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靶向性非病毒载体GE7系统介导P21~(WAF-1/CIP1)基因治疗脑胶质瘤的实验研究

[目的]研究表皮生长因子受体介导的靶向性非病毒载体GE7基因转移系统介导细胞周期调节基因p21~(WAF-1/CIPl)对体外培养的人脑胶质瘤细胞和裸鼠荷人脑胶质瘤模型的治疗效应。[方法]构建靶向性非病毒载体GE7基因转移系统,分别与β-gal报道基因、细胞周期调节基因p21~(WAF-1/CIPl)组成多肽/DNA载体四元复合物。应用免疫组化法检测中国人脑胶质瘤组织及瘤周组织EGF-R的表达水平;免疫组化法检测人脑胶质瘤细胞株U87MG、U251MG和大鼠胶质瘤细胞株C6表面EGF-R的表达,筛选EGF-R高表达的胶质瘤细胞株,作为外源基因转染的靶细胞。β-gal报道基因体外转导U251细胞,X-gal组化染色分析GE7基因转移系统的体外导入效率;p21~(WAF-1/CIPl)基因体外转导U251细胞,应用MTS法观察细胞生长抑制情况:提取细胞DNA,琼脂糖凝胶电泳检测DNA凋亡梯带;流式细胞仪分析细胞周期变化:免疫组化法及  (本文共112页) 本文目录 | 阅读全文>>

《复旦学报(医学版)》2002年03期
复旦学报(医学版)

GE7导入系统介导抑癌基因NOEY2体内导入治疗人上皮性卵巢癌裸鼠腹水瘤

卵巢癌是妇科肿瘤中较常见的一种恶性肿瘤 ,其中上皮性卵巢癌占 5 0 %~ 70 %。虽然目前已有手术联合化疗、放疗及多种生物治疗手段 ,但其总的五年生存率仍徘徊于 2 5 %~ 3 0 % ,Ⅲ~Ⅳ期患者的生存率更低[1] 。为了提高其生存率 ,近年来在传统治疗的基础上学者们又对其基因治疗进行了大量的研究 ,包括分子化疗、突变补偿、免疫增强及改变耐药性等[2 ] 。但由于以上治疗均以病毒或脂质体为目的基因的载体 ,故导入效率较低 ,无靶向性 ,且有潜在免疫反应的危险 ,因此影响了疗效及临床应用。本研究拟通过一种新型的靶向载体———GE7导入系统介导一种新的卵巢癌相关的抑癌基因NOEY2体内导入治疗人上皮性卵巢癌裸鼠腹水瘤模型 ,以期寻求一种新的基因治疗方法。材料和方法材料 人上皮性卵巢癌细胞株skov3ipl细胞、质粒 pcDNA3及 pcDNA3 NOEY2正义cDNA ,由美国德州大学M .D .Anderson癌症中心...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国肿瘤生物治疗杂志》2001年01期
中国肿瘤生物治疗杂志

受体介导的基因导入系统对家兔肝肾功能的影响

目前 ,肿瘤的基因治疗研究正迅速地由实验室走向临床[1] ,研究的热点之一是制备高效、导向性的基因导入系统。本研究观察了一种新的以表皮生长因子受体 (EGFR)为靶向的 16肽的真核表达基因导入系统(GE7系统 ) [2 ] 与细胞周期素依赖的蛋白激酶抑制物(CKI)基因p2 1相联接的复合系统 (GE7+p2 1)经家兔门静脉给药后对肝、肾功能和血象变化的影响 ,以及家兔体内抗GE7+P2 1抗体产生情况。1 材料与方法1.1 主要试剂辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG(中科院上海细胞生物研究所 ) ;邻苯二胺戊、巴比妥钠 (Sigma)。1.2 GE7+p2 1系统具体操作方式见文献 [2 ]。1.3 动物实验取雄性家兔 4 2只 ,平均体重 2 .2 5kg。以戊巴比妥钠 (2 0mg/kg体重 )耳缘静脉给药麻醉后 ,打开腹腔 ,钝性分离门静脉 ,穿刺给药 (GE7+p2 1,7μg/兔 ) ,连续缝合。共分 6组 ,每组 ...  (本文共2页) 阅读全文>>

