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应用噬菌体展示技术进行猪瘟病毒结构(糖)蛋白E2和E~(rns)中和抗原表位鉴定和比较

猪瘟病毒(CSFV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和边界病病毒(BDV)为黄病毒科瘟病毒属成员,其病毒结构、抗原性和遗传特性密切相关。CSFV囊膜结构(糖)蛋白E2(gp55)是诱导机体产生中和抗体及激发保护性免疫应答的主要抗原蛋白。蛋白结构模型预测其N-末端区域暴露于病毒粒子表面,而C-末端短肽区延伸并穿越病毒囊膜。囊膜结构(糖)蛋白E~(rns)/EO(gp48)具有RNA酶活性,在病毒增殖及中和病毒感染中发挥重要作用,是诱导机体产生保护性免疫应答的第二抗原蛋白。E2和E~(ns)与细胞表面受体的相互作用介导猪瘟病毒对细胞的感染过程。免疫过氧化物酶染色试验检测135株瘟病毒分离物结果表明:抗CSFV囊膜结构(糖)蛋白E2的单克隆抗体c24/10、a18、WH303及M1669,能识别目前已知的所有猪瘟毒株。而针对E~(ns)的单克隆抗体1B5,b4-22和24/16均仅能识别部分猪瘟毒株,提示其对应的表位在所有猪瘟毒株不是共  (本文共103页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国农业大学
中国农业大学

猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白抗原表位的分析

猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine respiratory and reproductive syndrome virus,PRRSV)引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为特征的传染病。本研究利用噬菌体展示技术,结合ELISA和基因表达等技术对PRRSV结构蛋白的抗原表位进行了鉴定与分析,为PRRSV的结构蛋白免疫特性与功能研究以及表位疫苗的设计等奠定了基础。1.运用GoldenKey分子生物学软件对PRRSV BJ-4结构蛋白的抗原表位及其二级结构进行了分析和比较,从中筛选13段显示表位特征的氨基酸残基序列,用PCR技术扩增相应的核苷酸片段,将其插入到噬菌体表达载体M13KE,结果预测的13个表位可在噬菌体表面得以展示。2.利用PRRSV BJ-4阳性血清和鼠源抗重组结构蛋白抗体,采用间接ELISA方法对噬菌体展示的表位进行了鉴定。结果表明,在预测的13个抗原表位中,鉴定出7个表位。GP2a的a...  (本文共98页) 本文目录 | 阅读全文>>

《黑龙江畜牧兽医》2008年07期
黑龙江畜牧兽医

蛋白质B细胞抗原表位测定方法的研究进展

随着免疫学的发展和化学合成多肽技术的成熟,有选择地合成蛋白质中具有免疫原性的肽段,可有效刺激机体的细胞免疫和体液免疫。通过理论预测及试验测定等方法,可推测蛋白质B细胞的抗原表位。文章总结了近年来蛋白质B细胞抗原表位的常分析方法,现介绍如下。1抗原表位的概念抗原表位是指抗原分子中决定抗原特异性的特殊化学基团,也是抗原分子中能与相应抗体特异性结合的部位,又称抗原决定簇。根据抗原结合受体细胞的不同,可将抗原表位分为B细胞抗原表位和T细胞抗原表位,T细胞抗原表位往往仅为埋藏在蛋白质空间结构内部的疏水性肽段;而B细胞抗原表位则往往为亲水性肽段,一般位于抗原三维大分子的氨基酸长链折叠处。按照抗原表位结构的不同,又可将其分为线型抗原表位和构像型抗原表位,线型抗原表位是由顺序上连续的氨基酸组成的表位;而构像型抗原表位是由顺序上不连续的但空间上临近的氨基酸组成的表位。作为免疫细胞识别抗原并发生特异性免疫反应的物质基础,表位的性质、数目和空间结构决...  (本文共2页) 阅读全文>>

《国外医学(微生物学分册)》1995年05期
国外医学(微生物学分册)

确定病毒B细胞抗原表位的策略

病毒感染机体后,可诱生特异性的免疫为线性抗原表位,由5~8个紧邻的氨基酸残应答,产生相应的免疫球蛋白及细胞因子。免基组成。有研究表明:以变性蛋白或人工合成疫球蛋白的可变区可通过氢键,形成两个抗多肤等线性分子免疫动物,可诱生特异性抗原表位结合位点。杭原表位或以“锁一钥匙”体应答及制备单克隆抗体。这些抗体不仅可(I ock and key)方式,或以“诱导变构”(In一用于免疫学检测,有时亦具有较强的生物活duced一fit)方式与这些位点相结合.现已知,性。因此,确立可诱生中和抗体反应的线性抗通过自然感染所诱生的抗体分子可直接与天原表位对于亚单位疫苗的设计,具有重要意然蛋白中构型依赖性抗原表位结合。这类抗义。原表位可通过分子内或分子间的相互作用,目前,有关杭原表位确立的方法及策略使较远距离的氨基酸残基在空间上相互结有多种,下表归纳了当前主要的几种抗原表合,共同构成抗原表位。另一类扰原表位称之位确立技术及其所需的相关条件。 B细胞抗...  (本文共3页) 阅读全文>>

东北农业大学
东北农业大学

猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome PRRS)是一种以妊娠母猪繁殖失败和仔猪出现呼吸困难为主要特征的传染病。由于PRRSV以侵害免疫系统为主,且易发生变异,可造成持续感染,而且具有抗体依赖增强作用,致使对该病的诊断和预防带来了很大困难。而通过单克隆抗体技术对PRRSV抗原表位进行深入研究,不仅有助于了解PRRSV抗原结构与功能的关系,而且对该病的诊断以及设计安全有效的基因工程表位疫苗等具有重要的意义。本研究首先构建了含PRRSV CH-1a株各结构蛋白的重组表达载体pET30a-N、pGEX6p-rtM、pGEX6p-rtGP5、pET30a-GP4、pGEX6p-rtGP3和pGEX6p-rtGP2,并在大肠杆菌中进行了表达,利用PRRSV感染猪血清对表达产物进行Western blot分析,证实表达的六个融合蛋白都具有较好的反应活性。然后以PRRSV...  (本文共127页) 本文目录 | 阅读全文>>

《动物医学进展》2016年11期
动物医学进展

猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原表位研究进展

抗原表位(antigen epitope)是指抗原分子表面具有刺激机体产生抗体或致敏淋巴细胞并能被其识别的免疫活性区,又称抗原决定簇(antigenic determi-nant)。根据表位与受体细胞结合部位的差异,表位可分为B细胞抗原表位和T细胞抗原表位;根据表位结构不同,可分为连续抗原表位(又称线性表位,由肽链上连续氨基酸组成,主要是T细胞表位和部分B细胞表位)和不连续抗原表位(又称构象表位,由空间上相近但顺序上不连续的氨基酸组成,仅见B细胞表位)[1]。猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的,妊娠母猪发热、厌食及繁殖障碍(流产、早产、死胎、木乃伊胎),新生及断奶仔猪高病死率的呼吸道疾病。根据血清学和基因组特征分析,可将PPRSV分为欧洲型(代表株为LV株)和美洲型(代表株为VR2332株),两个PRRSV型在我国均有报道[2]。PRRSV基因组全长约为15kb,为单股正链RNA病毒,其...  (本文共3页) 阅读全文>>