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苏云金芽胞杆菌帮助蛋白对杀虫晶体蛋白表达的影响

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本文主要研究了苏云金芽胞杆菌以色列亚种的20kDa帮助蛋白对库斯塔克亚种的杀虫晶体蛋白基因crylAc的表达及其伴胞晶体形成的影响,针对棉铃虫等重要农业害虫构建并向野生型菌株中转化了含20kDa帮助蛋白基因的位点专一性重组质粒,获得了三株杀虫晶体蛋白高效表达的苏云金芽胞杆菌工程菌。主要结果如下:在苏云金芽胞杆菌无晶体突变株中,20kDa帮助蛋白对crylAc的表达和伴胞晶体形成有明显的促进作用,毒力也有显著提高。结果表明,在该帮助蛋白的参与下CrylAc的表达量为不含帮助蛋白对照菌的3.5倍,形成的双金字塔形伴胞晶体长达1.85μm、宽0.85μm,体积为对照菌的3倍,同时对初孵棉铃虫幼虫的毒力提高了1.5倍。进一步分析表明,20kDa帮助蛋白是通过防止CrylAc新生肽免受胞内蛋白酶的降解而使得CrylAc表达量提高的。本试验还利用苏云金芽胞杆菌转座子Tn4430的位点专一性重组系统,构建了含有crylAc10和20kDa蛋白  (本文共85页) 本文目录 | 阅读全文>>

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苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的C-半段对Vip3Aa7和Cry7Ba1蛋白包含体形成的影响

本论文利用苏云金芽胞杆菌的表达调控元件及来自Cry1C、Cry1Ac和Cry7Ba1蛋白和晶体形成,蛋白稳定相关的C-半段,辅助蛋白p20等研究对营养期杀虫蛋白Vip3Aa7,杀虫晶体蛋白Cry2Aa,Cry3Aa晶体形成,表达量和杀虫活性的影响,建立了一个苏云金芽胞杆菌高效表达体系;并通过Cry1C、Cry1Ac和Cry7Ba1蛋白的N-、C-半段互换,研究了苏云金芽胞杆菌Cry1类杀虫晶体蛋白的C-半段对Cry7Ba1晶体蛋白溶解性,晶体形成及毒性的影响,主要结果如下:1.苏云金芽胞杆菌C-半段使Vip3Aa7形成包含体并且显著提高其表达量本文利用苏云金芽胞杆菌ICPs蛋白的各种表达调控元件,希望提高营养期杀虫蛋白Vip3Aa7的表达量,改善其因为分泌到胞外给生产应用带来的不便,研究芽胞依赖型BtⅠ-BtⅡ启动子,上游调控区,终止子及大分子杀虫晶体蛋白C-半段对Vip3Aa7表达量和包含体形成的影响,结果表明:1.1 Cry...  (本文共132页) 本文目录 | 阅读全文>>

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比较蛋白质组学揭示苏云金芽胞杆菌YBT-1520不同生长期代谢变化与杀虫晶体蛋白合成的翻译调控间关系

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绿色荧光蛋白基因在苏云金芽胞杆菌中的表达与应用

本文围绕绿色荧光蛋白基因在苏云金芽胞杆菌中的表达及应用,从以下几个方面进行了研究,取得结果如下:1.绿色荧光蛋白基因gfp在苏云金芽胞杆菌中表达的初探将携带蜡状芽胞杆菌特异启动子的gfpmut3α基因克隆到穿梭载体pHT304后,电转化至苏云金芽胞杆菌BMB171,CryB,IPS78-11,4Q7,HD-80-21中。通过荧光显微镜和Bio-assay Reader对含重组质粒pGFP-304的5个受体菌分别进行荧光检测及定量分析。结果表明,gfpmut3α基因仅在苏云金芽胞杆菌无晶体突变株BMB171,CryB,IPS78-11,4Q7中表达并可检测得到菌体发光,并建立了一套适合于苏云金芽胞杆菌的gfp标记与检测方法。2.利用绿色荧光蛋白基因gfp研究芽胞杆菌的启动子活性绿色荧光蛋白基因gfp分别标记苏云金芽胞杆菌的cry3A启动子P_(cry3A),BtⅠ-BtⅡ启动子P_(BtⅠ-BtⅡ)和来自蜡状芽胞杆菌特异启动子P_...  (本文共92页) 本文目录 | 阅读全文>>

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