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神经营养因子受体下游信号转导通路的酵母双杂交研究

神经营养因子是指机体产生的能够促进中枢和外周神经细胞存活、生长和分化的多肽生长因子。神经营养因子既可以影响发育早期胚胎神经元或者前体细胞的生长与分化,还能够促进成熟神经细胞的存活与生长,而且它对于治疗一些神经系统退行性疾病或促进神经损伤后修复具有非常重要的作用。神经营养因子结合并作用于神经营养因子受体,激活胞内信号通路后,才能发挥其重要的生物学效应。神经营养因子以其化学组成和受体的特性等可以分为多个家族,如GDNF家族、NGF家族等。GDNF、NGF、EGF的生物学效应分别由GDNF受体RET、NGF受体TrkA及EGF受体EGFR所介导。尽管上述配体不尽相同,但它们的受体均属于受体酪氨酸激酶(RTK)。近几年来,为了更多地理解为何不同的配体、受体可引起类似或特定的生物学效应,人们对于细胞内由这些受体介导多种信号通路的研究越来越重视。大量工作表明,配体与受体结合,引起受体的二聚化并同时激活受体后,受体可结合大量的信号蛋白分子,如  (本文共87页) 本文目录 | 阅读全文>>

复旦大学
复旦大学

Cyclin D3与eIF3k的相互作用及TH1与A-Raf相互作用的研究

在细胞周期的调控过程中,有两大家族的蛋白发挥着重要的作用。一个家族是CDK,它们磷酸化特异的蛋白来调节下游通路。另一个家族是专门的调节蛋白cyclins,它们与CDK分子结合来调节CDK的激酶活性。当细胞从静止期进入细胞分裂时,编码D型cyclin的基因在G1期被激活,cyclin D随之与CDK4或CDK6形成一个复合物,活化后的激酶复合物磷酸化底物蛋白调控下游的通路。在cyclin D中,cyclin D3不仅作为一个CDK4和CDK6的调节亚基在G1期调节细胞周期进程,还与细胞生长、细胞分化、转录调节和凋亡有关。我们实验室报导了一个G2/M期的CDK-CDK11P58,也能特异地与cyclin D3在G2/M期相互作用。为了进一步了解cyclin D3在细胞里的功能,我们以cyclin D3为诱饵蛋白,用酵母双杂交技术筛选人胎肝cDNA文库,找到了与cyclin D3结合的蛋白eIF3k(真核翻译起始因子3的p28亚基)。...  (本文共87页) 本文目录 | 阅读全文>>

甘肃农业大学
甘肃农业大学

大鼠RSA14-44基因功能的初步研究

在本研究中,选择RSA14-44基因作为研究对象。RSA14-44基因位于大鼠染色体4q31,该基因是中国协和医科大学医学分子生物学国家重点实验室通过激光捕获显微切割(Laser Capture Microdissection,LCM)技术,构建大鼠初级精母细胞cDNA削减文库,并进一步用斑点杂交(Dot Blotting)分析,通过在互连网上的比对获得的。全长为1124bp,可读编码框自100bp_684bp,编码194个氨基酸,推测其编码蛋白质分子量为21.8Kda。首先,我们利用RT-PCR检测了RSA14-44在多个组织中的表达,证明其在睾丸、附睾入脑组织中的呈高表达,这为进一步对其其功能的研究提供了新的思路。其次,将RSA14-44 cDNA克隆到pET30a(+)载体,在大肠杆菌中进行了pET30a(+)-14融合蛋白的表达与纯化。以纯化的pET30a(+)-14融合蛋白免疫新西兰大白兔,最后获得了抗pET30a(+...  (本文共124页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国科学院研究生院(上海生命科学研究院)
中国科学院研究生院(上海生命科学研究院)

