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锤头状核酶、反义RNA对大鼠肺动脉平滑肌NHE-1活性及细胞增殖的作用

肺血管重构是低氧性肺动脉高压的主要特征,主要表现为肺动脉平滑肌细胞过度增殖,可能与生长因子和血管活性物质等激活细胞Na~+/H~+交换有关。Na~+/H~+交换激活后,使肺动脉平滑肌细胞在增殖早期即出现细胞内pH(pHi)明显增高,对其增殖具有容许性作用。Na~+/H~+交换器-1(NHE-1)几乎在所有真核细胞膜均有表达,介导1:1的细胞内H~+和细胞外Na~+交换,参与调节pHi等。肺动脉平滑肌细胞膜亦有NHE-1表达,在低氧条件下表达明显增高,其特异性抑制剂可明显抑制肺动脉平滑肌细胞增殖。因此本实验通过将NHE-1特异性锤头状核酶和反义RNA体外转染肺动脉平滑肌细胞,并检测细胞中NHE-1表达、Na~+/H~+交换活性、pHi的变化,及其与细胞增殖变化的关系,探讨NHE-1在肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用。研究内容包括:1.根据大鼠NHE-1mRNA序列,设计并合成两条锤头状核酶,应用PCR方法扩增获得反义RNA序列;并将其  (本文共121页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国应用生理学杂志》2007年04期
中国应用生理学杂志

阿米洛利抑制NHE-1减轻低氧性肺动脉平滑肌细胞增殖

低氧刺激的肺动脉平滑肌细胞(pul monaryartery smooth muscle cells,PASMCs)增殖是慢性低氧性肺动脉高压(pul monary arterial hypertension,pAH)的病理基础,目前其具体机制尚不清楚。最近研究发现,低氧可以激活内皮细胞膜上的Na+/H+交换体-1(Na+/H+exchanger-1,NHE-1)基因和蛋白水平的表达[1],而PASMCs膜上NHE-1的表达增多和功能活化会导致细胞内碱化促使增殖[2]。由此推测,抑制NHE-1活性可以阻止低氧刺激的PASMCs增殖,从而达到治疗PAH的目的。本研究对体外常氧/低氧培养的大鼠PASMCs应用NHE-1的抑制剂——阿米洛利(amiloride,Ami),观察NHE-1活性和表达的变化,以及对细胞的增殖影响。1材料与方法1.1材料SD大鼠,体重200~220g(由第四军医大学实验动物中心提供);胰蛋白酶,DMEM培养基...  (本文共5页) 阅读全文>>

《Chinese Medical Journal》2002年01期
Chinese Medical Journal

NHE-1与大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡(英文)

TheNa+ /H+ exchanger(NHE)isacellmembraneproteinexpressedinmammaliancells Ithasfiveisoforms :NHE 1,2 ,3,4 ,and 5 1 3  Amongthem ,NHE 1hasthemostextensivedistributionandcontributestotheregulationofintracellularpH (pHi)bymediatingthe 1∶1exchangeofextracellularsodiumforintracellularhydrogen RecentstudieshaveshownthatNHE 1playsanimportantroleintheproliferationandapoptosisofvascularsmoothmusclecells (VSMC) 4 ,5 Thei...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国现代医学杂志》2010年18期
中国现代医学杂志

人NHE-1基因miRNA干扰载体构建、鉴定及干扰效应评价

泳道1:Marker DL 2 000;750 bp加亮;泳道2:hNHE1-F/R引物在293 cDNA中的扩增(目标条带134 bp);泳道3:hACTB引物在293cDNA中的扩增(目标条带约200bp)图1 NHE-1在293中的表达中国现代医学杂志第20卷确认的NHE亚型,最先被发现于心肌细胞膜表面[1]。它以胞内一个H+,胞外一个Na+进行等分子比例的跨膜交换,排出细胞内H+,从而在维持细胞内pH稳定的同时调节细胞内渗透压和细胞体积[2]。本实验旨在构建人NHE-1基因miRNA干扰载体,采用Re-al-Time PCR的方法评价干扰效应,并根据NHE-1基因转录调控区、蛋白分子结构功能区筛选出最佳的干扰靶序列,为后续NHE-1基因腺病毒miRNA表达载体的构建及其在调控APP裂解相关酶类的功能研究奠定基础。1资料和方法1.1材料1.1.1主要试剂PCR试剂盒(Invitrogen);反转录试剂盒(TOYOBO);R...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国应用生理学杂志》2003年01期
中国应用生理学杂志

体外转染NHE-1核酶对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

血管平滑肌细胞大量增殖引起血管壁中层肥厚 ,同时伴有远端非肌性血管肌化是肺血管重构的主要特征 ,在低氧性肺动脉高压的形成和发展过程中起着非常重要的作用。有关肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)过度增殖的机制尚不完全明确 ,研究发现Na+ /H+ 交换器 (sodiumhydrogenexchanger,NHE 1 )在平滑肌细胞增殖中可能起“容许性”(per missive)作用[1] 。本室以往的实验证实[2 ] ,低氧性肺动脉高压大鼠的PASMCs细胞内pH(pHi)明显增高 ,同时发现其NHE 1mRNA表达亦明显增加 ,这表明在低氧性PASMCs增殖中 ,pHi可能也具有重要的调节作用。因此 ,抑制NHE 1表达有可能防止细胞内碱化 ,从而抑制PASMCs增殖。本研究将NHE 1的锤头状核酶 (hammerheadribozyme)转染体外培养的大鼠PASMCs,观察转染后细胞内NHE 1mRNA的表达、细胞摄钠活性、pHi...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国病理生理杂志》2001年03期
中国病理生理杂志

NHE-1与大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡

Na+ /H+ 交换器 (sodiumhydrogenexchanger,NHE)是存在于细胞膜上的一种离子交换蛋白 ,1:1地介导细胞内外氢与钠离子交换。NHE有 5个亚型 ,分别为NHE - 1、2、3、4和 5 [1] 。其中NHE - 1分布最为广泛 ,在调节细胞内pH(intracellularpH ,pHi)中起着重要作用。近年来的研究发现 :NHE - 1与血管平滑肌细胞增殖及凋亡有着密切关系[2 ] ,在细胞增殖的早期阶段往往出现Na+ /H+ 交换增强致使细胞内碱化 ,这种变化在血管平滑肌细胞增殖中起着“容许性”(permissive)作用 ;而细胞内酸化则可抑制细胞增殖 ,使其凋亡率增加。本研究拟探讨在低氧性肺动脉高压时 ,大鼠肺动脉平滑肌细胞pHi和NHE - 1mRNA表达的变化 ;并观察NHE - 1特异性抑制剂对经诱导细胞内酸化后的肺动脉平滑肌细胞凋亡的作用。材 料 和 方 法1 主要试剂及仪器BCE...  (本文共3页) 阅读全文>>