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经母婴传播获得HBV感染儿童及其母亲体内HBV PreS/S准种序列及EnhⅡ/CP/PreC变异特点的研究

目的通过对经母婴传播获得HBV感染的子女及其母亲慢性携带者体内HBV PreS/S基因和EnhⅡ/CP/PreC基因的研究,了解来源相同的HBV毒株在不同程度的病毒血症情况下(1)PreS/S基因序列有无准种存在及其特点,(2)EnhⅡ/CP/PreC基因变异的特点以及与HBV复制的关系。为进一步研究各种HBV相关肝病与准种PreS/S基因序列、EnhⅡ/CP/PreC基因变异的关系奠定基础。方法1 重庆地区HBV流行株PreS/S、EnhⅡ/CP/PreC基因标准参照序列的建立:以10例3~6岁、未接种过乙肝疫苗、未使用过抗HBV药物的HBV慢性携带儿童为对象,应用ELISA方法检测肝炎病毒A、B、C、D和E的血清学标志物、应用HBV定量PCR法测定血清HBV DNA滴度。酚/氯仿抽提法提取血清中的DNA,PCR扩增PreS/S和EnhⅡ/CP/PreC基因,其产物直接测序。所测的S基因与GenBank中已确定的基因型(A~G  (本文共119页) 本文目录 | 阅读全文>>

《微生物学通报》2004年01期
微生物学通报

耐药淋球菌相关核苷酸序列的克隆与初步分析

淋球菌曾经对抗生素十分敏感,随着抗生素的广泛使用,以及淋球菌的变异和适应性增强,淋球菌对抗生素产生了耐药性。耐药的基因机制迄今远未探明,为全面了解淋球菌对抗生素耐药的分子机制,我们采用抑制性消减杂交技术建立了淋球菌差异DNA消减文库[1 ] ,在此基础上我们进一步克隆和筛选淋球菌耐药相关核苷酸序列。1 材料与方法1 1 细菌菌株淋球菌WHO标准参考菌株A (WHO A)和多重耐药淋球菌菌株RSM2 92C4由PillayD教授惠赠。1 2 主要生化试剂PCR SelectBacterialGenomeSubtraction试剂盒为Clontech公司产品,RsaI等限制性内切酶为Roche公司产品,pGEM Teasy线性化质粒载体为Promoga公司产品,Megaprim erDNAlabellingsystems和dCTP 32 P为Amersham公司产品。测序采用PharmarciaBiotech公司的ALFTMDNA...  (本文共4页) 阅读全文>>

《宁夏医学杂志》2002年10期
宁夏医学杂志

乙型肝炎病毒X区核苷酸序列检测方法的建立

乙型肝炎病毒 (HepatitisBvirus ,HBV)基因组合有 4个开放阅读框架 (ORF) ,分别为C、S、P、X ,其中X -ORF位于碱基 (nt) 1374 - 1836之间 ,X基因区中主要功能区包括核心基因启动子 (BCP :Basiccorepromoter ,nt174 4 - 184 9) ,对BCP有强烈刺激作用的上游调节序列 (CUR :Coreupporreulatese quence ,nt16 36 - 174 1) ,对BCP活性有抑制作用的上游负调节序列 (NRE :Negativeregulateelement ,nt145 5 - 16 2 6 ) ,并重叠有HBV增强子 (Ⅱnt16 85 -1773)和直接重复序列DR1(Directrepeat,nt182 4 -1834) ,BCP调控HBeAg的表达和前基因组RNA的转录 ,DR1增强子Ⅱ调控前基因组RNA转录起始位点 ,因而该...  (本文共3页) 阅读全文>>

《西南民族大学学报(自然科学版)》2006年06期
西南民族大学学报(自然科学版)

牦牛核苷酸序列资源的调查

众所周知的人类基因组计划(HGP),已在2003年4月宣告成功,该计划贡献了约3000 Mb的人类核苷酸序列.与此同时,普通牛、绵羊、猪、鸡等重要家畜家禽,其全基因组测序也在进行当中,均产生了大量的序列.当前,这些海量的序列数据主要集中在三大生物信息学数据库,即美国国家生物信息中心(NCBI)的GenBank、欧洲生物信息学研究所(EBI)的EMBL、日本国立遗传学研究所(NIG)的DDBJ.这三个数据库每天交流数据,互通有无,因此每个数据库都具有代表性.牦牛是唯一能在高原生存繁衍的牛种,也是藏区人民不可或缺的重要家畜,对当地的经济和社会具有不可估量的价值[1].随着科学技术的发展,牦牛学的研究也步入了基因水平,为了解现今牦牛核苷酸资源的状况,本文根据GenBank的相关记录,对其进行统计分析,希望能为今后的相关选题和研究提供重要参考.1材料与方法1.1序列信息的来源NCBI有一个分类系统(Taxonomy),为每个物种分配了一...  (本文共6页) 阅读全文>>

《化学通报》1999年12期
化学通报

合成抗敏低聚核苷酸

1 抗敏低聚核苷酸自从Zamecnik和Stephenson于1978年首次报道了抗敏低聚核苷酸具有抑制基因表达以来[1,2],由于它的专一性和潜在而广泛的应用范围,抗敏低聚核苷酸技术已在研究和医疗领域引起了相当大的关注。最近,在临床上开始使用抗敏低聚核苷酸用于治疗病毒性疾病和癌症,宣布了在药物设计史上的一个新纪元的到来[3~5]。抗敏低聚核苷酸是天然产生或人工合成的单链DNA,RNA及其修饰类似物的片断。它们具有选择性抑制基因表达的能力使其成为有效的治疗试剂。低聚核苷酸与靶标基因或信使RNA通过WatsonCrick碱基配对作用(即腺嘌呤与胸腺嘧啶,鸟嘌呤与胞嘧啶通过氢健相互作用)进行杂化,从而抑制该基因的表达(图1)。这些简单的碱基配对规则控制了抗敏低聚核苷酸和靶标核苷酸之间的相互作用,使得设计合成以已知核苷酸序列的基因为目标的抗敏低聚核苷酸成为可能。Figure1 Schematicpresentationoftheant...  (本文共10页) 阅读全文>>

《新高考(高三理化生)》2010年04期
新高考(高三理化生)

限制性核酸内切酶的四大考点

限制性核酸内切酶是指一类能够识别双链DNA分子中特定的核苷酸序列,并对其切割的酶。也是基因工程中重要的工具酶之一,已成为近年来生物高考命题的热点之一,本文联系高三生物复习进行初步探讨。考点1:限制性核酸内切酶的来源及作用目前已从400多种不同的微生物中分离出约600多种限制性核酸内切酶,可识别100多种不同序列。限制作用主要是指生物体内的限制性核酸内切酶能够识别和切割外源DNA分子,内源性的DNA分子则由于甲基化酶修饰而受到保护。这对于微生物保护自身DNA和保持遗传性状的稳定遗传具有重要意义。例1下列有关限制性内切酶的叙述中,不正确的是()A.限制性核酸内切酶主要存在于细菌等微生物体内B.所有限制酶的识别位点均由6个核苷酸序列组成C.限制性内切酶是工具酶中最重要的酶类D.细菌细胞内限制酶可以切割外源DNA,防止外源DNA入侵解析限制性内切酶识别的核苷酸序列长度通常是4~6个核苷酸,少数酶识别7~12个核苷酸。答案B考点2:限制性...  (本文共2页) 阅读全文>>