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减蛋综合征病毒四川株(SG9301)的分子生物学及六邻体蛋白基因的克隆和表达的研究

减蛋综合征病毒(Egg Drop Syndrome virus,简称EDSV)是禽类的一种腺病毒,引起的产蛋下降综合征(Egg Drop Syndrome,简称EDS76)可导致产蛋鸡产蛋下降20-30%或以上,蛋的品质下降,是目前养鸡业的一大障碍。程安春等于1993年在国内外首次报道EDSV早期感染导致产蛋鸡开产期推迟并从四川某罗斯父母代肉种鸡场出现严重开产推迟的鸡群中分离到3株EDSV(SG9301、SG9302和SG9303)。本研究以四川本地分离的EDSV-SG9301毒株为基础材料,含病毒的鸭胚尿囊液分别采用PEG或透析袋浓缩、经差速离心沉淀以及不经任何处理,用SDS-蛋白酶K-酚/氯仿抽提出病毒DNA,经测定,DNA的浓度和纯度均无显著差异(OD_(260)/OD_(280)均达1.8以上,每毫升尿囊液中可抽提到0.5ug左右的DNA),DNA的质和量均能满足限制性核酸内切酶分析和PCR等分子生物学实验。然后对EDS  (本文共107页) 本文目录 | 阅读全文>>

《哈尔滨医科大学学报》2017年03期
哈尔滨医科大学学报

人3型腺病毒六邻体基底区重组蛋白的克隆表达和纯化

生物学部生物化学系,南非比勒陀利亚市0002)腺病毒(adenovirus,Adv)是一群无包膜的双链DNA病毒,在自然界中的分布十分广泛,存在于各种动物体内,如猪、马、牛、鸡、鸭、狐狸、鱼和猴等。分为感染哺乳动物的哺乳动物腺病毒(mastadeno-virus)、感染禽类的禽腺病毒(aviadenovirus)、感染鱼类的鱼腺病毒(ichtadenovirus),以及富含AT腺病毒(atadenovirus)和唾液酸酶腺病毒(siadenovir-us)五个属。其中,研究最广泛的是哺乳动物腺病毒属中的人腺病毒。迄今经文献报道,人腺病毒分为A~G共7个种,70个基因型[1]。腺病毒感染人类,引起许多疾病如:人呼吸系统疾病,流行性角膜结合膜炎、咽结合膜热等。我国尚没有开展大规模的腺病毒感染状况调查,但北京、河南、甘肃、黑龙江等省市的统计资料显示,腺病毒感染在呼吸道疾病中占有较大的比例,尤以冬季为重。在我国华北、东北及西北,冬季往往...  (本文共4页) 阅读全文>>

《高等学校化学学报》2009年08期
高等学校化学学报

人3型腺病毒六邻体蛋白同源建模及其进化轨迹分析

人腺病毒(Human adenovirus,HAdV)共51个血清型,分为6个亚属,能引起许多人类感染性疾病[1],其中在我国北方地区尤以由3型与7型引起的上呼吸道感染和小儿肺炎较为严重.六邻体(Hexon)是腺病毒的主要衣壳蛋白,研究结果表明,六邻体是同源三聚体(Homotrimer),含有大量型特异性中和表位,能够刺激机体产生型特异性中和抗体[2],预测这些中和表位对于开发人腺病毒疫苗和建立快速人腺病毒检测方法[3,4]都具有重大意义.以往对抗原蛋白未知表位的预测方法都是基于氨基酸一级序列的,带有一定的盲目性.抗原蛋白分子的三维(3D)空间结构可以提供中和表位必要的信息.虽然蛋白质结构数据库(PDB)[5]中已经有人2型与5型腺病毒六邻体的结构[6],但相关文献[7]表明,它们只是六邻体的一个核心保守区,且存在氨基酸缺失与肽链断裂等问题.本文通过聚合酶链反应(PCR)产物直接测序的方法得到了人3型腺病毒六邻体氨基酸全序列,并...  (本文共5页) 阅读全文>>

