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人类睾丸生殖细胞凋亡相关新基因TSARG2及小鼠同源基因SRG2的分子克隆及功能的初步研究

睾丸生殖细胞的凋亡是一个由多基因参与的复杂过程。目前有关睾丸生殖细胞凋亡的研究尚处于起步阶段,迄今为止,尚未克隆出特异性的睾丸生殖细胞凋亡基因。而克隆新的特异性的睾丸凋亡相关基因是进一步了解生殖细胞凋亡机制和生物学过程的关键所在,对阐明精子发生的生理、病理具有重要意义。在前期的研究工作中,本室姜宏等通过建立小鼠隐睾模型,运用抑制消减杂交法(Suppression subtractive hybridization,SSH)克隆出24个小鼠睾丸生精细胞凋亡相关基因的EST,并在GenBank中登录。本研究利用巢式PCR技术和人类基因组草图搜索法,从上述EST出发,于2000年6月成功地克隆了人类TSARG2基因及小鼠同源基因SRG2,并对其功能进行了初步研究。本研究分为三个部分,其主要实验方法及实验结果如下:第一章 TSARG2基因的克隆与序列分析从已获得的在隐睾和正常睾丸对照中表达量有明显差异的EST片段(BE644542)入  (本文共138页) 本文目录 | 阅读全文>>

《重庆医学》2017年22期
重庆医学

小鼠pMSV-Slfn5-GFP表达质粒构建及基因结构分析

睡眠因子(Schlafen,Slfn)基因家族是近年来发现的一类新的细胞周期调节基因,该家族基因在小鼠中由10个成员组成(Slfn1、1L、2、3、4、5、8、9、10和14)[1-2]。Slfn5是Slfn家族第三组的成员之一,它可影响多种细胞的生物学行为,但在不同的细胞中,其作用不同:(1)在NIH 3T3成纤维细胞中,通过异源性过表达Slfn5基因,结果发现成纤维细胞的生长并未受到影响[3];(2)在人类恶性黑色素瘤细胞中,通过基因干扰的方法沉默Slfn5的表达,结果显示其有双重的作用,不仅促进恶性黑色素瘤细胞的不依赖支持物的生长和克隆形成能力,而且还增强该细胞在三维胶原中的侵袭能力[4];笔者的前期研究,分离培养5~7d的大鼠骨髓源性内皮祖细胞,通过RT-PCR检测Slfn5基因的表达,结果发现在EPCs细胞有Slfn5基因的表达,是否Slfn5基因影响内皮祖细胞的功能,目前仍不清楚。为了研究Slfn5基因对内皮祖细胞功...  (本文共3页) 阅读全文>>

《生物工程学报》2017年10期
生物工程学报

基因编辑技术研究进展及其在苜蓿等豆科饲草作物中的应用

近年来,基因编辑技术的快速发展为生物学大的一种优质豆科饲料作物。苜蓿的产量和品研究开辟了新的研究领域。基因编辑技术是基于质改良是我国当前饲料业、畜牧业和奶业发展序列特异核酸酶在基因组水平上对靶标基因进行的重大迫切需求。与水稻、小麦、玉米、大豆定向、准确修饰的一种新兴的基因工程方法[1-3]。等主要粮食作物和经济作物相比,目前苜蓿等序列特异性核酸酶通过识别和锚定基因组上的饲草作物功能基因组学研究尚处于起步阶段,靶标位点序列,对目标DNA进行切割产生双链相应的基因功能研究和分子遗传改良的研究工断裂(Double strand breaks,DSBs),引起生物体具和技术手段有限,极大地限制了饲草作物分内发生同源重组(Homologous recombination,子育种技术的应用与发展。本文简要回顾ZFN、HR)或非同源末端连接(Non homologous endTALEN、MGN以及CRISPR/Cas9等基因编辑技术join...  (本文共11页) 阅读全文>>

《青苹果》2016年07期
青苹果

基因表达载体相关问题解读

基因工程操作的核心是构建基因表达载体,围绕表达载体的考题有逐年增多的趋势。下面从不同的角度对表达载体进行解读。_一、基因表达载体的_般结构及各部分的功能插人子II表达载体||I终止子复制原点脣\抗生素v抗性基因Z如上图,基因表达载体一般由S的基因(插人基因)、启动子、终止子、标记基因(抗生素抗性基因)等结构组成。启动子是复制原点附近的一段有特殊结构的DNA,位于基因的首端。启动子和特定的物质(如激素)作用后,通过一系列复杂的正反馈机制,激活复制原点(复制原点通常与某些酶结合)。终止子位于基因的尾端,也是一段有特殊结构的DNA。终止子相当于一盏红色信号灯,使转录或复制在所需要的地方停止下来。复制原点处的A和T特别多,氢键相对较少,不稳定,DNA容易解旋,因此易与引物结合,成为转录的起点或复制的起点。抗生素抗性基因作为标记基因,其作用是鉴别受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。标记基因又称报告基因,抗生素抗性...  (本文共2页) 阅读全文>>

《中国生物工程杂志》2013年01期
中国生物工程杂志

基于2A肽策略构建多基因表达载体的研究进展

当前,运用可靠的多顺反子载体实现多个外源基因的有效传递,使外源基因对细胞或微生物进行遗传学改造、修饰,在生物医药[1-3]、农牧食品[4-6]等研发方面具有重要意义。现有的多基因共载体构建策略包括mRNA剪切策略、内部启动子策略、融合蛋白策略及蛋白酶策略等[7-9]。这些策略最主要的不足之处在于载体容纳能力有限,一般只适合两个基因共表达。另外,多基因在同一载体上表达时其蛋白活性及表达效率不及单基因表达载体。近来应用较多的内部核糖体进入位点(internal ribosomal entry sites,IRESs)策略,因其表达的是非偶联的蛋白,克服了融合表达活性低及蛋白酶策略要求准确的蛋白定位的缺点。然而,IRESs本身结构含500个核苷酸,在容量有限制的腺病毒相关载体上就限制极大。同时,IRESs上下游蛋白表达情况极不平衡。下游蛋白表达量约为上游蛋白的10%~50%。此外,IRESs本身活性不易调节,且对其他表达蛋白的活性产生...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国老年学杂志》2013年17期
中国老年学杂志

脂肪酸合成酶系多基因表达载体的构建

在多不饱和脂肪酸(PUFAs)合成过程中最重要的一类酶为脂肪酸去饱和酶,它们以其自身的酶活性特异地在碳链上的特定位置引入双键,从而产生去饱和作用。其中,△6去饱和酶以18∶2n-6和18∶3n-3以及少量的16∶1n-7和18∶1n-9为反应底物,是参与PUFAs生物合成的第一个限速酶;△5去饱和酶的反应底物为20∶3n-6和20∶4n-3以及少量的18∶2n-7和20∶2n-9,该酶对ω-3PUFAs具有更强的酶活性,且反应速度高于△6去饱和酶。另一类重要的酶类为脂肪酸延长酶,它们通过其延长酶活性使较短的脂肪酸变为更长的脂肪酸〔1〕,其中包括Elovl-2和Elovl-5。Elovl-5可以延长一些单不饱和脂肪酸,但主要是延长γ-亚麻酸(18∶3n-6),而Elovl-2主要延长22C的PU-FAs〔2~5〕。在哺乳动物中,Elovl-2和Elovl-5延长酶与△5和△6去饱和酶一道作用可产生ω-6及ω-3PUFAs,如花生四...  (本文共3页) 阅读全文>>