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应用噬菌体展示技术进行猪瘟病毒结构(糖)蛋白E2和E~(rns)中和抗原表位鉴定和比较

猪瘟病毒(CSFV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和边界病病毒(BDV)为黄病毒科瘟病毒属成员,其病毒结构、抗原性和遗传特性密切相关。CSFV囊膜结构(糖)蛋白E2(gp55)是诱导机体产生中和抗体及激发保护性免疫应答的主要抗原蛋白。蛋白结构模型预测其N-末端区域暴露于病毒粒子表面,而C-末端短肽区延伸并穿越病毒囊膜。囊膜结构(糖)蛋白E~(rns)/EO(gp48)具有RNA酶活性,在病毒增殖及中和病毒感染中发挥重要作用,是诱导机体产生保护性免疫应答的第二抗原蛋白。E2和E~(ns)与细胞表面受体的相互作用介导猪瘟病毒对细胞的感染过程。免疫过氧化物酶染色试验检测135株瘟病毒分离物结果表明:抗CSFV囊膜结构(糖)蛋白E2的单克隆抗体c24/10、a18、WH303及M1669,能识别目前已知的所有猪瘟毒株。而针对E~(ns)的单克隆抗体1B5,b4-22和24/16均仅能识别部分猪瘟毒株,提示其对应的表位在所有猪瘟毒株不是共  (本文共103页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国农业科学院
中国农业科学院

利用噬菌体展示技术鉴定猪瘟病毒E2蛋白抗原表位

猪瘟(classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一种高度接触性传染病,几乎遍及全世界(除北美洲和大洋洲外),死亡率高达80%~90%。该病被世界动物卫生组织(OIE)列入OIE疾病名录(OIE Listed diseases),为须申报的(notifiable)动物传染病。抗原表位,又称抗原决定簇,是抗原分子抗原性的基础。正确而详细地绘制抗原表位图谱对疾病的诊断、设计无毒副作用的多表位疫苗以及免疫治疗试剂等具有积极的意义。为深入了解CSFV的抗原结构,便于设计科学合理的疫苗和诊断试剂,我们对CSFV石门株(Shimen株)E2蛋白进行了抗原表位鉴定。本研究首先利用噬菌体随机12肽库对CSFV Shimen株E2蛋白单克隆抗体HQ06进行了3轮筛选,获得一致序列LFDGSNP,与E2蛋白氨基酸序列对比发现,此一致序列与E2蛋白N-端的B...  (本文共56页) 本文目录 | 阅读全文>>

《细胞与分子免疫学杂志》2009年12期
细胞与分子免疫学杂志

猪瘟病毒C株E~(rns)/E2嵌合基因表达蛋白单克隆抗体的制备及其生物学特性的鉴定

猪瘟(Classical swine fever,CSF;或Hog cholera,HC)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CS-FV;或Hog cholera virus,HCV)引起的猪的一种急热性致死性疾病。世界动物卫生组织(OIE)《世界动物卫生法典》将其列为A类疫病,给养猪业造成了巨大的经济损失。CSFV基因组为长约12.3~12.5kb的单股正链线性RNA,由一个开放性阅读框架(Openreading frame,ORF)及侧翼两个短的5′、3′端非编码区(Uncoding region,UCR)组成。ORF编码一长约4000个氨基酸的多聚蛋白,在病毒自身及宿主细胞编码的蛋白酶水解作用下,裂解为结构蛋白和非结构蛋白,自N末端到C末端依次为:Npro、C、Erns、E1、E2、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A及NS5B,其中,结构蛋白包括核衣壳(C)和3种囊膜糖蛋白...  (本文共4页) 阅读全文>>

中国人民解放军军需大学
中国人民解放军军需大学

猪瘟病毒E2蛋白单抗的制备、纯化及其抗原表位的初步研究

猪瘟病毒(Classcial Swine Fever Virus,CSFV)是危害养猪业最严重的传染病病原体之一。E2囊膜糖蛋白(简称E2)是CSFV最重要的保护性抗原,可以诱导机体产生中和性抗体。本实验应用E2基因在大肠杆菌中的表达产物和真核表达载体为免疫原制备了4株单克隆抗体,分别命名为A11、B2、E3和H6。并利用这4株单抗和以前的4株单抗(D5、D8、GB、GE)对E2蛋白部分抗原表位进行了初步的分析,总结如下:1 E.coli表达的mE2蛋白经纯化后免疫小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞以传统方法融合,经间接ELISA筛选,有限稀释法克隆3-4次,获得了1株分泌抗CSFV的McAb杂交瘤细胞株(H6)。将含E2基因的真核表达质粒pcDSW免疫小鼠,通过融合、筛选、克隆3-4次,获得了3株杂交瘤细胞株(A11、B2、E3)。2 ELISA试验及Western-Blotting试验均证明四株单抗可与CSFV反应。...  (本文共64页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国兽医药品监察所
中国兽医药品监察所

猪瘟病毒E2基因噬菌体展示多肽库的构建及表位研究

猪瘟(Classical Swine Fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起猪的高度致死性、接触性传染病。CSFV编码的结构蛋白中,囊膜糖蛋白E2是其主要的免疫原性蛋白,能够诱导机体产生中和抗体,是研制CSF诊断试剂和新型疫苗的首选靶蛋白。由于疫苗毒株和流行毒株之间在抗原特性和致病特性方面都存在着一些差异,而这些差异是否与CSFV的主要保护性抗原-E2蛋白有关,成为了人们关注的热点问题。业已证明,在E2蛋白上存在两个蛋白表位TAVSPTTLR和YYEP,以及一个模拟表位TTWKEYSH,还有一部分表位有待于进一步认识和定位。本研究选择CSFV石门株(SM)和疫苗株(HCLV)为代表株,分别扩增这两株病毒的E2基因,通过DNaseⅠ随机酶切得到20-125bp的小片段,采用噬菌体展示技术将其克隆入T7select415-1b载体,构建了CSFV SM株E2基因噬菌体...  (本文共64页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国病毒学》2004年06期
中国病毒学

猪瘟病毒E2蛋白表位分析及其单克隆抗体可变区cDNA测序

猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)为单股正链 RNA 病毒,为黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestvirus)主要成员,与同属的牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)、羊边界病病毒(Border disease virus,BDV)、长颈廘瘟病毒(Giraffe pestvirus)等,在病毒结构、抗原性和遗传特性等方面密切相关[1]。CSFV 囊膜表面结构糖蛋白 E2(gp55)是诱导机体产生中和抗体及激发保护性免疫应答的主要抗原蛋白,存在 A、B、C、D 四个不同抗原区,A 区进一步划分为 A1、A2、A3 亚区,仅针对 A1、B、C 抗原(亚)区的单克隆抗体对病毒具有中和作用,其中仅 A1 亚区在 CSFV 不同分离毒株间是保守的[2, 。研究发现: 4] E2 蛋...  (本文共7页) 阅读全文>>