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酵母双杂交技术钓取人UROC28结合蛋白

前列腺癌是威胁人类生命的恶性肿瘤之一,其发病率在我国近年来明显升高,对它的诊治已日益受到重视。UROC28基因在前列腺癌、膀胱癌及乳腺癌中高表达,并随着前列腺肿瘤Gleason分级的增高而表达升高,在与正常人、BPH患者相比较发现前列腺癌患者血清中UROC28基因蛋白呈高表达,人们预测UROC28基因可能在前列腺癌变过程中发挥着重要作用,其有可能成为与PSA类似的前列腺癌诊断的特异性标志物,为前列腺癌的早期诊断、判断预后及基因治疗提供有意义的帮助。蛋白质问的相互作用存在于机体每个细胞的生命活动过程中,它们都控制着大量的细胞活动事件,是生命活动的基础,一切生命活动几乎都是通过蛋白质之间的相互作用而实现的。对生命活动过程中蛋白质作用的研究有助于揭示生命过程的许多本质问题。UROC28是一个新基因,对它的相关研究很少。为对其机理和功能做第四军医大学博土学位论文5些尝试性的探索,实验首先分别从膀脐癌组织和前列腺癌PC-3细胞系中提取总R  (本文共103页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国人民解放军军医进修学院
中国人民解放军军医进修学院

干扰素β调节分子机制研究

乙型、丙型病毒性肝炎严重危害我国人民健康。但是到目前为止还没有有效而可靠的抗病毒根治办法。虽然干扰素α(IFNα)有一定的抗病毒作用,但研究表明仅对30%~40%的病人有效。拉米夫定、阿德福韦酯等虽然有一定抗病毒效果,但长期使用易引起病毒耐药变异,限制了其广泛应用。因此,对IFNα或拉米夫定等治疗无效的患者仍需探索新的治疗途径。近年来研究表明,干扰素β(IFNβ)与干扰素α一样,是一种具有多种生物学作用的重要细胞因子,虽然其与IFNα抗病毒作用机理相似,但IFNβ具有独特性,而这一独特性与IFNβ的抗病毒效果紧密相关。因而IFNβ在乙型肝炎、丙型肝炎、肝硬化和肝细胞癌的治疗中具有重要应用前景。近年来的临床资料表明,由于IFNβ不易产生抗体,可有效治疗干扰素α治疗无效的慢性乙型肝炎、丙型肝炎患者,而且在治疗慢性丙型肝炎导致的肝细胞癌方面IFNβ比IFNα有更好的抗肿瘤治疗效果。但是到目前为止,IFNβ对于机体的免疫调节和抗病毒、抗...  (本文共104页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国病原生物学杂志》2018年02期
中国病原生物学杂志

酵母双杂交技术在病原生物蛋白质研究中的应用

***蛋白质是生物体重要组成,在整个生物体的“生命”过程中发挥着重要的作用,几乎参与了生物体的每个生物活动[1-2]。对于蛋白质深入的认识,才能够更清楚的了解生命活动的规律。技术手段的不断进步和完善,为蛋白质的研究提供了有力的支持。其中,酵母双杂交技术是近年来发展起来的一种重要方法[3]。1酵母双杂交技术的应用酵母双杂交技术在基础研究和实际应用中都有很好的表现。目前,酵母双杂交技术已广泛应用到蛋白质、基因、药物、病毒、寄生虫、真菌研究当中,成为重要的研究手段。1.1蛋白质的相互作用的研究对于生物体的研究已经进入分子层面,但是,相对于浩瀚的蛋白质组学和基因组学的内容来说,人们对每个蛋白质、每段肽链的认识仍然只是很少的一部分。一个蛋白分子可能存在几个或十几个甚至上百个活性位点,这些活性中心是蛋白质发挥效应的真正场所,对于未知功能的活性中心、蛋白质的结构以及生物学作用方面,仍然有待更深入的研究。利用酵母双杂交技术,研究人员对已知蛋白的...  (本文共5页) 阅读全文>>

