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HPO-205与EDAG基因的克隆与功能研究

哺乳动物新生肝及胚胎肝中存在特异刺激肝细胞增殖的细胞活性因子。1994年Hagiya等报道从新生鼠肝中分离出肝再生增强因子(augmenter of liver regeneration,ALR),并完成其分子克隆。Hagiya等报道的ALR mRNA为1.2 kb,编码125个氨基酸组成,分子量约为15 kD的蛋白质,具有刺激肝细胞增殖的活性。随后一些研究发现在鼠肝组织中用Western blot可以检测到2.3-3.0 kD的阳性区带,并认为这可能与ALR具有同源二聚体结构有关。近来有研究发现,ALR实际上存在1.3 kb和2.7 kb两种转录形式,提示可能存在由不同翻译起始位点致不同翻译产物的可能性。1996年我国学者杨晓明等率先克隆出ALR的人类同源分子-肝细胞生成素(HPO)。人HPO由125个氨基酸组成,分子量约1×5 kD。新近,多个实验室报道了不同的人HPO/ALR/ERV1 mRNA序列,分析这些序列我们发现这  (本文共105页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国生物化学与分子生物学报》2014年06期
中国生物化学与分子生物学报

敲低EDAG抑制乳头状甲状腺癌细胞的增殖

甲状腺癌是常见的内分泌恶性肿瘤[1],近年的发病率逐年升高,且已占据美国女性癌症发生率的第5位[2].甲状腺癌通常可分为占发病率80%的乳头状甲状腺癌,10%~20%的滤泡状甲状腺癌,6%~8%的髓样甲状腺癌和高致死未分化甲状腺癌[3].虽然多发的乳头状甲状腺癌预后较好,但仍具有转移的潜力.因此,评估预后和监测乳头状甲状腺癌已成为1个重要课题[4].红细胞分化相关基因(erythroid differentiationassociated gene,EDAG)蛋白是由Hemgn基因编码的含484个氨基酸的核蛋白,表达于造血前体细胞.对EDAG表达谱的研究表明,EDAG在胚胎期的造血器官肝组织中表达[5].随着造血细胞的发育,其表达逐渐下调,最后在成人骨髓未成熟细胞(CD34+)中表达[6].本室的前期研究提示,利用dot印迹检测不同肿瘤组织中EDAG mRNA的表达谱发现,EDAG仅表达在淋巴瘤、甲状腺肿瘤以及白血病细胞中[7]...  (本文共8页) 阅读全文>>

《白血病.淋巴瘤》2005年04期
白血病.淋巴瘤

EDAG在白血病细胞系K562中的细胞内自激因子作用

0引言20世纪80年代初提出的肿瘤细胞自律性生长的自激因子(autocrine)学说已被接受并广泛应用。可是有些肿瘤和白血病细胞没有明显的自分泌细胞因子,90年代初有人提出细胞内自激因子(intracrine)的假设,至今报道的实验证据不多,限于少数核内表达的细胞因子。我们实验室也发现细胞内,尤其是核内异型巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)或其受体可以起细胞内自激因子作用[1,2]。最近我们注意到2001年发现的造血相关核蛋白EDAG(em bryonic develop associated gene)在急性白血病患者高表达,并与治疗效果相关[3,4]。我们将EDAG转染人白血病细胞系K562,可明显增强其增生能力,可能起细胞内自激因子作用。1材料与方法1.1试剂质粒载体:pIRES2-EGFP真核表达载体购自Clontech公司。带有EDAG基因的pTARGET载体由我室以前构建。Trizol总RNA分离试剂盒、M M L-...  (本文共4页) 阅读全文>>

安徽医科大学
安徽医科大学

基于EDAG基因的抗白血病活性化合物筛选

目的:建立基于EDAG(红系发育相关基因erythoid develop associated gene)转录活性的新的小分子化合物体外筛选模型,并利用该模型筛选小分子化合物库,期望能快速有效寻找具有抗白血病潜能的先导分子。方法:利用荧光素酶报道基因的实验方法,将EDAG的转录激活活性量化,建立大规模筛选活性小分子化合物的模型,筛选小分子化合物库(约1000个)。利用四氮唑MTS比色法,3H-TdR掺入实验,流式细胞术检测筛选到的活性化合物对高表达内源性EDAG的白血病细胞增殖、凋亡、分化的影响;应用信号转导途径的特异性抑制剂(U0126、CalphostinC、LY294002)检测化合物对EDAG荧光素酶报道基因系统的影响,并用Western blot进一步验证,从而对获得的候选活性化合物的机制进行初步探讨。结果:成功构建了pM-EDAG表达载体,建立了高通量筛选模型,应用该模型筛选获得候选活性化合物2G2和2F10。其中2...  (本文共61页) 本文目录 | 阅读全文>>

《吉林医药学院学报》2005年04期
吉林医药学院学报

诱导K562细胞分化对EDAG基因表达的影响

EDAG(embryonic develop associated gene)是军事医学科学院放射医学研究所杨晓明实验室用RDA技术建立的4月龄人胎肝组织与成年肝组织的差异表达基因EST文库中发的一株未注册序列,该基因mRNA约212kb,编码由309个氨基酸组成的蛋白质,经检索与GeneBank注册序列无同源序列,已在GeneBank注册(注册号bankit316865AF228713),命名为EDAG。该基因在多种人胚胎组织、成人骨髓CD34+细胞和白血病患者外周血中高表达,同时ED-AG基因在正常人外周血中不表达,推测该基因可能与造血调控有关[1]。肿瘤的诱导分化是目前临床及基础研究的热门课题,已发现大多数肿瘤尤其是血液系统肿瘤可被诱导向正常细胞转化,但分化的机制却不明了。本研究采用高表达EDAG基因的K562细胞[2],分别用Hemin和PMA诱导该细胞分化,观察EDAG基因是否与红系分化、增殖相关及在红白血病细胞诱导分...  (本文共3页) 阅读全文>>

中国协和医科大学
中国协和医科大学

胚胎发育相关基因-EDAG的诱导表达及蛋白纯化

胚胎发育相关基因(Embryonic Develop Associated Gene,EDAG)是新近发现的造血相关基因,该基因定位于染色体9q22,是从4月龄人胚胎组织与成年肝组织的差异基因ETS库中分离得到的。EDAG基因在人体内的表达具有时空依赖性:在造血活跃的组织如胎肝、成人骨髓中高表达,同时也高表达于CD34~+细胞及人白血病细胞系K562中。研究表明EDAG具有恶性转化活性,与维持细胞的未分化状态有关。最近的转基因小鼠研究表明,在小鼠造血细胞中过表达EDAG可导致造血干细胞增殖分化紊乱。突出表现在髓系造血增强,淋巴系造血抑制,并出现典型的髓系增生综合症,提示EDAG是一种参与造血组织发育与分化调控的重要基因。迄今为止,EDAG调控造血细胞增殖、分化及凋亡的分子机制尚不明确。鉴于EDAG是一种新发现的基因,目前既无商品化的蛋白亦无抗体用于其蛋白水平的研究。我们成功的构建了带有His标签的pET22b-EDAG及pET2...  (本文共78页) 本文目录 | 阅读全文>>