G蛋白偶联受体激酶的新底物Eps15的发现及其生物学功能研究

G蛋白偶联受体(G Protein-coupled Receptor, GPCR)是一个种类繁多、功能各异的受体家族,与其关联的诸多生命活动中包括神经活动、代谢、红细胞生成作用、炎症反应,以及包括视觉、嗅觉和味觉等感觉信号处理过程。GPCR在受到信号分子(激动剂)持续作用时,信号转导效应反而会消失或降低,该现象被称为“减敏作用”(Desensitization)。G蛋白介导的信号转导系统的快速减敏作用主要通过受体的磷酸化而阻断了G蛋白与受体的结合。G蛋白偶联受体激酶(G Protein-coupled Receptor Kinases,GRKs)是一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,它们能够快速的对活化的(激动剂结合的)受体蛋白磷酸化,被GRKs磷酸化的受体对β-滞留蛋白(β-arrestin)具有靶向性,β-滞留蛋白与磷酸化的受体结合导致G蛋白与受体解偶联和受体的内吞,从而有效地降低细胞膜上的功能受体水平而完成了信号减敏。多年来,关于...  (本文共88页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国协和医科大学
中国协和医科大学

应用酵母双杂交和酵母三杂交系统研究G蛋白信号传导通路中的相关蛋白因子

应用酵母双杂交和三杂交系统研究G蛋白信号传导通路中的相关蛋白因子G蛋白是一类由Gα、β、γ三亚基组成的异三聚体蛋白,可介导胞外各种刺激(如:激素、生长因子、物化信息等)向胞内传导,调节细胞生长,分裂,分化等重要生命活动。活化的Gα亚基(Gα-GTP)和Gβγ亚基二聚体可以作为相对独立的结构和功能单位引发不同的信号传导通路。目前,研究这两个功能单位下游的新的效应因子及Gβ和Gγ亚基在Gβγ亚基二聚体胞内信号传导中的作用是研究的热点问题。为了寻找Gβγ下游的新的蛋白因子及研究Gβ或Gγ亚基在Gβγ亚基二聚体中的作用,以揭示G蛋白信号传导的新机制,本研究课题运用酵母双杂交系统和本室构建的酵母三杂交系统,分别以Gβ1和Gβ1γ2为饵蛋白筛选人脑cDNA文库(Gβ1,Gγ2在脑中高表达),并用免疫共沉淀、细胞免疫荧光共聚焦等技术证实蛋白间的相互作用,另外又用片段删除实验定位蛋白分子间相互识别和结合的特异结构域。本研究课题的主要结果如下:①...  (本文共152页) 本文目录 | 阅读全文>>

复旦大学
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子宫颈部位输卵管蛋白表达和功能的初步研究及其在毕赤酵母的重组表达及纯化

本实验室自克隆了兔输卵管糖蛋白(DPF-1)全长cDNA,并通过“功能缺失”实验表明它具有克服早胚发育阻断的功能。为了对DPF-1的功能进行更全面的研究,搞清楚DPF-1的确切生物学功能,本实验室用RT-PCR方法从小鼠子宫颈扩增到了405bp小鼠输卵管糖蛋白的氨基端部分序列,并进行了下列实验:用半定量RT-PCR法证明,子宫颈输卵管糖蛋白mRNA的水平与小鼠动情期有关。又初步研究兔输卵管上皮细胞条件培液对人精子活力的影响,发现兔输卵管上皮细胞条件培液对人精子活力无影响。通过构建了p PIC9K/DPF-1 cDNA重组表达载体,并用BglⅡ线性化p PIC9K/DPF-1,电转化毕赤酵母GS115,筛选到高拷贝转化子。慢型(Mut~S)重组子在毕赤酵母pPIC9表达系统中得到了表达分泌产物的重组DPF-1。进一步通过离子交换层析和凝胶过滤层析进行纯化,达到电泳纯。为了明确早胚发育机制,用酵母双杂交筛选卵母细胞中与输卵管蛋白相互...  (本文共87页) 本文目录 | 阅读全文>>