《生物技术进展》2015年05期
生物技术进展

酵母双杂交技术应用进展

近年来,系统生物学领域的发展主要归功于科研人员在分子生物学研究中取得的重大突破,同时随着人类基因组计划的顺利完成,对于基因工程领域的探索已经从结构基因组研究迈向功能基因组研究时代[1]。作为一个重要的学科,功能基因组学主要的研究任务是将生物基因组中包含的全部基因进行正确的翻译和对相应的蛋白质功能进行研究,其中还包括未知的大量基因及其表达蛋白的功能探索[2]。核酸是生命体的遗传物质,而蛋白质是生命体所依赖的物质基础,核酸与蛋白质、蛋白质与蛋白质之间存在着交互作用,而这种交互作用决定着生命体的基础生命活动。酵母双杂交技术是研究蛋白之间相互作用的主要方法,该方法成本低、易操作、可达到全基因组水平,还能进行品种间的互作[3],酵母双杂交技术在多项研究领域中具有重要地位和广阔的研究和发展前景。本文对酵母双杂交技术原理及在各领域的应用进展进行了综述,以期揭示酵母双杂交技术在功能基因组学中的重要作用。1酵母双杂交技术基本原理科研水平的进步推进...  (本文共5页) 阅读全文>>

《遗传》2006年12期
遗传

大规模酵母双杂交技术研究蛋白质相互作用的应用

人类基因组计划的完成,测序了许多模式生物基因组和人类自身基因组,产生了大量的预测的开放阅读框(open reading frame,ORF);人类基因组计划还促进了测序技术的发展,使被测序的生物越来越多,产生更多的预测ORF。但是,大多数预测ORF的功能尚不清楚,研究和注释这些ORF的功能也就成了基因组测序后重要而紧迫的任务。研究基因功能的方法很多,有传统的由表型到基因的方法,也有反向生物学的由基因序列到功能的方法,其中酵母双杂交技术是研究基因功能的一种重要方法。基因的功能由其编码的蛋白质来体现,蛋白质是基因功能的执行者,而蛋白质功能的发挥是通过蛋白质—小分子底物、蛋白质—核酸和蛋白质—蛋白质之间相互作用而实现的,所以,通过研究已知功能蛋白质和未知功能蛋白质是否相互作用,可有助于了解未知蛋白的功能。酵母双杂交技术就是基于研究蛋白质是否相互作用而建立的,该技术建立十多年来,已广泛用于研究蛋白-蛋白的相互作用,并向大规模、自动化、高...  (本文共6页) 阅读全文>>

权威出处: 《遗传》2006年12期
华中农业大学
华中农业大学

OsMKK1和OsMKK6互作蛋白的筛选与鉴定

植物MAPK级联途径广泛参与调控植物的细胞分化、激素应答、胁迫响应和生长发育等过程。OsMKKs是该途径中游的一类促分裂原蛋白激酶激酶,在信号转导过程中通过汇聚上游刺激信号并将其传递给下游靶蛋白,从而使植物适应外界逆境。研究表明,OsMKKs蛋白家族分为A、B、C和D四个亚族,其中OsMKK1和OsMKK6属于A亚族。而且,OsMKK1参与响应盐胁迫的信号传导过程,OsMKK6参与响应低温胁迫的信号传导过程。为进一步研究OsMKK1和OsMKK6在水稻MAPK信号传导途径中的作用机制,本研究从酵母双杂交水稻低温cDNA文库中大规模筛选与OsMKK1和OsMKK6上/下游互作的蛋白;并利用CRISPR/Cas9技术和qRT-PCR创建并鉴定了OsMKK1和OsMKK6突变体株系。主要结果如下:为筛选出与OsMKK1或OsMKK6互作的蛋白,构建了pGBKT7-MKK1和pGBKT7-MKK6两个诱饵载体,并检测了它们的自激活特性,...  (本文共84页) 本文目录 | 阅读全文>>