《中华妇产科杂志》2004年05期
中华妇产科杂志

动脉灌注GE7系统介导β-半乳糖苷酶基因导入大鼠诱发性卵巢肿瘤细胞的研究

近十余年来,卵巢癌的基因治疗研究取得了很大的进展。寻找高效且具有导向性的载体系统以及给药途径,成为其临床应用的关键。我国顾健人教授构建了一种针对表皮生长因子受体(叩idermalgrowth faetor ree叩tor,EGFR)的新型非病毒载体—GE7导人系统川,在体内外都获得了很高的基因导人效率。本实验根据动脉灌注给药有器官靶向性的特点,模拟介人放射学中成熟的选择性插管技术,将不同剂量的GE7一多聚赖氨酸复合物(GE7一赖氨酸复合物)/日一半乳酸糖昔酶基因(p一gal)/流感病毒血凝素N端20肤多聚赖氨酸复合物(流感病毒赖氨酸复合物)四元复合物(四元复合物),经荷瘤侧的卵巢动脉注人大鼠卵巢内,利用5一澳4一氯一3一引噪一p一D半乳糖昔(X一g欲)组织化学染色法检测基因导人情况,以期为卵巢癌的基因治疗研究提供实验依据。材料与方法 一、材料来源 1.动物模型构建:雌性Wistar大鼠60只,10-12周龄,体重140一1609...  (本文共5页) 阅读全文>>

《现代妇产科进展》2000年05期
现代妇产科进展

GE7导入系统介导抑癌基因NOEY2体内导入治疗人上皮性卵巢癌裸鼠网膜移植瘤的研究

卵巢癌中上皮性卵巢癌占 50 %~ 70 %。虽然目前已有手术、化疗、放疗及多种生物治疗手段 ,但其总的 5年生存率仍徘徊于 2 5%~ 30 % ,Ⅲ~Ⅳ期患者的生存率更低[1] 。为了提高患者的生存率 ,近年 ,在传统治疗的基础上学者们对卵巢癌的基因治疗进行了大量的研究 ,包括分子化疗、突变补偿、免疫增强及改变耐药性等[2 ] ,但这些治疗均以病毒或脂质体为目的基因的载体 ,导入效率较低 ,无靶向性 ,且有潜在免疫反应的危险 ,影响了疗效及临床应用。本研究拟通过一种新型的靶向载体—GE7导入系统介导卵巢癌相关的抑癌基因NOEY2体内导入治疗人上皮性卵巢癌裸鼠网膜移植瘤模型 ,以期寻求一种新的高效安全的基因治疗方法。1 材料与方法1 1 材料 人上皮性卵巢癌细胞株Hey、β -半乳糖苷酶 (β-galactosidase,β-gal)基因、X -gal、pcDNA3、pcDNA3 -NOEY2正义cDNA、NOEY2蛋白阳性对...  (本文共4页) 阅读全文>>

第二军医大学
第二军医大学

非病毒载体GE7系统介导自杀基因治疗卵巢癌的体外实验

肿瘤的基因治疗主要分为四类:突变补偿、分子化疗、免疫增强和耐药转变。其中,属分子化疗的1型单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶/羟甲基无环鸟苷(HSV1-TK/GCV)系统治疗恶性脑瘤疗效肯定,这一方案在国外已进入3期临床实验。也是国内到目前为止批准进入临床研究的唯一的肿瘤方案。HSV1-TK/GCV是目前最有希望进入临床治疗的基因治疗系统。其治疗原理为:HSV1-TK通过载体系统导入肿瘤细胞后,表达HSV1特有的胸腺嘧啶核苷激酶(HSV1-TK),其作用于核苷类似物羟甲基无环鸟苷(GCV),使其磷酸化为高度细胞毒性物质,抑制肿瘤细胞DNA合成,导致细胞死亡;而且对周围的肿瘤细胞有“旁观者效应”,具有强烈的肿瘤细胞杀伤效应。GE7导入系统为顾健人实验室构建的一种靶向非病毒载体,通过表皮生长因子(EGF)受配体结合的介导作用,经胞吞作用将外源基因导入细胞内,而靶向作用于EGF受体阳性细胞,经此途径导入的外源基因的表达为在胞质的瞬间表达,无...  (本文共58页) 本文目录 | 阅读全文>>