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变形链球菌葡聚糖结合蛋白B基因克隆、表达及免疫防龋实验研究

龋病是一种多因素引起的细菌感染性疾病,变形链球菌是其主要致病菌。葡聚糖结合蛋白是变形链球菌的主要致龋毒力因子之一,在细菌的黏附和聚集,促进菌斑的形成中起着重要作用。免疫防龋是目前龋病预防研究的热点之一。基因疫苗是上世纪90年代发展起来的一种诱导免疫治疗的新方法,与减毒活疫苗、灭活疫苗、重组亚单位疫苗等疫苗相比,它具有长期稳定表达抗原蛋白,在宿主体内表达的蛋白与天然构象更为接近,抗原性更强等优点。目前,基因疫苗免疫防龋仅限于对变形链球菌表面蛋白、葡糖基转移酶、葡聚糖结合蛋白A的研究,关于利用葡聚糖结合蛋白B构建防龋基因疫苗的研究国内外还未见报道。已有的研究证实,葡聚糖结合蛋白B具有良好的免疫原性,但能否作为免疫防龋的候选基因疫苗,正是本研究所要解决的问题。本研究从变形链球菌S. mutans Ingbritt基因组DNA中克隆出gbpB的全长编码区基因片段,进行原核表达,获取大量纯化蛋白,同时制备抗GbpB的特异性抗体;构建Gbp  (本文共99页) 本文目录 | 阅读全文>>

第四军医大学
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变形链球菌葡聚糖结合蛋白B功能区片段克隆、原核表达及防龋初步研究

龋病是人类最常见的细菌感染性疾病之一,变形链球菌是公认的龋病的主要致龋菌。表面蛋白(PAc)、葡糖基转移酶(GTFs)、葡聚糖结合蛋白(Gbps)等是变形链球菌重要的毒力因子。免疫防龋是目前防龋研究的热点之一。葡聚糖结合蛋白作为变形链球菌表面的膜受体,能够与吸附于获得性膜内的葡糖基转移酶所合成的葡聚糖特异性结合,在细菌的初始粘附,集聚及菌斑的成熟过程中起重要的作用。葡聚糖结合蛋白B(GbpB)由于其良好的免疫原性,在免疫防龋研究中受到越来越多的重视。但是目前国内外的研究多集中于GbpB的全长基因,对于GbpB功能区基因片段的研究尚不多见。本研究通过PCR技术克隆GbpB功能区基因片段,并将其克隆至原核表达载体pET-DsbA中,并通过蛋白重组融合表达技术使其在大肠杆菌中表达,成功得到其融合蛋白并进行纯化,用纯化的功能区蛋白进行葡聚糖结合功能实验并免疫SD大鼠观察其免疫原性及防龋效能。本研究分为两个部分:第一部分:葡聚糖结合蛋白B...  (本文共71页) 本文目录 | 阅读全文>>

第四军医大学
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变形链球菌葡聚糖结合蛋白D基因克隆表达及功能初步研究

龋病是最常见的感染性疾病之一,变形链球菌(Streptococcus mutans,S.mutans)是人类龋病的主要病源菌。对其致龋机理的研究是了解龋病病因的关键;对其致龋过程的阻断,是龋病预防学研究的重要目标。变形链球菌的主要致龋过程包括了黏附、产酸和耐酸这三个重要环节,通过葡聚糖介导的黏附、聚集并形成菌斑生物膜是其致龋的基础。研究发现,葡聚糖结合蛋白(Glucan-binding proteins,GBPs)在这一过程中起着举足轻重的作用,是变形链球菌重要的致龋毒力因子之一。目前已发现变形链球菌拥有4种结构各异、功能不同的GBPs。通过近年来对GbpA、B、C的研究显示GBPs的功能涉及生物膜结构、致龋毒力的改变、细菌的黏附和聚集,以及作为免疫防龋的免疫原等多个方面,揭示了这一蛋白家族的重要意义。葡聚糖结合蛋白D(Glucan-binding protein D,GbpD)是这一家族的新成员,它是2002年变形链球菌全基因...  (本文共121页) 本文目录 | 阅读全文>>

第四军医大学
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远缘链球菌细胞分裂蛋白ftsK功能的初步研究

