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猪瘟病毒E2基因遗传变异及体外表达研究

针对频繁出现的弱毒疫苗免疫失败现象和免疫猪群持续带毒等猪瘟(CSF)防制中的重大问题,本项研究从病毒的分子水平入手,试图从病毒分子变异水平以及当前流行毒的分子差异程度澄清原因,并针对CSF的持续感染研制出高效安全的基因工程标记疫苗和诊断试剂,为彻底消灭CSF提供科学依据和技术支撑。主要研究内容包括:1.猪瘟病毒主要免疫原E2基因的序列分析:利用反转录PCR(RT-PCR)及套式PCR(nPCR)方法扩增了中国猪瘟兔化弱毒株(C株)兔脾组织毒保护性抗原E2(gp55)基因,成功地将其克隆并测定核苷酸序列,与国内外已发表的猪瘟病毒(CSFV)E2基因序列比较的结果是:C-株兔脾毒与C-株细胞(SK6)毒、C-株疫苗(犊牛睾丸细胞,CSFV-C)毒CSFV-SM株(石门)毒、Bresia株(荷兰)毒、Alfort株(德国)毒的E2核苷酸序列同源性分别为98.87%、98.34%、94.58%、91.00%、80.78%;氨基酸同源性分  (本文共141页) 本文目录 | 阅读全文>>

《广东畜牧兽医科技》2016年03期
广东畜牧兽医科技

猪瘟病毒四川分离株E2基因克隆及生物信息学分析

Cloning and Bioinformatics Analysis of E2 Gene of Classical Swine FeverVirus Isolated from Sichuan StrainLI Yan,XIE Jing,WANG Qiushi,LI Jiangling,LIAO Dangjin,CAO Ye,LI Xingyu,LUO Dandan(Sichuan Academy of Animal Science,Chengdu 610066,China)猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种严重的猪传染病,具有高度接触传染性,流行广泛,高死亡率,不同品种、不同年龄的猪都可能发生。这些特点,让CSFV成为我国养猪业最主要的病源之一。猪瘟被世界动物卫生组织(OIE)列入需要申报的动物传染病名录,我国农业部将其列为病毒编号氨基酸长度表1猪瘟病常见亚种E2蛋白氨基酸长度AY575657M31768D4...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国病毒学》2000年03期
中国病毒学

猪瘟病毒E2基因真核表达质粒的构建及基因疫苗的研究

基因免疫 (GeneticImmunization)是 90年代免疫学新出现的一个研究领域[1] ,其概念是将编码某种目的抗原蛋白的基因置于真核表达元件的控制之下 ,并将其直接导入动物机体内 ,通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白 ,从而诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答 ,以达到预防和治疗疾病的目的。这种能刺激动物机体产生免疫应答反应的构建物 ,称为基因疫苗 (也称核酸疫苗或裸DNA疫苗 )。体内基因直接导入法最初用于人体基因治疗试验。人们发现将基因直接在体内转染细胞 ,目的基因亦可在机体内表达。据此 ,1 990年Wolff[1] 认为向机体内直接导入基因以表达抗原蛋白可以作为一种免疫方法。 1 992年 ,Tang等[2 ] 用实验证实了这一设想 ,他们将人生长激素基因的质粒DNA用基因枪导入小鼠皮肤上皮细胞 ,几周后 ,88%( 30 /34 )的小鼠产生了抗人生长激素的抗体。由于具有以往形式的疫苗所没有的诸多优点 ,基因...  (本文共8页) 阅读全文>>

《上海交通大学学报(农业科学版)》2009年02期
上海交通大学学报(农业科学版)

猪瘟病毒E2基因重组鸡痘病毒的构建及免疫保护试验

猪瘟(classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)引起的严重危害养猪业的主要传染病之一,被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的动物传染病,我国将其列为一类动物疫病。猪瘟病毒属于黄病毒科(Fla-viviridae)瘟病毒属(Pestivirus)成员,为具有囊膜的RNA病毒,病毒粒子含有E0(或Erns)、El和E2等3种囊膜糖蛋白。大量研究表明,E2蛋白是病毒诱导机体产生中和抗体的最主要保护性抗原[1],体外表达的E2蛋白单独免疫即可诱导猪体产生猪瘟病毒中和抗体,并可对致死剂量的CSFV产生免疫保护[2,3]。我国长期以来用猪瘟兔化弱毒疫苗高强度的免疫,已控制了猪瘟的大规模流行,但近年来出现了慢性、隐性等非典型猪瘟的流行形式,致使疫情的发生难于控制,或造成免疫失败。为此,研制更安全、更高效的新型疫苗是国内外学者努力的方向。另外,用猪瘟兔...  (本文共6页) 阅读全文>>

中国农业科学院
中国农业科学院

猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区的表达及其单克隆抗体的制备

猪瘟病毒(classical swine fever virus;CSFV)E2囊膜糖蛋白是猪瘟病毒的主要结构蛋白之一,是猪瘟病毒中和抗体的主要靶标,是抗猪瘟病毒感染的主要保护性抗原;因此,猪瘟病毒E2蛋白是开发猪瘟新型疫苗、诊断试剂及研究猪瘟病毒致病机理的重要蛋白分子。利用TRIzol试剂提取猪瘟病毒兔化弱毒疫苗(C株)的基因组RNA,经反转录获取其cDNA,再以cDNA为模板,扩增编码E2蛋白主要抗原区的DNA片段(378bp),再将扩增产物正确插入到原核表达载体pPROEX-HTb中,得到重组质粒pPROEX-tE2,然后以其转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导,高效表达出了带有组氨酸标签的截短的重组蛋白(tE2),占细菌总蛋白的35%。经Western blotting分析和间接ELISA检测,该重组蛋白能被猪瘟病毒抗血清所识别。用IPTG大量诱导重组质粒pPROEX-tE2转化菌后,通过亲和层析柱纯化重组蛋白tE2,以...  (本文共54页) 本文目录 | 阅读全文>>

《贵州农业科学》2011年10期
贵州农业科学

猪瘟病毒贵州株E2基因序列的分析

猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)属于黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivir-us)[1],能引起猪发生一种高度接触性传染病[2-4],该病在我国多年来实行以免疫预防为主的防治策略,猪瘟急性暴发式流行已得到控制,但近年来仍不断有散发猪瘟的报道,有的病例为非典型[5-7],有的为胎盘感染引起繁殖障碍[8]。猪瘟病毒是具有囊膜的单股正链RNA病毒,长度为12.3kb,仅含有一个大的开放阅读框架(ORF),编码一个含3 898个氨基酸残基的多聚前体蛋白,其前体蛋白被加工成CSFV蛋白的顺序依次为NPRO、C、E0、E1、E2、P7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B[12]。其中C、E0、E1和E2为其结构蛋白,在结构蛋白中,只有E0和E2囊膜糖蛋白能够诱导机体产生中和抗体。E2囊膜糖蛋白是猪瘟病毒的主要结构蛋白,是抗猪瘟病毒感染的主要保护性抗原。对...  (本文共3页) 阅读全文>>