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猪瘟病毒E2基因在大肠杆菌中的高效表达及其表达产物的制备

猪瘟病毒(classical swine fevev virus,CSFV)是严重危害养猪业的最重要的病原之一,E2蛋白是其主要的保护性抗原蛋白,因此是CSFV抗原性、抗原变异和血清学诊断抗原体外表达研究以及猪瘟(classical swine feve,CSF)亚单位标记疫苗研制的主要对象。本研究在大肠杆菌中高效表达了CSFV石门株E2基因。对表达的E2及mE2蛋白包涵体进行了复性和纯化,建立了复性和纯化方法。构建了CSFV石门株E2基因可溶性表达的重组质粒,并得到表达。结果如下:1.利用PCR突变技术对猪瘟病毒石门株的E2基因进行了改造,将改造后的基因克隆到表达载体pET-28a(+)上,构建了重组质粒pETE2(SW),转入至宿主菌BL21(DE_3)中,在IPTG的诱导下,重组菌可高效表达目的基因,表达量达菌体蛋白总量的28%。2.超声破菌分离表达的CSFV E2蛋白和mE2蛋白包涵体,用8mol/l尿素变性溶解,利用T  (本文共72页) 本文目录 | 阅读全文>>

《生物工程学报》2003年04期
生物工程学报

猪瘟病毒E2基因的定点突变、在大肠杆菌中的高效表达及表达产物的免疫原性

猪瘟病毒 (Classicalswinefevervirus ,CSFV)是黄病毒科 ,瘟病毒属的成员。CSFV引起猪具有高度传染性的疾病 ,并导致巨大的经济损失。猪瘟 (CSF)是影响我国养猪业最严重的传染病之一 ,血清学检测猪瘟病毒抗体是诊断猪瘟的重要工具 ,也是免疫猪抗体水平监测的主要手段。用于CSF抗体检测的主要方法是ELISA ,但目前国内ELISA所用的抗原为细胞培养的病毒。由于CSFV在细胞培养上滴度很低 ,致使用此法生产的CSF抗原产量有限 ,成本亦高 ,难以满足国内CSF诊断和免疫监测的需要。对于以常规方法难以得到的抗原 ,可以用基因工程的方法进行表达 ,获得重组抗原。由于大肠杆菌表达系统具有成本低廉、操作简单、易于培养、生产周期短 ,多数情况下均可获得高效表达等优点 ,因而大肠杆菌是目前应用最多的表达系统 ,也是生产抗原蛋白的首选表达系统。E2囊膜蛋白是CSFV主要的抗原蛋白 ,含有在CSFV高度保守的抗原决...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国畜禽种业》2017年08期
中国畜禽种业

猪瘟病毒感染防治

猪瘟是近几十年影响我国及全世界养猪业的重要流行病之一,尤其我国,猪存栏量超过世界总量的一半,由于发展水平有限,传统养殖模式和管理模式无法适应现在集约化和规模化生产,导致流行性疫病多发,猪瘟是其中之一,每年造成较大损失。下面就本病的防治和大家作一下交流。1猪瘟病毒简述猪瘟病毒(HCV)为黄病毒科瘟病毒属病毒,直径在40~50nm之间,遗传物质为单链RNA,大小约12kb,病毒外壳有囊膜,并包裹有糖蛋白,不同毒株抗原性差异较大,毒力相差也较大,但血清型方面科学界仍公认只有一种,这个特征使得临床上疫苗的应用比较稳定,免疫良好的猪群可抵御不同野毒的感染。猪日龄越小对病毒的抵抗力越弱,胚胎时期对病毒几乎无任何抵抗能力,这个特征使得对怀孕母猪免疫弱毒活疫苗时,一定要谨慎。猪瘟病毒对外界环境抵抗力弱,70℃的温度保持10min可杀灭绝大部分病毒,煮沸情况下瞬间即可杀死,但带毒的病猪肉存放数月后,病毒仍具有侵染力,这个特征表明病毒存活时间和存在...  (本文共2页) 阅读全文>>

