分享到:

人牙本质涎蛋白的基因克隆、表达和功能研究

牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)属于牙本质非胶原蛋白,占牙本质非胶原蛋白的5%~8%,因与骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)相似而得名。DSP富含谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、丝氨酸(Ser)和甘氨酸(Gly),由366个氨基酸组成,分子量约为53 000,含30%的碳水化合物和10%的涎酸,有6个潜在的糖基化位点和13个潜在的磷酸化位点。DSP的功能尚不清楚,考虑到DSP在成牙本质细胞中有阳性表达,并在前成釉细胞中有一过性表达,推测DSP可作为成牙本质细胞和相关细胞的标记物,并可能在上皮和间充质之间充当信号分子,参与成牙本质细胞分化。一、人牙本质涎蛋白的基因克隆、表达、多抗制备和组织表达研究克隆hDSP成熟肽编码区基因片段并进行原核表达,用异硫氰酸胍一步法从人牙乳头组织中抽提总RNA,再用Oligo(dt)作引物逆转录合成牙乳头cDNA,然后用RT-PCR法,从cDNA  (本文共100页) 本文目录 | 阅读全文>>

第四军医大学
第四军医大学

牙胚发育中ADAM28基因的克隆、表达和功能研究

牙齿发育是两种相邻组织一外胚上皮和神经嵴来源的间充质相互作用的结果,呈时空变化的基因调控在牙胚发育过程中发挥关键作用,调节细胞的增殖、分化和凋亡,决定牙胚的发育进程。金属蛋白酶解离素28(adisintegrin and metalloproteinase 28,ADAM28)是ADAM家族中的新成员,是定位于细胞膜且具备自身催化活性的分泌型糖蛋白,是前期我科采用改良消减杂交技术从先天性牙根发育不良患儿的差异表达基因中筛选出来的牙齿、牙根发育相关基因。ADAM28在诸多生理过程中起着重要作用:参与细胞增殖、分化,胞外基质重建、血管形成和细胞迁移等。但是,目前尚无有关ADAM28与牙齿发育关系的研究报道。本课题的研究目的是从转录、翻译和蛋白水平探讨ADAM28在牙胚发育过程中的时空分布特点及对牙源性间充质细胞增殖、分化、凋亡等生物学特性的影响,并从中分析它可能的作用机制,为今后对ADAM28功能的深入研究提供可靠的实验和理论依据。...  (本文共156页) 本文目录 | 阅读全文>>

《实用口腔医学杂志》2004年04期
实用口腔医学杂志

人牙本质涎蛋白在COS-7细胞中的表达

牙本质涎蛋白 (dentinsialoprotein ,DSP)是牙本质基质中的一种主要糖蛋白 ,DSP基因突变与牙本质发育不全 (dentinogenesisimperfecta ,DGI)Ⅱ型有关 ,提示DSP在牙本质形成过程中可能起重要作用[1,2 ] ,但其确切功能尚不清楚。DSP含有丰富的天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸和甘氨酸残基 ,相对分子质量约为 5 30 0 0 [3] 。因为DSP是高度糖基化的糖蛋白 ,为探讨其功能 ,选择真核表达系统 ,尤其是哺乳动物细胞表达系统是比较理想的。因此 ,我们克隆了hDSP全长基因 ,并克隆入真核表达质粒载体pcDNA3,构建pcDNA3 hDSP重组质粒 ,用COS 7细胞瞬时表达目的基因 ,为hDSP的功能研究提供前提条件。1 材料和方法1.1 基因、质粒、受体菌和细胞株质粒PCRⅡ TOPO hDSP (赵书芳博士惠赠 ) ,真核表达载体pcDNA3,大肠杆菌XL1 blue、...  (本文共3页) 阅读全文>>

《牙体牙髓牙周病学杂志》2002年03期
牙体牙髓牙周病学杂志

人牙本质涎蛋白的抗体制备和组织表达研究

牙本质涎蛋白 (dentinsialoprotein ,DSP)是在1987年由Butler从大鼠牙本质基质中分离出来的一种牙本质非胶原蛋白[1] ,与牙本质磷蛋白 (dentalphosphoprotein ,DPP)一起被认为是牙本质特异性蛋白 ,免疫组化显示DSP和DPP在成牙本质细胞、前成釉细胞中存在。目前已经证实DSP和DPP是由单一基因编码的 ,被称为牙本质涎磷蛋白 (dentinsialophosphoprotein ,DSPP) ,先后在小鼠、大鼠和人中得到证实[2~ 4 ] 。DSP的确切功能还不清楚 ,最新研究结果表明DSP基因突变与人遗传性牙本质发育不全Ⅰ型 (dentinogenesisimperfecta 1,DGI1)有关[5] ,因此 ,探讨DSP的功能 ,研究其在牙本质发育以及牙齿损伤修复过程中的作用具有重要的意义。我们制备了DSP抗体 ,并用Westernblot法观察了其在不同组织中的表达情况...  (本文共3页) 阅读全文>>