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外源Wtp53表达对人肺癌细胞药物敏感性影响及相关基因克隆

目的 了解外源野生型P53(wtp53)基因表达对人大细胞肺癌801-D细胞对化疗敏感性影响。克隆wtp53影响801-D细胞顺铂敏感性的相关基因。方法 脂质体介导构建的含wtp53基因载体转染801-D细胞经PCR和流式细胞仪(FACS)分析等检测wtp53有效转染及表达。~3H-TdR掺入法测定801-D细胞转染wtp53后药物敏感性变化,并做同步FACS分析;DNA断裂鉴定药物作用后细胞死亡方式;免疫组化初步分析wtp53对MDR1蛋白表达的影响;用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)分离wtp53影响801-D细胞顺铂敏感性的相关基因,并进行克隆和序列分析。结果 经对多种药物筛选表明,wtp53可选择性增加以顺铂为代表的DNA损伤制剂的敏感性,转染wtp53后及顺铂诱导后801-D细胞MDR1蛋白无明显变化。用mRNA差异显示方法获得6条阳性差异片段,经克隆和序列分析其中1条长459核苷酸片段有一个开放阅读框,与核糖  (本文共87页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中华肿瘤杂志》2006年04期
中华肿瘤杂志

人肺癌细胞中去甲长春新碱和泰索帝药物敏感性基因的比较分析

肿瘤患者对抗癌药物的敏感性与肿瘤的生物学特性(病理分型、肿瘤异质性和细胞动力学)、患者的个体差异(患者对化疗药物的敏感程度以及对药物的耐受程度)、药物本身的毒性反应等有关。如何发现、克服抗癌药物耐药性是提高肿瘤治疗效果亟待解决的关键问题。通过基因表达,比较分析抗癌药物敏感性的方法有Northern blot技术、差异展示技术、cDNA文库测序和基因表达序列分析等,但均存在一定缺陷。生物芯片技术可同时从疾病及药物两个角度对生物体的多个参量进行研究,并可获取大量的其他相关信息。因此,cDNA生物芯片技术比任何一元化的分析方法更具有优势[1,2]。研究表明,P-糖蛋白、靶分子、微管量和质的变化、细胞内信号传导系统的变化、细胞调节因子、凋亡相关因子等与泰索帝(docetaxel,Doc)药物敏感性有关。但与去甲长春新碱(navelbine,NVB)药物敏感性相关的因子,尚未见到文献报道。我们应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色分析法,检测了...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国肺癌杂志》2005年03期
中国肺癌杂志

非小细胞肺癌细胞株抗癌药物敏感性相关基因差异表达的初步研究

肺癌是全世界发病率和死亡率增长最快的恶性肿瘤。因确诊时已多为中晚期,手术切除率低,化疗作为综合治疗的重要组成部分,是目前治疗肺癌的主要方法。但肺癌对化疗的敏感性不高,为提高晚期肺癌的化疗效果,实行个体化治疗,寻找肺癌细胞抗癌药物敏感性基因是当务之急。本研究应用cDNAmacroarray技术,检测6株非小细胞肺癌细胞株和永生化人支气管上皮细胞BET2A细胞株中1291个抗癌药物敏感性相关基因的差异表达,旨在筛选NSCLC细胞抗癌药物敏感性相关基因。1材料与方法1.1细胞株肺癌细胞株为4株腺癌细胞株(PC7、PC9、PC14及A549)、1株鳞癌细胞株(LK2)和1株大细胞癌(Lu65)。所有肺癌细胞和BET2A细胞株均由日本医科大学第4内科实验室提供,于10%FCS RPMI1640培养液(日本免疫生物研究所)37℃、5%CO2条件下常规方法传代。1.2总RNA提取及mRNA纯化收集1×108细胞,用RNA一步法提取总RNA,紫...  (本文共7页) 阅读全文>>

《江西医药》2003年06期
江西医药

ICU内嗜麦芽窄食单孢菌感染药物敏感性的研究

近年来,由于抗生素尤其广谱抗生素的应用,由嗜麦芽窄食单胞菌(StenotrophomonasMaltophilia,SM)引起的院内感染呈明显上升趋势,ICU是医院内感染的重灾区,其中SM引起的感染尤其突出。现将我院ICU送检标本中分离所得的35株SM以及非ICU送检的71株SM的药物敏感性进行分析。1材料与方法1.1SM来源:106例均来自2001年6月~2003年6月两年间我院符合院内感染的住院病人,男性80例,女性26例,年龄31~89岁,平均67岁,ICU病人35例(占33.02%),非ICU病人71例(占66.98%),其中79株SM来自痰液(占74.53%)。1.2SM培养与药敏试验方法:采集标本后2h内接种血平板,沙保罗平板及巧克力平板,35.5℃培养16~24h,观察菌落形态,用Vitek仪鉴定菌种,用K-B法检测药敏。1.3测定的19种抗生素:由法国生物梅里埃公司生产的药敏鉴定板,包括氨苄西林,氨曲南,SMZ,...  (本文共2页) 阅读全文>>

《国外医学(肿瘤学分册)》1988年03期
国外医学(肿瘤学分册)

肾包膜下移植法测定肿瘤化疗药物敏感性

象细菌药敏试验一样,预测肿瘤对抗癌药物敏感性,从而改善化疗效果的设想是非常吸引户勺。不少学者曾为此设计了多种肿瘤药敏试验方法。Bogden等为筛选抗癌新药,以裸鼠为宿主,在裸鼠移植传代的肿瘤为移植物建立了肾包膜下移植法(Subrenal CapsuleAssa了5 RC)〔1〕。随后又证明,用正常免疫力(NIC)小鼠行SRC法的可行性〔2〕。后来,将手术切除的新鲜肿瘤组织植入NIC小鼠肾包膜下,也获得成功〔“,4〕,并引起越来越多临床与实验工作者的兴趣。目前,SRC法已被用作多种目的的研究工具,但最多的是用于预测肿瘤化疗的敏感性。 一、SRC法的基本方法和特点 SRC法的具体步骤在Bogden〔“,4〕及其他作者〔”,“〕的文章中均有描述。简单地说,是将1 mm“的瘤块置于肾包膜下,用装有测微尺的解剖镜原位测量瘤块两个相互垂直的直径(L及W),以镜下测微单位(。mu)表示,校正测微尺使]oomu=1 mm,肿瘤初体积(I-TS)...  (本文共4页) 阅读全文>>

《国外医学.临床生物化学与检验学分册》1989年01期
国外医学.临床生物化学与检验学分册

用若丹明123与二醋酸荧光素快速测定分枝杆菌属和革兰氏阳性菌的药物敏感性

依据细菌的生长与代谢特点已有多种快速测定细菌对药物敏感性的方法。但设备昂贵或不能用于革兰氏阳性菌及分枝杆菌的检测.作者发现用若丹明123测定细菌的膜电位可作为细菌具有活力的良好指标。此外,用二醋酸荧光素(FDA)作活体染色亦可证明细菌的存活。用这两种染料对细菌染色,操作简便并可于即分钟内完成,故能用于细菌对药物敏感性的测定。 结核分枝杆菌H37Ra,M.bovi:BCCT及其抗利福平株由巴斯德研究所赠与;金葡萄ATCC2的23及其产青霉素酶临床标本株系由自己分离。这些菌株于一T...  (本文共2页) 阅读全文>>