《国际免疫学杂志》2006年02期
国际免疫学杂志

腺病毒六邻体蛋白结构、功能及疫苗研究

腺病毒(Adenovirus,AdV)在自然界分布十分广泛,存在于各种动物体内,分为感染鸟类(Aviadeno virus)和哺乳动物(Mastadenovirus)的两个属。后者从9种不同的宿主中共分离到101种,其中研究最广泛的是人腺病毒。迄今为止,已发现51个人类腺病毒血清型[1]。腺病毒感染人类,引起许多疾病,如急性上、下呼吸道感染、暴发性眼结膜炎、急性出血性膀胱炎、风湿性关节炎、免疫缺损疾病、脑炎、脑膜炎以及婴幼儿胃肠炎等[2]。腺病毒引起的肺炎较为严重,在3岁以下儿童还易引起急性肺炎,以3、5、7型为主[1]。腺病毒以其型别多、致病范围广而越来越受到关注。腺病毒无包膜,20面体对称,有252壳粒,其中20面顶角壳粒为12个五邻体(penton),每个五邻体有2条纤维,除五邻体外有240个非顶角壳粒,称为六邻体(Hexon),带有主要的属和亚属特异性抗原决定簇和次要的种特异性抗原决定簇[1]。近年来,由于腺病毒六邻体蛋...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国儿童保健杂志》2006年03期
中国儿童保健杂志

2004年广州地区流行的3型腺病毒六邻体基因序列分析

急性咽结膜热常在学龄前儿童中爆发流行,夏天是高发 季节且多与游泳有关,病原因时间、地点不同而异,以腺病毒 3、7型为主「‘一3〕。2004年7月广州市某幼儿园发生一起急 性咽结膜炎的流行,作者对其中32例患儿进行了病原学检 测,腺病毒PCR检测结果有20例阳性,经分型证实为腺病 毒3型。为了解本次流行的3型腺病毒特点,作者对其六邻 体蛋白进行了序列分析,现报告如下。 1对象和方法 1.1对象7月12~13日收集的部分患儿的咽、眼拭子标 本,经检测证实为3型腺病毒者; 1.2实验方法 1.2.1设计腺病毒六邻体引物设计该引物两对,将 中国儿童保健杂志2006年6月第14卷第3期eJCHe Jun.2006,Vol 14,No.3 279 2835bp的六邻体分两段分别进行扩增。引物序列见表1。 1.2.2扩增六邻体提取DNA,操作按试剂盒说明(广州 华银基因科技有限公司)进行。PCR扩增:反应体系25拜L (10 mMTris H...  (本文共2页) 阅读全文>>

《哈尔滨医科大学学报》2005年06期
哈尔滨医科大学学报

重组人3型腺病毒六邻体蛋白纯化及抗原性检测

腺病毒(adenovirus,Adv)是一群分布十分广泛的DNA病毒,病毒感染主要是经上呼吸道和眼结膜侵入人体,引起急性咽炎、流行性角膜结膜炎或病毒性原发性非典型肺炎,已成为暴发流行的常见病原体,尤其对免疫力低下患者[1,2]。近些年北方地区腺病毒感染儿童造成病毒性肺炎的病例较多,占呼吸道感染病毒的20%以上[3],因此,对腺病毒进行早期预防具有重要意义。腺病毒六邻体作为腺病毒主要的结构蛋白,能够刺激机体产生中和抗体,抑制病毒体构象的改变,从而中和病毒体[4]。六邻体的中和抗原决定簇主要存在于其两个环区L1、L2(loop1l、oop2)。本课题组已经克隆、表达了六邻体L1、L2区蛋白[5,6],在此基础上,本文对该蛋白进行纯化,免疫实验动物,检测该蛋白的抗原性,为研发高效、特异的预防用腺病毒疫苗奠定基础。1材料与方法1·1材料1.1.1菌株及实验动物:工程菌大肠杆菌M15pQE31-Hexon本课题组构建[5],Hela细胞、...  (本文共4页) 阅读全文>>