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大肠杆菌细胞表面展示体系的建立及其应用

本研究通过对大肠杆菌外膜蛋白C(OmpC)的结构分析与研究,构建了一个新的细菌细胞表面展示体系。这一体系以大肠杆菌Ompc为运载蛋白,以“三夹板”融合的形式将外源蛋白嵌入Ompc的表面暴露位点,从而实现了外源蛋白在大肠杆菌细胞表面的定位。这是国内外首例利用大肠杆菌Ompc蛋白构建展示体系的报道。本研究分别选用多聚组氨酸肽和木聚糖酶作为乘客蛋白对该体系在全细胞吸附和全细胞催化等方面的应用进行了探索性研究,并初步证实了多聚组氨酸肽展示菌在重金属离子吸附领域的应用价值。本研究分析了Ompc的一级结构,模拟出它在菌体外膜上的穿梭折叠方式,进而选择有PstⅠ和EcoRⅤ单一识别位点的第七外环(L7)作为外源蛋白的嵌入位点。首先,设计一对引物从大肠杆菌MC4100菌株的染色体上克隆到ompC基因及其启动子。同时,由交叠PCR人工合成出编码六聚组氨酸肽(6His)的DNA序列(6His),并通过该序列的多拷贝连接得到6His的二体、三体、六体  (本文共84页) 本文目录 | 阅读全文>>

《食品与发酵工业》2017年06期
食品与发酵工业

酿酒酵母孢子表面展示系统的构建及应用

旨在建立1种酿酒酵母孢子表面展示系统,并将其应用于稀有糖合成。表面展示系统是运用微生物自身功能把外源蛋白或多肽展示在细胞表面,文中用磷酸甘油氧化酶(GPO)来验证酿酒酵母孢子表面展示系统的可行性。将编码肺炎链球菌来源的GPO的基因glpo与信号肽序列(ss)融合后连接到载体p RS424-T...  (本文共7页) 阅读全文>>

《生物工程学报》2010年10期
生物工程学报

芽胞表面展示技术研究进展

芽胞表面展示技术作为微生物表面展示技术的一种,因所表达的异源蛋白无需经过跨膜过程及芽胞的抗逆性等独特优势而备受研究者的关注。...  (本文共6页) 阅读全文>>

《上海畜牧兽医通讯》2008年03期
上海畜牧兽医通讯

微生物表面展示技术的发展及应用

微生物表面展示技术是利用基因工程手段实现外源肽段(或蛋白质结构域)以融合蛋白形式在微生物表面进行展示的新...  (本文共2页) 阅读全文>>

《应用与环境生物学报》2005年02期
应用与环境生物学报

表面展示技术在污染环境生物修复中的应用

革兰氏阴性细菌、革兰氏阳性细菌和酵母中已建立多个表面展示短肽和蛋白质的系统.在微生物细胞表面展示外源蛋白对污染环境的生物修复有着重要的意义.展示金属结...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国预防兽医学报》2020年02期
中国预防兽医学报

猪链球菌蛋白表面展示系统的构建及展示蛋白的初步观察

为构建猪链球菌(Streptococcus suis)蛋白表面展示系统,本研究通过序列分析,确定猪链球菌的LPxTG蛋白及其信号肽(SP)和胞壁锚定基序(CWA),通过PCR扩增Peno-SP、GFP、CWA的DNA片段并融合,构建强启动子Peno控制表达编码SP-GFP-CWA融合蛋白的DNA片段,将该重组DNA片段连接pSET2载体,获得蛋白表面展示质粒,转化猪链球菌,构建得到以GFP为报告蛋白的猪链球菌蛋白表面展示系统。结果显示,利用猪链球菌的10...  (本文共9页) 阅读全文>>