《上海畜牧兽医通讯》2012年04期
上海畜牧兽医通讯

猪瘟病毒单克隆抗体制备及病毒荧光检测研究

猪瘟是由猪瘟病毒(Classical Swine fever virus,CSFV)引起的猪的一种高度接触性传染病,严重危害着全球养猪业。尽管我国的兔化弱毒疫苗在控制猪瘟方面起到了巨大作用,但我国和许多发展中国家的猪瘟流行仍然严重。分析其原因,猪瘟病毒和多种病原体的混合感染所导致的免疫功能低下是目前生猪死亡的主要因素〔1~4〕。因此,病原体的监督检测和感染机制的研究对于控制和消灭猪瘟的流行具有重要意义。猪瘟病毒的单克隆抗体是研究猪瘟病毒结构与功能、免疫感染机制不可缺少的最重要试剂〔5~8〕,更是免疫检测中的必需试剂。国内能够用于病毒功能性研究的杂交瘤细胞株多为进口,国内的好细胞株不多。许多用于猪瘟病毒检测的单克隆抗体仅仅局限于实验室研究〔9~11〕,而没有应用于临床生产实践中,应用于实验室检测猪瘟病毒的试剂盒多为进口,价格昂贵,很难普及。本研究的主要目的是大量筛选猪瘟病毒杂交瘤细胞株,为CSFV的检测和研究提供了试剂。1材料和方...  (本文共2页) 阅读全文>>

《动物医学进展》2012年10期
动物医学进展

猪瘟病毒分子生物学及检测技术研究进展

猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的猪的一种高传染性出血性疾病,流行范围广,致死率高,给养猪业带来了严重损失,在我国被定为一类传染病。我国于20世纪50年代研制成功的猪瘟兔化弱毒苗具有良好的免疫原性,对国际各国的猪瘟防控有着重要的贡献。但是,近年来,猪瘟在我国出现了新的流行特点,区域性大流行的情况少见,而零散式发生的情况多见;典型猪瘟病例少见,而非典型猪瘟病例常见;持续感染与隐性感染的问题较严重,免疫耐受和带毒综合征共存等现象较多见。这些新的流行特点是否与强大的免疫压力之下CSFV加快了主动变异有关,当前使用的传统疫苗是否还能很好地保护流行强毒株的攻击,这些问题都值得深入研究。一直以来,猪瘟的快速诊断与检测技术都是猪瘟综合防控措施中的重点,而病毒的变异又给猪瘟防控提出了新的挑战。因而,对CSFV的分子生物学进行研究,深入了解病毒的各部分结构和功能,进而改进已有技术或研发新的检测...  (本文共6页) 阅读全文>>

《中国畜牧兽医》2011年12期
中国畜牧兽医

猪瘟病毒感染后对机体免疫系统的影响

猪瘟(classical swine fever,CSF)是一种由猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)引起的急性、高度接触性传染病。猪瘟分布广泛,全球每年由该病造成的经济损失数亿计。1990年比利时暴发了113次CSF,受感染猪多达100万头,直接经济损失2.7亿美元;1997年荷兰暴发猪瘟,3个月内处理病猪1000万头,占养猪总数的2/3,经济损失高达20亿美元;1998年在德国、西班牙、澳大利亚等国暴发的猪瘟造成了1240万头动物感染,经济损失高达23亿美元(Vandeputte等,2001)。猪瘟病毒属于黄病毒科、瘟病毒属,同属成员还包括牛病毒性腹泻黏膜病毒1型(BVDV-1)、牛病毒性腹泻黏膜病毒2型(BVDV-2)、羊边界病病毒(BDV)。野猪和家猪是猪瘟病毒唯一的自然宿主。CSFV主要通过口鼻传播,病毒的复制主要在扁桃体,随后转移到外围淋巴结,在局部淋巴结复制后到达外周血液,继...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国动物传染病学报》2010年03期
中国动物传染病学报

两种荧光定量PCR方法检测猪瘟病毒的比较及应用

猪瘟(classical swine fever,CSF)是猪的一种高度接触性传染病[1],其病原为黄病毒科、瘟病毒属的猪瘟病毒(C lassical swine fever virus,CSFV)[2]。由于各国对猪瘟的防治工作非常重视,一些国家和地区已先后消灭猪瘟。但随着目前养猪业的集约化和生猪贸易的全球化,猪瘟对全球养猪业仍构成严重威胁。近年来,我国猪瘟的流行和发病特点发生了很大变化,流行形式以地方性散发流行为主,症状由典型转变为非典型温和型猪瘟,表现为亚临床症状,如:母猪繁殖障碍,新生仔猪先天性感染造成免疫抑制、成年猪隐性带毒等[3-5]。这些新的流行和发病特点对快速、及时和准确检测该病提出了更高的要求。国内外对CSFV的常规检测方法有病毒分离鉴定、免疫荧光、血清学检测和RT-PCR等。但这些方法在时效性、灵敏性和特异性等方面均存在一些不足[6-7]。近年来发展起来的荧光定量PCR技术以其灵敏度高、速度快、特异性强等优点...  (本文共7页) 阅读全文>>