龋病是威胁人类健康人类三大非传染性疾病之一,其实质是细菌感染性疾病。目前防龋的研究主要集中在链球菌在牙面的粘附、聚集及增殖机理几个环节进行,针对这几个环节,人们在抗菌制剂,抗菌药物,抗菌植物,免疫防龋等方面做了大量的工作。但对致龋菌本身增殖过程中基因调控机理尚研究较少,细菌增殖过程中的防龋研究还不深入。本研究从远缘链球菌基因组中克隆到细胞分裂蛋白ftsK基因序列,在大肠杆菌中进行了表达与纯化,并制备了抗体;然后使ftsK在远缘链球菌中过表达,观察对其生长的影响;最后根据远缘链球菌ftsK基因序列设计引物,增加酶切位点,克隆出ftsK内部一段基因,体外构建ftsK基因敲除自杀载体pVA9812,利用同源重组构建了ftsK基因失活菌株,并观察其生长的情况。为进一步研究细胞分裂蛋白相关基因ftsk在远缘链球菌分裂过程中的作用作了有益的尝试。本研究分为以下三个部分:一、远缘链球菌ftsK基因克隆、蛋白表达和抗体制备登陆Genbank,根...  (本文共98页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中华口腔医学杂志》2006年05期
中华口腔医学杂志

关于免疫防龋

目前,龋病仍是威胁人类口腔健康的全球性问题,寻求一种简便、经济、有效的防龋方法是众多龋病研究者追求的目标。免疫防龋研究已有40年的历史,积累了大量的理论与实践成果,并且还在不断发展。一、免疫防龋的思路上世纪60年代,大量流行病学和病因学研究显示,变形链球菌(以下简称变链菌)是人类主要的致龋微生物,它在口腔中的定植与龋病的发生密切相关。1965年,Thomas及其同事报道IgA系统是唾液中首要的特异性免疫成分。以上两个结论对免疫防龋研究具有极为重要的意义,它们涉及到疫苗设计中的两个关键问题:致龋的病原体是什么?免疫系统的哪部分起作用?经过几十年的大量研究,一些重要的发现为免疫防龋奠定了理论基础。第一,变链菌和茸毛链球菌被公认为是主要的致龋菌,它们能够黏附于牙面,具有产酸和耐酸的致龋特性。变链菌的表面蛋白抗原AgⅠ/Ⅱ(PAc,P1)、茸毛链球菌的细胞表面蛋白抗原SpaA(PAg)、它们的葡糖基转移酶(glucosyltransfe...  (本文共3页) 阅读全文>>

《广东牙病防治》1980年10期
广东牙病防治

霍乱毒素与免疫防龋

霍乱毒素与免疫防龋湖北医科大学口腔医学院(430070)刘建国林红综述樊明文凌均启审校霍乱毒素(choleratoxin,CT)是霍乱弧菌产生的一种热不稳定性毒素,由结构和功能不同的A、B两个亚单位组成。A亚单位是毒素活性亚单位,B亚单位(choleratoxinBsub-unit,CTB)是连接亚单位,能与有核细胞表面神经节苷脂GM1受体特异性结合,由五条相同的多肽链以非共价键方式联结成一个五聚体环[1]。CT具有特殊的免疫原性和强烈的免疫增强作用,已被广泛应用于各种抗病疫苗的研究中。本文就CT的免疫学特性及其在免疫防龋研究中的应用做一综述。1.CT的免疫学特性1.1.免疫增强作用Russel等[2]将变形链球菌表面蛋白抗原Ⅰ/Ⅱ(AgⅠ/Ⅱ)与CT一起免疫小鼠,观察到明显的粘膜和系统免疫反应,而单独用相似剂量甚至更大剂量的AgⅠ/Ⅱ却无明显抗体反应。Lee等[3]将螺旋体抗原与CT+CTB、仅加CT或CTB免疫动物后,诱发了...  (本文共2页) 阅读全文>>

《牙体牙髓牙周病学杂志》2012年07期
牙体牙髓牙周病学杂志

免疫防龋研究现状

根据特异性抗体来源,免疫防龋可分为防龋疫苗主动免疫和被动免疫防龋两种途径。1主动免疫防龋主动免疫防龋是以人工接种的方法给机体输入致病的特异性抗原,激发机体的免疫反应,产生与之相对应的特异性抗体,中和致龋菌的毒性因子。用于主动免疫的预防生物制品称为防龋疫苗,传统的防龋疫苗主要是全菌疫苗和亚单位疫苗。由于全菌疫苗诱导的抗体可与心内膜发生交叉反应,未被采用。纯化的亚单位疫苗虽不会引起心脏交叉反应,并可抑制致龋菌的粘附、定植[1],但其免疫原性较弱,需皮下、鼻内等多种途径联合免疫才能激发有效的免疫应答。近年来,已研究出新型防龋疫苗,主要包括基因工程重组疫苗、合成肽疫苗、转基因植物疫苗和DNA疫苗。1.1基因工程重组疫苗基因工程重组疫苗是利用基因重组技术,将PAc、SpaA、GTF等毒性因子的编码基因片段与质粒载体重组后,置入细菌、酵母等受体细胞,使之携带和表达特异性蛋白抗原。常用的载体菌有减毒鼠伤寒沙门菌和乳链球菌。胡晓莉等[2]用携带...  (本文共2页) 阅读全文>>