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神经营养因子(BDNF,NT3)基因转染治疗和/或保护感音神经性聋的前期基础及预备实验研究

目的:希望将基因治疗引入我们今后治疗和/或防止感音神经性耳聋的努力方向,摸索向耳蜗内转染基因的方法和途径,为今后进一步实验和临床应用作前期基础和预备实验。同时也提高自己的分子生物学理论水平和实验技能。方法:首先克隆昆明小鼠耳蜗组织的神经营养因子BDNF和NT3基因,并进行测序鉴定;分别与原核表达载体pDH、真核表达载体pCDNA3和逆转录病毒载体pLNCX重组构建原核表达质粒pDH-NT3、真核表达质粒pCDNA3-NT3和逆转录病毒载体质粒pLNCX-BDNF;再用温度诱导的方法诱导重组原核表达质粒pDH-NT3产生相应的蛋白质分子NT3,以证明重组质粒的实验方法是可靠的;最后用阳性脂质体包裹重组真核表达质粒pCDNA3-NT3,通过瞬时转染的方法将NT3基因转染到人淋巴瘤细胞Jurkat中,并进行筛选和传代培养,得到稳定的NT3基因工程细胞,以一定的数量移植到近交小鼠BALB/C的脑脊液中,数十天后比较移植前后BALB/C鼠  (本文共85页) 本文目录 | 阅读全文>>

《第三军医大学学报》2004年09期
第三军医大学学报

NT3基因的克隆、鉴定及高表达胚胎干细胞的构建与筛选

目的 从小鼠肝脏组织中克隆神经营养因子NT3基因 ,在此基础上构建能稳定表达NT3的MESPU3 5细胞株。方法 RT PCR扩增目的基因 ,克隆入穿梭载体pExchange 1neo ,酶切及测序鉴定。重组载体转染MESPU3 5胚胎干细胞株 ,G...  (本文共4页) 阅读全文>>

《听力学及言语疾病杂志》2002年04期
听力学及言语疾病杂志

NT3基因工程细胞经脑脊液途径的耳蜗内生物学效应的初步证明

目的 通过脑脊液途径移植神经营养因子 - 3(NT3)基因工程细胞 ,初步观察其耳蜗内听觉生物学效应。方法 将体外构建的NT3基因工程细胞扩大培养 ,收集浓缩培养上清中的蛋白 ,用印迹杂交鉴定其分泌蛋白的生物学效应 ,再将适当的细胞直接移植到 2 0天龄近交BALB/C小...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中华神经创伤外科电子杂志》2016年01期
中华神经创伤外科电子杂志

层粘连蛋白靶向NT3促进创伤性脑损伤的修复研究

目的研制能与层粘连蛋白牢固结合的含有层粘连蛋白(laminin)结合域的NT3(LBDNT3),探讨其与损伤后增多的层粘连蛋白结合促进脑损伤的修复机理。方法 46只SD大鼠随机分为空白对照组(8只)、假手术组(8只)、PBS组(10只)、NT3组(10只)、LBD-NT3组(10只),制作液压打击模型后注射对应的PBS或因子,利用水迷宫实验进行行为学评分,1个月后处死大鼠,通过大鼠脑组织免疫荧...  (本文共5页) 阅读全文>>

中国医科大学
中国医科大学

NT3联合转化生长因子β诱导骨髓基质细胞分化为神经元样细胞的实验研究

前言骨髓基质细胞(Bone marrow stromal cells, BMSCs)是骨髓内的非造血干细胞,是造血干细胞分化增殖微环境的重要组成部分,具有自我更新和多向分化潜能,可以向多种来源于外胚层和中胚层的组织分化,形成骨、软骨、肌腱、脂肪和神经等组织细胞。在特定诱导条件下可转化为神经干细胞,并继续向神经元、星型胶质细胞和少突胶质细胞等细胞分化。另外有研究表明BMSCs能够通过血脑屏障,在脑中成活并迁移,促进多种神经营养因子的分泌,减少脑内细胞坏死和凋亡,促进脑创伤后神经功能的恢复,从而使得“自体骨髓源性神经干细胞”在中枢神经系统疾病的研究及应用成为可能,深入研究骨髓基质细胞的体外分化调控机制具有重要的临床意义。目前体外定向诱导骨髓基质细胞分化为神经元样细胞的实验条件尚未成熟,诱导分化率较低。因此,本实验从成年大鼠骨髓基质细胞的分离、纯化及扩增方案的实验参数优化出发,探讨NT3与TGF-β联合诱导骨髓基质细胞向神经细胞方向分...  (本文共38页) 本文目录 | 阅读全文>>

第四军医大学
第四军医大学

人NT3、BDNF基因真核表达载体和四环素可诱导重组腺病毒载体的构建及鉴定

神经营养素(neurotrophins,NTFs)家族是与神经系统发育密切相关的蛋白家族。神经营养素3(neurotrophin-3,NT3)基因的大小为774bp,编码257个氨基酸残基。脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)基因的大小为744bp,编码247个氨基酸残基。研究表明,NT3和BDNF是神经系统再生微环境中的重要因素,在中枢神经元、损伤局部和靶器官3个水平发挥作用促进周围神经再生。在本研究中,我们分别构建了人NT3,BDNF基因真核表达载体及四环素可诱导重组腺病毒载体。实验过程和结果如下:一、人NT3、BDNF基因真核表达载体的构建及鉴定首先分别构建了融合绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的真核表达载体pEGFP-N2-NT3和pEGFP-N2-BDNF,并采用阳离子脂质体介导的方法,转染较常见...  (本文共72页) 本文目录 | 阅读全文>>