去尝试阻断TGF-β的抑制免疫系统的功能。其中有利用TGF-β的抗体去中和TGF-β,或者利用反义核酸技术封闭TGF-β,但这些方法效果不佳。如果能够抑制TGFβ的分泌并阻断其免疫抑制作用,将会利于控制肿瘤的发展,提高肿瘤的治疗效果。表达的可溶性TGF-β Ⅱ型受体可以像海绵一样吸收肿瘤细胞过表达的TGF-β而不产生信号传导,因此可以有效的封阻TGF-β的生物学作用,打破肿瘤产生的免疫抑制。材料与方法:根据TβRⅡ胞外区cDNA序列,合成引物。以胚肝RNA...  (本文共89页) 本文目录 | 阅读全文>>

福建医科大学
福建医科大学

联合药物预处理及TGF-β1转基因治疗对豚鼠—大鼠非协调性异种心脏移植物的影响

采用改良Heron法颈部袖套血管吻合法建立豚鼠—SD大鼠非协调性异种心脏移植模型,应用适应剂量的中华眼镜蛇毒因子清除受体的补体C_3,可克服异种超急性排斥反应,建立异种急性血管性排斥反应模型;联合应用不同作用机理和效应细胞不同的药物环孢素A、来氟米特和银杏叶提取物Ginaton预处理移植受体,可对抗异种移植急性血管性排斥反应,延长异种心脏移植物的存活时间,其机理与增加保护性基因表达、减少细胞凋亡、减轻免疫损害有关;在供心冷保存期间经冠脉缓慢灌注腺病毒表达载体以介导多功能免疫抑制性细胞因子——转化生长因子基因转移治疗,外源性小鼠TGF-β1广泛表达减少炎症细胞浸润、减轻免疫损害,明显延长异种移植物存活时间;应用基因转移技术在移植物局部表达抑制性细胞因子可成为异种移植免疫抑制治疗的一种新方法。  (本文共98页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国医科大学
中国医科大学

TGF-β信号系统在前列腺癌发生、发展中的作用

目的转化生长因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β)是一个庞大的家族,由大量结构相关的多肽生长因子组成,包括原形的TGF-β,激活素(activin)和骨形态发生蛋白(BMP)等三大类40多个成员。TGF-β超家族对调节细胞的增殖、分化、基质形成、凋亡和肿瘤发生等过程中起重要作用。TGF-β具有丝氨酸/苏氨酸活性的Ⅰ型和Ⅱ型受体共同介导TGF-β超家族成员跨膜信号传导。Smads家族是TGF-β信号和细胞内的介导者,它们可将TGF-β信号直接从细胞膜导入细胞核内。受体激活的Smads被特异性的细胞表面受体磷酸化后与通用介导分子Smad4相互作用形成异源三聚体,转移到细胞核内并激活靶基因的转录。在这一信号系统中无论是TGF-β的表达异常或缺失,还是BMPs和Smads的改变,都将影响细胞的最终转录活性,影响生长、发育、甚至肿瘤形成。雄激素受体(androgen receptor,AR)属核受...  (本文共78页) 本文目录 | 阅读全文>>

复旦大学
复旦大学

甘草酸对大鼠肝星状细胞TGF-β/smad信号传导通路的影响

背景:肝纤维化是多种慢性肝病的共同病理基础。肝纤维化发展的各个时期,肝星状细胞的活化和细胞外基质合成与降解的失衡是重要病理机制。其中转化生长因子β_1(TGF-β_1)起了关键作用。TGF-β信号通过跨膜丝氨酸/苏氨酸受体激酶传递入核,胞浆内进化保守的smad蛋白家族起了重要的转导作用。它们主要分为3类:受体调控型smads(R-smads)可直接与活化的Ⅰ型受体结合而磷酸化;共同介导型smads(Co-smads)是必需的中转分子,当R-smads磷酸化并与之形成寡聚体后可转位入核调控靶基因转录;抑制型smads(Ⅰ-smads)是TGF-β信号通路的负反馈调节。其中Smad2、3、4、7参与了信号转导。甘草酸是目前广泛应用于临床的有效的慢性肝病治疗药物。它可能通过诱导干扰素α,抑制白介素6和肿瘤坏死因子表达,诱生前列腺素E,抑制磷脂酶A2的活性而起作用的。既往研究提示甘草酸可能通过干预TGF-B/smad信号通路来发挥抗纤维...  (本文共104页) 本文目录 | 阅读全文>>

华中科技大学
华中科技大学

转染TGF-β基因的未成熟树突状细胞诱导心脏移植免疫耐受的实验研究

第一部分小鼠颈部异位心脏移植模型的建立和两种手术方法的比较目的分别用套管法和缝合法构建小鼠颈部异位心脏移植模型,比较两者的优劣性,并为下一步进行心脏移植免疫学研究奠定基础。方法实验分同种异体移植组(cardiac allograft,CaA)(n=39)和同系移植组(cardiac isograft,CaI)(n=25),同种异体移植用缝合法吻合,在杂交系昆明小鼠间进行;同系移植用套管法吻合,在近交系BALB/C小鼠间进行。正式手术64次。用硬膜外麻醉导管拉制成血管套管用于术中。手术在10倍手术显微镜下单人操作;供受体交替手术,套管法先制作受体的动脉和静脉套管,缝合法只需暴露好动静脉即可,然后切取供心,最后分别用Cuff技术和缝合技术将受体颈总动脉(cervical common artery,CMA)和颈外静脉(external jugular vein,EJV)与供心升主动脉和肺动脉吻合。结果分别行正式实验39次和25次,术...  (本文共105页) 本文目录 | 阅读全文>>